颗粒细胞分泌一种刺激卵母细胞组织型纤蛋白溶酶原激活因子的物质

本工作用颗粒细胞或颗粒细胞培液与卵母细胞一起培养的方法研究了颗粒细胞因子对卵母细胞纤蛋白溶酶原激活因子的影响。结果表明,在FSH作用下,颗粒细胞分泌一种(些)刺激卵母细胞tPA活性的因子。这一发现对了解激素通过颗粒细胞合成中间因子调节卵母细胞tPA活性有重要意义。     

牛天然纤溶酶原Kringles结构域片段的获得及其抑制内皮细胞增殖作用研究

利用猪胰弹性蛋白酶和尿激酶限制性酶切牛纤溶酶原,获得了纤溶酶原Kringles结构域片段Kringles1-3(K1-3)和Kingles1-4(K1-4),研究发现,在没有自由巯基供体存在的条件下,尿激酶酶发牛纤溶酶原也能够产生K1－4,从而认为存在由尿激酶酶切牛纤溶酶原直接产生K1－4的途径,所获得的K1－3和K1－4对恒河猴脉络膜－视网膜RF／6A血管内皮细胞的增殖有抑制活性。     

牛天然纤溶酶原环状结构域K1—3的获得

采用Ｌｙｓ－Ｓｅｐｈｅｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,从新生牛血清中分离提纯的牛纤溶酶原（ｐａｌｓｍｉｎｏｇｅｎ,ｐｇｎ）。利用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,对其纯度和相对分子质量进行了鉴定。利用猪胰弹性蛋白酶酶切纤溶酶原获得了环状结构域Ｋ１－３,采用Ｌｙｓ－Ｓｅｐｈｅｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析对该片段进行了分离提取。     

尖吻蝮蛇蛇毒中纤溶组分与铽的相互作用

利用平衡析,原子吸收,荧光滴定和荧光寿命测定等方法确定了皖南尖吻蝮蛇蛇毒纤溶组分中Ｃａ＾２＋含量,并利用荧光光谱研究了Ｔｂ＾３＋与ＦＰ中色氨酸残基之间能量转移和ＦＰ中的微区结构。     

重组人糖基化尿型纤溶酶原尿激活剂中糖链的组成研究

重组人糖基化尿型纤溶酶原激活剂(RHU-PA)是一种溶血栓药物。研究了使单糖从RHU-PA中定量释放的酸解条件和纯化单糖的方法。应用气相色谱技术测定了RHU-PA上的糖链由岩藻糖、甘露糖、半乳糖和N-乙酰氨基葡萄糖组成,相对摩尔比为1.0∶3.9∶1.1∶3.4。酸解法测得的总糖含量与酶解法测得的结果一致。     

地鳖纤溶活性蛋白(EFP)的分离纯化、红外光谱分析及抑制鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成研究

以传统中药材地鳖为原料, 采用匀浆、盐析、硫酸铵分段沉淀、透析和DEAE-52纤维素离子层析等纯化方法, 从其体内分离纯化得到一种纤溶活性蛋白(Fibrinolyric protein of Eupolyphaga sinensis Walker, EFP), 采用SDS-PAGE电泳法对该蛋白进行了分子量和纯度测定, 结果表明, 从地鳖中提取纯化的EFP为相对分子量为41300的单一成分, 具有明显的纤溶活性, 由蛋白质和糖的红外光谱特征吸收峰可推断EFP为一种糖蛋白. EFP对鸡胚尿囊膜新生血管生成有良好的抑制作用, 比阳性对照组(地塞米松组)对鸡胚生长发育影响要小. 地鳖虫纤溶活性蛋白组分具有抑制血管生成的作用, 有可能用于肿瘤治疗.     

