膜亲和色谱的现状、发展和应用

文章对膜亲和色谱的原理、特点、设备、过程和发展情况做了介绍，并对亲和膜在整个膜分离技术中的地位、所占的比重及市场预测做了述评，对膜亲和色谱与其它色谱分离技术的优缺点进行了比较。重点介绍了制备亲和膜的材料，活化方法，间隔臂和配基的种类、选择和共价键合方法，配基和配合物产生亲和作用的机理及解离过程和方法。并对膜亲和色谱在酶、蛋白质、核糖核酸等生物大分子纯化分离方面的应用情况做了述评。     

膜亲和色谱的现状、发展和应用

文章对膜亲和色谱的原理、特点、设备、过程和发展情况做了介绍，并对亲和膜在整个膜分离技术中的地位、所占的比重及市场预测做了述评，对膜亲和色谱与其它色谱分离技术的优缺点进行了比较。重点介绍了制备亲和膜的材料，活化方法，问隔臂和配基的种类、选择和共价键合方法，配基和配合物产生亲和作用的机理及解离过程和方法。并对膜亲和色谱在酶、蛋白质、核糖核酸等生物大分子纯化分离方面的应用情况做了述评。     

白蛋白在以染料为配基的醋酸纤维滤棒上的等温吸附行为(英文)

 以醋酸纤维滤棒为基质 ,染料CibacronBlueF3GA为配基 ,合成了一种新的染料亲和介质 ;分别以牛血清白蛋白 (BSA)和人血清白蛋白 (HSA)为对象 ,用静态法进行了吸附实验 ,得到了相应的亲和等温吸附曲线 ;对曲线按Langmuir模型和Freundlich模型分别进行拟合 ;结果表明 ,醋酸纤维滤棒染料亲和介质对BSA和HSA的等温吸附遵循Freundlich模型。采用该亲和介质装柱并分离实际样品人血浆 ,可得到纯化的人血清白蛋白。     

新型亲和膜色谱用于去除胆红素的研究

 以纤维素膜为亲和基质 ,接枝后分别以聚赖氨酸和季铵盐为配基 ,制备了两种亲和膜介质 ,用于去除磷酸缓冲液 (pH 7 4)及人血白蛋白 (HSA)溶液中的胆红素。实验结果表明 ,该方法对磷酸缓冲液中胆红素的去除率能达到 70 %以上 ;对HSA溶液中的胆红素 ,其去除率稍低 ,但在较低浓度的HSA溶液中 ,也能获得高于 5 0 %的去除率。并对亲和膜与胆红素间的亲和作用进行了研究 ,考察了温度、流速、HSA浓度及胆红素初始浓度等相关条件对去除效果的影响。结果表明 ,在较高的温度条件下 ,去除效果较佳 ;在较高的初始浓度情况下 ,胆红素的吸附速率较大。     

双亲型吸附剂对HDL的吸附动力学研究

设计合成了以葡聚糖为载体，同时具有亲水性磺酸基和疏水性胆固醇两类配基的新型吸附剂。通过对高密度脂蛋白（HDL）纯溶液中吸附等温线的测试，比较了以Dextran G-75为以亲型吸附剂与单一亲水型磺酸基配基、单一疏水型胆固醇配基吸附剂吸附量和亲和吸附系数的关系，对双亲型吸附剂的吸附动力学进行了初步研究。在HDL溶液中，亲水型磺酸基、疏水型胆固醇配基、双亲型吸附剂对HDL的吸附曲线基本符合Langmuir吸附方程。     

实时生物分子相互作用分析技术用于链霉亲和素-生物素化抗体的层层组装研究

使用生物分子相互作用分析（Biomolecular interaction analysis,BIA)技术实时监测了在链霉素和素表面层层组装亲和素－生物素化抗体多层膜的过程，结果表明，通过链霉素和素与生物素之间的强亲和作用，能够在表面形成均一的多层膜，并用实时BIA技术求得了每层蛋白质的表面浓度，对于生物素化抗体，单层吸附表面浓度为1.32ng/mm^2；对于链霉亲和素，单层吸附表面浓度为2.93ng/mm^2。同时对蛋白质在表面的排列状态进行了探讨。     

聚酰胺基质亲水性亲和膜上染料配基辛巴蓝含量的测定

发展了以聚酰胺为基质的亲水性亲和膜上活性染料配基辛巴蓝含量的测定方法。将实验室制备的聚酰胺基质亲和膜在12．0mol／L盐酸中水解后,采用分光光度法对水解液直接进行检测,即可得到膜上染料配基含量。实验确定了适宜的分析条件,探讨了体系的吸收光谱和影响因素。对亲和膜体系分析得到了体系中辛巴蓝浓度和吸光度之间的线性关系,相关系数均在0．999以上,检出限为0．31～0．34mg／L;相对标准偏差为1．1％—3．4%。实验体系中的共存物质对于检测结果影响较小。用本方法对样品进行分析,回收率在99．8％—104．2%之间;与元素分析法等进行比较,表明本法能较准确地确定聚酰胺基质亲和膜上配基含量,且具有简便、适用和快速的特点。     

