基于固体酶催化反应电化学测定酶含量

提出了以固体辣根过氧化物酶(HRP)对过氧化氢氧化邻苯二胺的催化作用为基础的测定HRP及其标记物的电化学方法.测定中以Au-Pt/PAN/GCE为工作电极,并详细叙述其制备过程.将一定浓度的HRP按规定方法固定在上述修饰电极上制得HRP/Au-Pt/PAN/GCE修饰电极,将此电极浸入含5.0×10-3mol·L-1邻苯二胺及2.5×10-3mol·L-1过氧化氢的磷酸盐缓冲溶液(pH 5.0)中,反应10 min后将电极取出,记录溶液中酶催化反应产物的方波伏安峰及峰电流.结果表明:酶催化反应前,底物在工作电极上于-0.488 V(vs.SCE)处有明显的还原峰,在酶催化反应后,在-0.584 V处出现一个更大的还原峰,电位负移160 mV,且峰电流明显增大.峰电流值(Ip)与修饰在Au-Pt/PAN/GCE电极上的HRP的含量在1.0×10-2～2.0×102μg·L-1之间呈线性关系,方法的检出限(3S/N)为3.0 ng·L-1.     

OAP-H2O2-HRP酶促产物的固体电极法研究及应用

采用电化学方法和紫外-可见光谱法对邻氨基酚(OAP)-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)酶联免疫分析体系的反应产物进行了较为详细地研究.紫外-可见光谱实验表明HRP的加入极大地催化了H2O2氧化OAP的反应.循环伏安实验结果表明,其酶促产物在玻碳电极上发生可逆的氧化还原反应,峰电流与扫描速率的平方根成线性关系;微分脉冲伏安曲线表明酶促产物在-0.336 V左右(一8.0 B-R缓冲溶液中)产生了1个峰形良好的还原峰,峰电流随HRP浓度的增大而增大,借助此还原电流可用于测定HRP.用微分脉冲伏安法对酶促产物的测定条件进行了优化.在最佳条件下测定游离HRP的线性范围为8.0×10-11～4.0×10-9-g/mL.检出限为6.9×10-11g/mL.     

以OT为底物固体电极伏安法测定辣根过氧化物酶及其标记物的研究

以玻碳电极为工作电极研究了邻联甲苯胺(OT)为底物微分脉冲伏安法测定辣根过氧化物酶(HRP)及其标记物的方法。HRP能够催化H2O2氧化OT,其反应产物在玻碳电极上-0.58V(vs.Ag/AgCl)左右被还原产生一个灵敏的还原峰,还原峰电流随着酶浓度的增大而增大,借助此还原电流可以测定HRP,并进而可用于以HRP为标记物的酶免疫分析。对酶催化反应条件和酶催化反应产物的测定条件进行了详细的研究,在最佳实验条件下测定游离HRP的线性范围是2.0×10-9～4.0×10-8g/mL,检出限为1.6×10-9g/mL;测定游离的酶标记物(IgG HRP),稀释范围为1∶2000～1∶400000,最大稀释比为1∶400000。     

MAP-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析新体系的光谱及电化学研究

提出了间氨基酚(MAP)-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系.本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测HRP催化H2O2氧化MAP的产物,用于游离HRP和各种HRP标记物的测定,灵敏度均高于经典的ELISA显色光度法.测定游离HRP的线性范围为1.0×10-8～1.0×10-6g/L,检测限达3.8×10-9g/L.制备出了HRP催化H2O2氧化MAP的产物纯品,并应用电化学分析,高效液相色谱,元素分析,紫外-可见光谱,红外光谱,1H核磁共振谱,13C核磁共振谱及质谱等技术对体系酶促反应进行了深入的研究.在选择的酶促反应条件下,生成的产物为2-氨基-5-[(3-羟苯基)氨基]-2,5-环己二烯基-1,4-二酮.提出了酶催化反应机理及其产物的电极还原过程.     

