钛氯活化纤维素固定5′-磷酸二酯酶的研究 Ⅱ.用固定化酶降解核糖核酸

用固定化5′-磷酸二酯酶在75℃及pH5.2的条件下分批降解0.5％浓度的核糖核酸(RNA),用酶量可减少到1.75个活性单位/毫升底物,溶液酶的利用率可提高6倍左右,酶解转化率达70％以上,产品质量符合国家标准。经两次工厂扩大试验结果表明,固定化酶的实际降解效率与实验室结果基本一致。     

三氯化钛纤维素衍生物用于固定5′-磷酸二酯酶的研究

在钛盐与纤维素反应体系中采用作者自制的GCA为活化剂,可生成一种活泼的纤维素衍生物。该衍生物既能保持纤维素原有的形状和强力,又能赋予纤维素较好的固酶功能,用它固定5′磷酸二酯酶可以使酶的活力回收率达60％以上,使酶的利用率提高8倍以上,并具有制备方法简便,材料易得等优点,可望应用于工业生产。     

固定化脲酶的制备及酶学性质研究

固定化酶是束缚在一定空间内仍能进行其特有反应的生物催化剂,近年来对于固定化酶的研究非常活跃[1-2].目前酶的固定化方法主要有吸附法,交联法,包埋法以及化学共价法,这些方法各有特点[3-5],应用领域多为食品工业、制药、医学治疗等方面.     

固定化木瓜蛋白酶的制备和性质研究

多孔硅球固定化木瓜蛋白酶具有热增活性 .本文在前文研究的基础上 ,用载体交联法制备了甲壳胺固定化木瓜蛋白酶和纤维素固定化木瓜蛋白酶 .考察了固定化pH值、戊二醛浓度和给酶量对固定化木瓜蛋白酶活力的影响 .研究了固定化木瓜蛋白酶的性质 ,特别是热稳定性和耐热性 ,并与溶液酶和多孔硅球固定化木瓜蛋白酶进行了比较 .所制得的甲壳胺固定化木瓜蛋白酶和纤维素固定化木瓜蛋白酶的最适反应温度均达到了 80℃ ;90℃温育 1h后固定化酶的活力保持在 95 %以上 ;70℃温育处理 5h和 6h后固定化酶的活力也仍能保持在 90 %以上 .固定化木瓜蛋白酶的热稳定性和耐热性得到了显著提高     

壳聚糖固定化醇脱氢酶的制备及其酶学性质研究

报道了醇脱氢酶(ADH)的固定化和酶学性质研究。以壳聚糖作为载体,戊二醛作为交联剂。固定化ADH的最适条件为:以6%戊二醛将壳聚糖交联2 h,与ADH反应2.5 h。对游离和固定化ADH酶学性质的研究表明:酶促反应的最适pH均为8.2,最适温度分别为37℃和40℃,对乙醇的表观米氏常数Km分别为33.9 mmol/L和46.2 mmol/L。与游离酶相比,固定化酶具有良好的操作稳定性。     

壳聚糖固定化乳酸脱氢酶的制备及酶学性质研究

以磁性壳聚糖作为载体,戊二醛作为交联剂,对乳酸脱氢酶(LDH)进行固定化.固定化的最适条件为:戊二醛浓度6%,pH值7.5,酶的偶联时间2 h.对游离及固定化LDH酶学性质的研究表明,酶促反应的最适pH值为9.2,最适温度分别为37℃和50℃,对乳酸的表观米氏常数分别为1.6 mmol/L和0.9 mmol/L.游离酶和固定化酶在40℃放置150 min后,其活力分别为最初的56.5%和76.1%.固定化酶在4℃贮存4周后,活力仍保留50%以上.固定化酶在室温下与底物重复反应6次后,活力仍保留60%以上,说明固定化酶具有较好的热稳定性、贮存稳定性和复用性.     

聚乙烯醇重氮衍生物-聚甲基丙烯酸高分子复合物固定酶的制备和性质的研究

本文用聚乙烯醇缩对苯甲醛氯化重氮物和聚甲基丙烯酸复合物作为载体,制备了固定化纤维素酶和葡萄糖氧化酶。此固定化酶有较高的活性,贮存、反应稳定性和热稳定性比固定化前都有较大提高。     

溶解性可调节的酶载体制备和固定化酶的研究

本文利用自由基沉淀聚合反应,合成了甲基丙烯酸-丙烯酰胺-顺丁烯二酸酐三元共聚物,测定了这些共聚物形成水不溶性的大分子氢键复合物的临界pH值.利用共聚物上的酸酐基团,直接进行了木瓜蛋白酶的固定化,得到了具有液相酶与固相酶两者优点的新型修饰酶。     