拟南芥和甜菜夜蛾相互作用的差异蛋白分析

以甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)和模式植物拟南芥(Arabidopsis thanliana)作为研究体系, 应用蛋白质双向凝胶电泳(Two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE)分析了在甜菜夜蛾取食诱导条件下拟南芥蛋白表达的差异, 从蛋白质水平揭示昆虫取食诱导条件下植物的化学防御机制. 结果发现, 在昆虫取食诱导条件下, 有28个蛋白发生显著变化, 其中17个蛋白点上调表达, 11个蛋白点下调表达. 利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对差异蛋白进行了鉴定, 结果发现转酮酶、S-腺苷甲硫氨酸合成酶、二氢硫辛酰胺脱氢酶和脂肪酸合成酶在植物诱导化学防御中具有重要的作用, 其中脂肪酸合成酶与茉莉酸代谢通路相关.     

应用ABEEMσπ/MM模型对重组人纤溶酶原Kringle 1结构域与配体分子的对接计算

应用原子-键电负性均衡方法的浮动电荷分子力场(ABEEMσπ/MM),对重组人纤溶酶原Kringle1结构域(K1Pg)与配体ε-Aminocaproic acid(EACA),trans-4-(Aminomethyl)cyclohexane-1-carboxylic acid(AMCHA),L-Lysine(Lys),7-Aminoheptanoic acid(7-AHA)和Benzylamine进行了半柔性对接计算.用ABEEMσπ/MM模型优化得到的复合物K1Pg/EACA和K1Pg/AMCHA的结构很接近实验晶体结构.此外通过对5种配体与K1Pg结合能的计算,得出5种配体与K1Pg结合能的大小顺序为AMCHAEACA7-AHALysBenzy-lamine,与实验中测得5种配体与K1pg的平衡结合常数K值大小顺序相一致.     

毛细管区带电泳分析五步蛇毒蛋白C激活剂和蛋白C的相互作用

建立了毛细管区带电泳分析五步蛇毒蛋白C激活剂(protein C activator, PCA)与血浆蛋白C(protein C, PC)的相互作用。以未涂层毛细管(60.2 cm(有效长度50 cm)×75 μm)为分离柱,50 mmol/L Tris-HCl(pH 7.4)为运行缓冲液,于198 nm波长下检测。对影响五步蛇毒PCA分离的因素(如缓冲液、离子浓度)及在37.5 ℃下孵育不同时间的五步蛇毒PCA与PC的相互作用进行考察。方法的检出限(以信噪比为3计)为3 mg/L,线性范围为10～300 mg/L。五步蛇毒PCA迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.56%和3.8%(n=6)。等体积的五步蛇毒PCA(200 mg/L)与PC(60 mg/L)孵育5 min,其结合率达到最大,且谱图中未见有PC水解的肽链。该五步蛇毒PCA可改变PC空间构象直接激活PC。该方法简单,灵敏度和分辨率高,分析结果为今后快速检测五步蛇毒PCA及其活性提供了重要的理论依据。     

光谱法研究金属离子与肿瘤抑制蛋白p53的DNA结合结构域的相互作用

利用荧光滴定法研究了9种金属离子与序列特异性的DNA结合结构域(p53DBD)的结合反应,其结合能力依次为Fe3+＞Zn2+＞Cu2+＞Ca2+＞Mg2+＞Ba2+＞Mn2+＞Ni2+＞Co2+.圆二色谱研究结果表明,Ba2+, Ca2+, Co2+, Mn2+及Ni2+并未引起蛋白二级结构变化; Zn2+, Mg2+及Fe3+诱导蛋白结构细微调整;而Cu2+结合导致蛋白螺旋结构大量丢失.ANS结合研究结果表明, Mg2+与Zn2+相似,诱导p53DBD蛋白表面疏水性增强,而Fe3+引起p53DBD蛋白表面疏水性降低.因此,Mg2+和Fe3+可能是影响或调节p53活性的潜在因子之一.     

