大鼠肝脏金属硫蛋白的分离纯化和金属硫蛋白亚型-Ⅱα结构域片段的制备及其核磁共振鉴定

Wistar雄性大鼠经腹腔注射CdCl_2诱导其肝脏合成金属硫蛋白。取鼠肝,先经匀浆、热变性、乙醇-氯仿萃取、丙酮沉淀等步骤,后由Sephadex G-75、DEAE-52柱层析,得金属硫蛋白的两亚型Ⅰ和Ⅱ。经原子吸收光谱测定每蛋白分子含有5个镉和2个锌。用枯草杆菌酶割法制备并分离了金属硫蛋白亚型Ⅱ的α结构域片段。还用NMR研究了金属硫蛋白的两个亚型及所得的α结构域片段。     

大鼠肾脏汞结合金属硫蛋白的联用技术表征研究

通过凝胶色谱(SEC)及反相液相色谱(RPC)分别与电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)和电喷雾电离质谱(ESI-MS)联用的技术，对灌喂HgCl₂大鼠的肾组织中诱导的多金属结合金属硫蛋白(MT)的结构进行表征分析。通过SEC-ICP-MS曲线上的金属信号及紫外检测的MT光谱吸收特征，可确认组织提取液中MT在色谱曲线上的位置。与对照组相比，灌喂HgCl₂大鼠肾中Hg-MT的诱导量显著增加，与此同时，Cu-MT在染毒组的诱导量也相应增加，说明MT在染汞大鼠肾脏中起着对汞的解毒和对铜的调节作用。MT样品提取物经葡聚糖凝胶(G-75)柱分离纯化并用透析法脱盐后，用细内径反相色谱柱分离，进行梯度洗脱，并与ESI-MS联用，可获得总离子流色谱图及与色谱峰对应的质谱图，通过对质谱信号的解析及参考脱金属MT构型的有关报道，对汞诱导大鼠肾组织MT的不同亚型和次亚型分子结构进行推断。结果证明，在灌喂HgCl₂大鼠的肾组织中存在着一系列汞结合的MT形态。     

金属硫蛋白的聚合反应动力学

金属硫蛋白(Metallothionein,简称MT)是一类低分子量(哺乳动物MT的分子量为6500)、富含半胱氨酸(一般占氨基酸残量的30％)且具有高度可诱导性的金属结合蛋白。关于其结构与功能的研究是当今化学、生物学和临床医学等领域的重要课题之一。但是,有关各种生物MTs水溶液的热力学稳定性的研究尚未见报道。本文通过对在pH 7.40、4℃下放置不同时间的家兔肝脏(Cd,zn)_7MT水溶液进行HPLC分离,首次观察到MT在水溶液中的缓慢聚合现象,得到聚合反应的表观二级反应速率常数,发现MT-2比MT-1更易聚合。     

稀土元素与金属硫蛋白作用的研究

稀土元素与金属硫蛋白作用的研究黄仲贤，郑起，高红英，顾伟强，刘芳（复旦大学化学系，上海，２００４３３）关键词稀土元素，金属硫蛋白，运铁蛋白金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）是广泛存在于动、植物体内的一类重要的重金属结合蛋白，它能结合Ｃ...     

金属硫蛋白的分离与纯化

金属硫蛋白(MT)是一类低分子量、高巯基含量,能大量结合重金属离子的蛋白质.本文从诱导剂的注射次数、家兔体重以及不同诱导剂等因素对家兔体内金属硫蛋白含量的影响进行了分析.金属硫蛋白氨基酸组分分析结果与文献报道一致.利用精品生产工艺对金属硫蛋白粗品进行纯化,结果令人满意.     

大鼠金属硫蛋白晶体堆积形式的理论研究

考虑到蛋白质在结晶过程中溶液和晶体之间的动态平衡，蛋白质在溶液中的聚合状态决定了晶体堆积的最小单元。通过动态光散射实验以及计算机模拟，对大鼠金属硫蛋白亚型Ⅱ和兔肝金属硫蛋白亚型Ⅰ和Ⅱ的聚合物形式进行了比较，可以确定大鼠金属硫蛋白亚型Ⅱ在结晶条件下的缓冲液中应该以四聚体而不是二聚体形式存在。通过考察晶体的模型也可以发现，晶体的确可以通过四聚体的形式堆积得到，用四聚体堆积模型可以对晶体堆积作出更为合理的解释。     

兔金属硫蛋白的分离与纯化

兔皮下注射ＣｄＣｌ２诱导金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，简称ＭＴ），取肝脏匀浆，用乙醇─氯仿混合液萃取后经ＳｅｐｈｄｅｘＧ－５０柱分离，得到混合型ＭＴ．进一步用纤维素弱碱性阴离子交换树脂进行拆分，并在ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５柱上脱盐，得到ＭＴ－１和ＭＴ－２两种亚型．经氨基酸组咸、凝胶电泳及ＨＰＬＣ柱层析等分析表明，所得的两种亚型具有高度的均一性．     