两种固定化金属螯合复合亲和膜色谱介质制备

以纤维素滤纸为基质,通过碱处理、环氧活化、偶联亚氨基二乙酸二钠、固定化Ｃｕ＾２＋后制得了大孔纤维素亲和膜。另外,在活化后的膜上通过共价交联覆盖上琼脂糖,制得了具有类似“三明治”结构且性能优于的复合亲和膜,装柱后分别制得固定化金属螯合亲和膜色谱柱。对两种亲和膜进行牛血清白蛋白等温吸附测定显示,两者的最大吸附量分别为１．１７ｍｇ／ｃｍ＾２和１．３０ｍｇ／ｃｍ＾２,与传统的琼脂糖凝胶类介质吸附量相当,表     

肽配基纳米亲和载体定向固定化抗体

抗体经常被固定在某一固相载体表面用于免疫检测分析,但通常得到的是随机固定化的抗体,因而会影响抗体的活性。本文开发了一种新型的亲和载体用于抗体的定向固定化。即将与抗体IgG的Fc片段具有亲和作用的肽配基偶联于pGMA纳米球上,制备亲和载体用于吸附抗体实现抗体的定向固定化。首先利用乳液聚合法制备了粒径为110nm的pGMA纳米球,再以EDMA为交联剂并且在纳米球表面氨基化,最后将与抗体IgG的Fc片段具有亲和作用的肽配基HWRGWV偶联于纳米球表面,制备得到肽配基纳米球亲和载体。然后,考察了亲和载体对猪IgG的吸附行为。进一步,利用等温滴定微量量热仪研究了该纳米球亲和载体与IgG之间的相互作用热力学。结果表明,肽配基亲和载体对IgG的特异性吸附作用明显高于肽配基修饰前的载体。亲和载体与IgG的亲和作用主要贡献是疏水相互作用;而IgG与氨化纳米球载体的吸附作用则主要通过静电作用和氢键作用。所制得的纳米球亲和载体可用于进一步开发高效率、高灵敏度的临床免疫检测方法。     

聚酰胺亲和膜用于去除内毒素的研究：Ⅰ.亲和膜的制备和特征

以尼龙６６膜为基质，用环氧氯丙烷，戊二醛，二溴丙烷，羰基二咪唑试剂用盐酸水解后的尼龙６６膜进行活化，共价键合上乙二胺，己二胺等不同长度的间隔臂和组氨酸，四多菌素Ｂ等亲和配基，配基含量达３０μｍｏｌ／ｇ亲和膜装入专门设计制造的膜分离器中，能有效地去除水溶液中的内毒素，     

聚偏氟乙烯中空纤维亲和膜分离γ—球蛋白的研究（I）——聚偏氟乙烯中空纤维亲和膜的制备及其吸附性能

对聚偏氟乙烯(PVDF)中空纤维膜进行表面亲水化处理，再经活化、偶联制得了带有苯丙氨酸(Phe)的PVDF中空纤维亲和膜。制备过程中以光电子能谱(XPS)及红外光谱分析膜表面基团的变化，经亲水化处理及活化偶联后，膜表面的O和N含量分别从5．6％和0.6％增加到16．5％和3．0％，而F含量由38．3％降低为23．0％。将该亲和膜用于室温下血浆中γ—球蛋白的分离实验，在pH＝7．4，离子强度I＝0.18的缓冲液体系及进料质量浓度为1．0mg／mL条件下，该亲和膜对γ—球蛋白的吸附量可达到5．85mg／g膜；与市售γ-球蛋白相比，血浆中提取纯度可达83.9%。     

葡聚糖为载体的双亲型LDL吸附剂吸附动力学研究

合成了以葡聚为载体，同时具有亲水性磺酸基和疏水性胆固醇两类配基的新型低密度脂蛋白（LDL）吸附剂。通过对LDL纯溶液中吸附等温线的测试，比较了以Dextran G-75为载体的双亲型LDL吸附剂与单一亲水型磺酸基配基，单一疏水型胆固醇基吸附剂吸附量和亲和吸附系数的关系。对双亲型LDL吸附剂的吸附动力学进行了初步研究，在LDL溶液中，亲水型磺酸基，疏水型胆固醇配基，双亲型LDL吸附剂对LDL的吸附曲线基本上符合Langmuir吸附方程，另外通过高离子强度NaCl洗脱实验，测定了双亲型LDL吸附剂上具有的磺酸基与胆固醇两类基在对低密脂蛋白吸附过程中所起的配合效果，为下一步作用力机制研究提供了参考依据。     

亲和膜色谱技术研究进展

对一种崭新的生物大分子分离技术－－亲和膜色谱技术做了全面的评述,介绍了亲和膜色谱分离的过程,评价了亲和膜基质材料活化、改性方法、给出了配基间隔臂的选择原则,概括了亲和膜色谱理论研究的进展,并对亲和膜色谱技术进行了展望。     