OT-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析新体系

本文首次提出了邻联甲苯胺(OT)-H2O2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系。本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测HRP催化H2O2氧化OT的产物, 用于游离HRP和各种HRP标记物测定, 灵敏度比经典的ELISA光度法分别高两个至四个数量级。测定游离HRP的检测限达到1.8×10^-^1^2 g/mL, 线性范围为5.0×10^-^1^2-1.0×10^-^8 g/mL。对此伏安酶联免疫分析新体系的偶合反应机理及电极还原过程也进行了详细的研究。     

头孢氨苄在碳糊电极上的电化学行为及其分析研究

用循环伏安法和线性扫描伏安法研究了头孢氨苄在碳糊电极上的电化学行为,考察了不同电解质溶液、pH以及扫描速率等的影响。实验表明:在2.0 mol·L-1HCl支持电解质中,头孢氨苄的降解产物在-0.45 V(vs.SCE)处的电化学还原反应为2电子与2质子参加的受吸附控制的不可逆过程。还原峰电流与头孢氨苄的浓度的平方根在1.8×10-8～3.0×10-4mol·L-1范围内呈良好的线性关系,回收率在95.7%～101.5%范围,检出限(S/N=3)为1.0×10-8mol·L-1。并探讨了头孢氨苄在电极上的反应机理。     

纳米二氧化铈修饰碳糊电极线性扫描伏安法测定苯酚

在0.01mol.L-1硼砂溶液(pH 9.18)中,用纳米二氧化铈修饰碳糊电极作为工作电极,线性扫描伏安法测定苯酚。伏安图上出现一灵敏的氧化峰,其峰电位为+0.56V(vs.SCE),峰电流与苯酚的浓度在1.0×10-7～2.0×10-4 mol.L-1范围内呈线性关系,检出限(3s/k)为5.0×10-8 mol.L-1。富集时间为30s,同时采用线性扫描伏安法研究苯酚在纳米二氧化铈修饰碳糊电极上的氧化还原反应,结果表明此电极反应为一不可逆的吸附过程。     

以邻苯二胺为底物固体电极方波伏安法检测辣根过氧化物酶及其标记物

以玻碳电极为工作电极,研究了邻苯二胺(OPD)为底物伏安法检测辣根过氧化物酶(HRP)及其标记物的方法。HRP能够催化H_2O_2氧化OPD,其反应产物在玻碳电极上于-0.42V(vs.Ag/Agcl)左右产生一个灵敏的还原峰,峰电流随着HRP浓度的增大而增大,借助此还原电流可以测定HRP,并进而可用于以HRP为标记物的电化学酶免疫分析。用方波伏安法对酶催化反应条件和酶催化反应产物的测定条件进行了详细的研究,在最佳条件下测定游离HRP的线性范围是1.0×10~(-10)～4.0×10~(-9)g/mL,检出限为8.5×10~(-11)g/mL;对游离的酶标记物(IgG-HRP)的测定最大稀释比为1:2000000。     

伏安酶联免疫分析体系测定南方菜豆花叶病毒

本文提出用邻氨基酚 ( OAP) - H2 O2 -辣根过氧化物酶 ( HRP)伏安酶联免疫分析体系测定 HRP和南方菜豆花叶病毒 ( SBMV)。该方法是将 HRP催化 H2 O2 与 OAP的酶催化反应与邻氨基酚的氧化中间产物在滴汞电极上的还原反应相偶合 ,在 BR缓冲溶液中 ,在 - 0 .87V( vs.SCE)左右产生灵敏的伏安峰。利用该极谱波对 HRP的检测限为 5× 10 -12 g/m L,线性范围为 6.0× 10 -12～ 4 .0× 10 -9g/m L。用该方法测定南方菜豆花叶病毒取得了令人满意的结果。     

蒿甲醚在单壁碳纳米管修饰电极上的电催化还原

研制了单壁碳纳米管(SWCNTs)修饰玻碳电极。用交流阻抗谱法(EIS)和扫描电镜(SEM)研究了电极膜性能,应用循环伏安法(CV)、计时库仑法(CC)、计时电流法(CA)研究了蒿甲醚在修饰电极上的电化学行为。结果表明,SWCNTs修饰电极对蒿甲醚的还原有良好的电催化活性,其还原反应为双电子过程,电极反应的扩散系数及速率常数分别为6·67×10-4cm2·s-1及8·54×10-2mol·L-1·s-1。在优化实验条件下,还原峰的峰电位位于-0·85V,其峰电流与蒿甲醚浓度在6·71×10-7~2·45×10-4mol·L-1范围内呈良好线性,检出限达4·02×10-7mol·L-1,相对标准偏差(n=10)为4·2%,可用于蒿甲醚样品的含量测定。