锌,镉及金属硫蛋白在大鼠前列腺的定位研究

测定了Wister大鼠前列腺不同部位锌、镉含量，发现背侧叶、背前叶及腹叶含锌量依次为890．0±80．2、294.0±32.5和35.8±6．7μg／g干组织，含镉量依次为0.257±0．030、0.128±0．012和0．060±0．009μg／g干组织。各叶之间锌含量有显著性差异（P＜0.01），镉含量的差异具有统计学意义（P＜0．05），而且各叶中锌的含量明显高于镉。免疫组化测定将金属硫蛋白定位于腺体上细胞核和细胞液中，各叶均为阳性，其强度依次为背侧叶最强，背前叶其次，腹叶最弱，与锌、镉分布一致。     

钴(Ⅱ)与金属硫蛋白的反应

研究了Ｃｏ（Ⅱ）和金属硫蛋白反应的动力学，发现反应分三段进行，由此得到了不同条件下各段对应的假一级反应速率常数。假设金属硫蛋白中每个金属结合２０／７个ＳＨ基团，用盐酸滴定ＣｏＴｈ（ｔｈｉｏｎｃｉｎ）和Ｃｏ７Ｔｈ，根据它们的紫外光谱特征波长处吸收值降至５０％时的ＰＨ，分别又得到它们的表观平均稳定常数。     

大体积样品堆积-毛细管电泳-紫外检测分析鼠肝中不同亚型金属硫蛋白

制备了均匀稳定的聚丙烯酰胺涂层毛细管,有效抑制了毛细管内壁对金属硫蛋白(MT)的吸附,大大提高了MT的分离度和分离重现性。基于此,建立了大体积样品堆积-毛细管电泳-紫外检测法(LVSS-CE-UV)分析鼠肝中MT的新方法。在最优化的条件下,该方法对两种MT亚型(MT-1/2)的富集倍数分别为13、11倍,检出限分别为0.80、1.01μg·m L~(-1)。将所建立的LVSS-CE-UV方法用于经Cd~(2+)、Zn~(2+)诱导的Sprague Dawley大鼠肝脏中MT-1/2的定量分析,结果表明经Cd~(2+)、Zn~(2+)诱导的鼠肝内均检测出MT-1/2。其中,经Zn~(2+)诱导的鼠肝内MT-1与MT-2的含量分别为31.9、24.3μg·g~(-1);Cd~(2+)诱导组的MT-1与MT-2分别为15.9、31.2μg·g~(-1)。     

兔肝金属硫蛋白亚型异构体的高效液相色谱分离与ESI-MS,MALDI-TOF-MS鉴定

由于金属硫蛋白(MT)基因的多态性,决定不同亚型的MT异构体的存在,MT亚型异构体的结构是MT功能研究的基础.通过离子交换柱可将MT分成MT-1和MT-2两个异构体,用不同条件的反相高效液相色谱(RP-HPLC)可将MT-1和MT-2分成不同的亚型异构体,并利用MALDI-TOFMS和LC-ESI-MS对比确定了它们的分子量.结果表明,兔肝MT在不同的pH条件下分离得到不同分子量的亚型异构体.在酸性条件下,MT-1可分为2个主要亚型异构体,分子量分别为6149.0和6244.5,而MT-2主要分为3个亚型异构体,分子量分别为6149.0,6244.0和6127.0.MT-1和MT-2有2个亚型异构体分子量相同的异构体存在.在酸性条件下,MT-1的2个异构体及MT-2分子量为6127的亚型异构体可稳定存在.     

金属硫蛋白溶液聚合状态的研究

通过动态光散射实验首次证明了兔肝金属硫蛋白亚型 和 在不同的缓冲体系中不仅仅是以二聚体的形式 ,而且是以多种聚合形式存在[1] .深入考察金属硫蛋白在溶液中的聚合形式对于研究金属硫蛋白的结构和功能都具有非常重要的意义 .我们通过计算机模拟 [1] 比较系统地研究了各种因素对金属硫蛋白聚合的影响 .结果表明 ,在溶液聚合的分子识别过程中可由多种因素共同调控金属硫蛋白 ,这些因素主要包括静电相互作用、疏水性相互作用和溶液中阴阳离子等 .通过这些因素的综合分析 ,首次对兔肝金属硫蛋白在溶液中多种聚合形式的形成机制及相应的分子…     

线扫极谱法快速测定金属硫蛋白

本文报道了用线扫极谱法快速测定动物组织（肝，肾等）中金属硫蛋白方法。动物组织经匀浆，加热，离心后浆上清液直接加入钴氨缓冲液中，记录扫描图谱，由－１．４６Ｖ（ｖｓ．ＳＣＥ）左右处峰高求得金属硫蛋白浓度，并与常用的镉／血红蛋白饱和法进行了比较，本法显示了可靠，快速，和适用范围广之特点。