胰蛋白酶定向固定化亲和配基的理性设计

在胰蛋白酶三维(3D)结构的基础上, 首先利用分子对接从ZINC 数据库中筛选获得了与胰蛋白酶具有较高亲和性的小分子配基2-硝基苯基-β-D-葡糖苷, 并分析了该配基与蛋白质之间的相互作用力主要为范德华和氢键相互作用. 并利用分子动力学模拟进一步验证了2-硝基苯基-β-D-葡糖苷与胰蛋白酶之间具有较强的亲和作用. 分子动力学(MD)模拟结果表明, 配基-目标蛋白质之间形成稳定的复合物且它们之间的距离基本没有变化. 此外, 一个水分子通过氢键在配基和目标蛋白质的结合腔之间架桥. 最后制备了偶联有该配基的亲和载体, 进行了胰蛋白酶的定向固定化, 并考察了该固定化酶的活性. 研究结果表明, 利用修饰2-硝基苯基-β-D-葡糖苷配基的亲和载体固定化胰蛋白酶的酶活达到340.8 U·g^-1, 比活达到300.3 U·mg^-1, 分别是未修饰亲和配基载体的10倍和5倍, 具有明显的优势. 上述结论证明了结合分子对接和分子动力学模拟理性设计定向固定化亲和配基的方法是可行的, 具有一定的理论和实用价值.     

亲和膜色谱法纯化人血浆纤溶酶原

首次以尼龙膜为基质 ,分别采用三氯三嗪和 1 ,4 丁二醇二缩水甘油醚活化法 ,制备了以L 赖氨酸为配基的亲和膜。首次使用亲和膜色谱法成功地从人血浆中快速纯化出了高纯度的纤溶酶原 ,电泳分析显示一个主要的谱带。为规模化快速纯化临床用高纯度纤溶酶原提供了新方法。     

亲和膜色谱

亲和膜色谱又称亲和膜分离，其在蛋白质的分离纯化中作为一种综合性的技术出现在80年代末。亲和膜色谱主要优点是克服了颗粒状多孔载体扩散传质阻力大的缺点，代之以对流传质，这样就可以在较低的操作压和较高的流速下对目标蛋白进行快速的分离和纯化，从而缩短操作时间、提高纯化效率。本文将就近年来亲和膜色谱及其在蛋白质分离和纯化中的应用作一综述性介绍。     

壳聚糖亲和磁性毫微粒的制备及其对蛋白质的吸附性能研究

以壳聚糖为包裹材料包埋自制的磁流体 ,制备了具有核 壳结构的磁性毫微粒 ,并偶联色素配基CibacronBlue 3GA(偶联量 1 4 .5μmol/mL)得到了一种新型亲和磁性毫微粒 .结果表明 ,所得亲和磁性微球具有较窄的粒径分布、形状规整 .以牛血清白蛋白 (BSA)和溶菌酶 (Lys)为目标蛋白 ,考察了该亲和磁性毫微粒的吸附性能 ,发现其对BSA和Lys的吸附量分别为 4和 2 8mg/g,吸附行为满足Langmuir吸附等温式 ,且对时间依赖性小而对溶液离子强度敏感 .     

亲和膜色变法纯化人血浆纤溶酶原

首次以尼龙膜为基质,分别采用三氯三嗪和1,4－丁二醇二缩水甘油醚活化法,制备了以L－赖氨酸为配基的亲和膜。首次使用亲和膜色谱法成功地从人血浆中快速纯化出了高纯度的纤溶酶原,电泳分析显示一个主要的谱带,为规模化快速纯化临床用高纯度纤溶酶原提供了新方法。     

聚酰胺亲和膜色谱用于去除内毒素的研究：Ⅱ.去除条件最佳化和应用

考察了所制备的带组氨酸配基的尼龙６６亲和膜在不同离子强度、ｐＨ值的盐溶液中及不同温度和流速下对内毒素的去除效果，并对这种亲和介质与内毒素的相互作用机理进行了研究。结果表明：在盐溶液离子强底低于０．２ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ值３￣８的范围及温度低于５０℃、流速小于５ｍＬ／ｍｉｎ下，可获得最佳去除效果。在选择的最佳条件下能有效去除牛清白蛋白、氨基酸注射液、人血样等中的内毒素。去除率大部分在９０％以上，并能保留     

亲和素与膜表面模型受体的相互作用

通过构建含有生物素的人工膜,运用3种不同类型的人工膜系统(脂质体、气/液界面LB膜和固体表面支撑单层膜)和相应的观测技术(如椭偏仪、衰减全反射、荧光显微镜膜天平、荧光滴定等)、对亲和素与生物素这一具有极强亲和力的系统之间的特异性相互作用进行了探讨。实验结果表明,膜表面电荷对非特异性吸附的速度有很大的影响,而对最终的蛋白吸附量影响不大;非特异性吸附可以通过二价阳离子的脱附而去除;受体蛋白质与配体间的特异性结合受到侧向空间位阻效应的制约。实验还证明模型受体的柔性是影响其与配体蛋白特异性结合的重要因素。