人组织型纤溶酶原激活剂表达调控及高效表达的研究——Ⅰ.t-PA mRNA 3′-UTR对其表达的调控

运用分子剪切技术构建了含不同长度3′端非翻译区(3′-UTR)的t-PAcDNA克隆,体外转录的mRNA在兔网织红细胞裂解物中翻译和COS-7细胞中表达的结果表明t-PA mRNA 3′-UTR序列对其表达有明显抑制作用,3′-UTR缺失使t-PA表达水平提高3—8倍。进一步研究表明,t-PA mRNA 3′-UTR对其表达的抑制是由3′末端长约200nt的富含AU序列所致。RNA稳定性试验证实这段富含AU的序列使t-PA mRNA稳定性下降3倍以上;将该序列插入荧光素酶(Luc)基因3′-UTR,使Luc的表达水平明显降低。分析了该序列调节t-PA表达的可能机理,提出了调控的模式。     

氯化汞和亚硒酸钠对大鼠的毒性相互作用

用Hom法测定了大鼠经口染毒的LD50,并在此基础上进行90天亚慢性经口毒性试验。测量染毒过程中的体重、食物利用率的变化,测定肝、肾、脾等五种器官脏器系数,并进行血液生化检测。氯化汞、亚硒酸钠及二者等摩尔比联合作用对大鼠LD50分别为127．5、39．55和252mg/kg。汞组和硒组大鼠体重呈进行性下降。汞组肝、肾、胸腺、脾系数增大,睾丸系数减小,联合作用显著降低了汞对各脏器系数的影响,并且随着剂量组中硒剂量的增加,汞对脏器系数的影响减弱。血液学、血清酶化学检测结果无显著性差异。实验结果表明氯化汞和亚硒酸钠相互作用表现为明显的毒性拮抗作用,雌鼠对氯化汞和亚硒酸钠联合毒性有更高的耐受性。联合作用能够减弱单独作用对大鼠生长的影响,减弱汞对五种脏器的毒性。     

车前草提取物与牛血清白蛋白和金属离子 相互作用的研究

车前草分布遍及全国,为车前科车前属的多年生草本植物。车前草作为我国传统中药常被用来进行清热利尿通淋、祛痰和解毒。但关于车前草提取物与牛血清白蛋白和金属离子的研究鲜有报道。该研究对车前草水提取物和乙醇提取物分别进行了荧光性质和吸收光谱的研究,研究了其与牛血清白蛋白和金属离子的相互作用。结果表明:车前草水提取物和乙醇提取物都使牛血清白蛋白自身荧光减弱,并与金属离子产生了不同的相互作用,其吸收光谱也产生了不同程度的变化。该研究结果为进一步研究车前草在疾病治疗中发挥药效机制提供一定的参考价值。     

谷胱甘肽和Ebselen对胰岛素硝化的抑制及其相互作用机理的研究

生物体内NO和超氧阴离子快速反应生成的过氧亚硝酸根离子(ONOO^-，peroxynitrite)是一种强细胞毒性物质，它诱导蛋白质酪氨酸残基硝化是其损伤生物系统的重要途径之一。为了探讨谷胱甘肽和ebselen对胰岛素硝化的抑制及其相互作用机理，采用UV-Vis、HPLC和ESI-MS等方法，研究了ONOO^-对胰岛素的硝化作用、小分子抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)和ebselen对ONOO^-硝化胰岛素的影响以及它们之间的相互作用。结果表明单独的GSH和ebselen对ONOO^--引发的胰岛素硝化均有明显的抑制，而作为谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的底物GSH 与GPx的模型化合物ebselen之间存在相互拮抗作用，经过对其产物分析，确定其机理是GSH和ebselen能够直接反应生成一种加合物，从而抑制了GSH和ebselen各自的抗硝化能力。     

牛血清白蛋白与保泰松和布洛芬相互作用的荧光光谱研究

应用荧光光谱法研究了保泰松和布洛芬与牛血清白蛋白分子间的相互作用,得到了分子间的结合常数和热力学参数．利用已有的计算方法,建立了相应的计算机程序,使计算结果更合理．通过与常见公式计算的结果进行比较,所建立的方法得到了比较满意的结果．同时考察了常见金属离子对药物与蛋白相互作用的影响．     

尿激酶对纤维蛋白低亲和性的结构基础——Ⅱ.尿激酶A链149—157片段对纤维蛋白促进tPA激活纤溶酶原的抑制作用

本文从低分子量尿激酶(LUK)中分离并纯化了UK 135—157片段,用放射结合分析证明UK 135—157片段和纤维蛋白对tPA的结合呈竞争关系。用酪蛋白降解系统证明此片段可抑制纤维蛋白促进tPA对纤溶酶原的激活。化学合成了UK149—157九肽(R-肽)以及由Asp取代Arg 154和Arg 156的相应九肽(D-肽),发现R-肽对纤维蛋白促进tPA激活纤溶酶原有显著的抑制作用,而D-肽却全无作用。本文结果证明:UK 149—157片段中的正电荷残基在抑制环饼结构域的纤维蛋白结合活性中起重要作用。     

研究金纳米粒子和牛血清白蛋白以及羊抗兔免疫球蛋白G的相互作用

通过检测蛋白质与金纳米粒子结合前后的zeta电位和荧光淬灭的变化，研究金纳米粒子和蛋白质，如牛血清白蛋白以及免疫球蛋白G之间在不同pH条件下的相互作用。当加入蛋白质后，金胶体溶液在透射电镜和紫外－可见分光光度计检测时有聚集的现象。实验结果表明，当pH值增大时，zeta电位变化很明显，而结合常数K_b和化学计量数n增加的趋势比较平缓。总之，有两个因子能明显地影响金纳米粒子和蛋白质之间的相互作用，那就是表面电荷以及金纳米粒子和蛋白质上面的色氨酸的吲哚环之间的共价作用。     

17400鲨鱼软骨血管生成抑制因子的纯化及生物学活性研究

采用盐酸胍抽提、膜超滤、丙酮分级沉淀、Sephadex-75柱层析和C₄反相高效液相色谱等分离步骤,从广东阳江鲨鱼软骨中纯化获得新的鲨鱼软骨血管生成抑制因子SCAI-c(SharkCartilageAngiogenesis In-hibitor-c,SCAI-c);SDS-PAGE电泳银染显示为一条带,根据蛋白质的相对迁移率计算,分子量为17400;它对鸡胚绒毛尿囊膜血管的形成具有显著抑制效应,并有明显的浓度依赖关系.SCAI-c与SCAI-a具有类似的生物学特征.     

酸性铬蓝K与卵白蛋白相互作用的分光光度研究及应用

在pH1.30的氯乙酸缓冲溶液中,在TritonX-100存在下,卵白蛋白与酸性铬蓝K可形成有色复合物,其最大吸收波长为585nm。卵白蛋白浓度在0～2.85mg/L和3.14～11.40mg/L范围呈线性,摩尔吸光系数分别为4.76×105L·mol-1·cm-1、5.46×104L·mol-1·cm-1。相对标准偏差在1.18%～1.27%,回收率在98.8%～101.7%之间。提出的方法已用于豆粕浸提液中蛋白质的测定,分析结果满意。探讨了卵白蛋白与酸性铬蓝K形成复合物的反应机理。     

GnRHa对去垂体大鼠卵巢tPA和PAI-1基因表达的调节

给去垂体大鼠注射促性腺激素释放激素(GnRH)的类似物(GnRHa)可诱导卵巢颗粒细胞(GC)和膜间质细胞(TI)组织型纤溶酶原激活因子(tPA)和抑制因子(PAI-1)基因在时间上和不同细胞间的协调表达。tPA主要由GC产生,GC也分泌少量PAI-1;而卵巢中的PAI-1主要由TI产生,TI也分泌少量tPA。在排卵前GC和TI中tPA mRNA和生物活性均达到高峰;与此相反,PAI-1的表达在GC和TI中却完全不同,TI中的PAI-1 mRNA和生物活性在tPA峰值前6h达到最高水平;而GC中的PAI-1峰值却出现在排卵后。上述变化与人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导正常大鼠排卵所引起的两种基因的表达的动力学变化无异。这些结果提示,hCG(通过PKA途径)和GnRHa(通过PKC途径)这两种不同的调控信号可通过各自不同的受体,经过不同的信息传递系统而最终影响tPA和PAI-1基因的相同的协调表达引起排卵。