基于金属有机骨架的固定化氯过氧化物酶的制备和性能评价

30℃水相体系中"一锅法"快速制备固定化氯过氧化物酶（CPO@ZIF-8）,在构筑金属有机沸石咪唑骨架结构（ZIF-8）的同时将氯过氧化物酶（CPO）固定在其三维纳米孔道中.温和的条件为固定化酶制备过程中酶活性的保持提供了前提.结构和性能表征说明酶分子的引入并不改变ZIF-8材料的孔道结构,同时酶分子在CPO@ZIF-8中呈现出在整体骨架材料中的嵌入式均匀分布.与先构筑ZIF-8骨架材料,然后通过表面吸附来固定酶分子的方法相比,通过将酶分子引入整体骨架材料中不仅提高了酶的固载量,更主要的是利用ZIF-8材料的高比表面积提高了固定化CPO的催化效率,同时基于三维孔道提供的刚性屏蔽环境有效改善了CPO在极端反应条件下的热稳定性、酸碱稳定性和对有机溶剂的耐受性.     

四碘化钛-三異丁基铝催化体系制备顺式-1,4-聚丁二烯——Ⅰ.催化剂的活性和聚合物的性质

研究了丁二烯在苯中有四碘化钛-三异丁基铝催化剂的存在下的聚合。发现这一催化体系的活性取决于Al/Ti比和聚合温度。对每一四碘化钛用量出现一具有最高活性的“临界Al/Ti此”;低于这一Al/Ti比,活性完全消失;高于这一Al/Ti比则活性逐渐降低(图2)。 增加Al/Ti可以减慢聚合速度而不影响最终转化率(图3);因此,可以利用Al/Ti来控制这一聚合反应以防止反应混合物的积热现象(图4)。 这一催化体系的优点是不论在任何条件下,包括催化剂组成(例如Al/Ti)和聚合条件(例如温度),聚合物都不合凝胶,而顺-1,4-结构含量总能在90％以上(表2)。 聚合物的分子量取决于两个主要因素:四碘化钛用量和聚合温度;增加四碘化钛用量和升高聚合温度都降低分子量(图5和图6)。Al/Ti对分子量的影响则不甚明显(图6)。 用这种催化剂制得的顺-1,4-聚丁二烯的分子量分布很窄(图7);因此,虽然这是一个非均相催化体系,它的活性中心可能比较单纯,大概不会含有多种活性中心。     

顺-1,4-聚丁二烯的工艺性质——Ⅰ.钛盐催化聚合顺-1,4-聚丁二烯的性质

研究了用钛盐催化剂制备而具有不同分子量的顺-1,4-聚丁二烯的性貭。 各种具有不同分子量的顺-1,4-聚丁二烯生胶的性貭很相似:(1)凝胶含量低于1％,(2)玻璃化温度在—110至—114℃之间,(3)顺-1,4结构含量在93至97％(表1A)。但门尼粘度则随[η]值而激增(图1)。从生胶的应力-应变曲线可见各种顺-1,4-聚丁二烯样品在拉伸时并没有结晶现象(图2)。 顺-1,4-聚丁二烯在滚筒上的加工性能对配炼温度极敏感。在25℃,40℃和60℃滚筒温度下的加炭黑配炼试验中,发现唯有在25℃下配炼才得到光滑的混合物,由此可制得抗张强度超过200公斤/厘米~2的硫化物中,如果配炼系在40℃或60℃下进行,则顺-1,4-聚丁二烯趋向于破碎(图4),得不到光滑的混合物,由此而制得的硫化物丧失抗张强度(图3)。 根据下列试验结果:(1)将顺-1,4-聚丁二烯分别在25℃,40℃和60℃下进行素炼,在素炼过程中都不产生疑胶,无明显的降解(图6),又素炼后链节结构并无变化(表3);(2)温度对滚炼的影响是可逆的(表4)。我们认为,在40℃或60℃下配炼得到的硫化物之所以丧失抗张强度可能由于炭黑没有均匀分散。从合炭黑硫化物断面的显微镜照片亦可看到在25℃下配炼的硫化物确不同于在40℃和60℃下配炼者(图5A)。 当含炭黑硫化物的定伸强度(M_(300％))超过60公斤/厘米~2     

碳酸铅制备铅酸蓄电池电极的研究Ⅰ.电极的活化

用循环伏安法研究了ＰｂＣＯ３粉末微电极转化为ＰｂＳＯ４电极的活化方法和条件。发现在２～２．５ｍｏｌ／Ｌ Ｈ２ＳＯ４溶液中由ＰｂＣＯ３转化成ＰｂＯ２／ＰｂＳＯ４和ＰｂＳＯ４／Ｐｂ电极时,以不对称交变讯号活化（化成）后,其循环伏安性能与由球磨机生产的ＰｂＯ粉所制得的相应电极性能相近。对于负极,在含有乙炔黑胶体的Ｈ２ＳＯ４溶液中化成,由于碳胶粒在ＰｂＳＯ４晶体上的吸附,阻止了充放电过程中电极材料的收缩,     

醇热法制备钛胶色谱固定相及其性质研究

以钛酸四丁酯为原料,采用醇热法制备了氧化钛微球色谱填料,制备方法简便,条件易于控制。借助扫描电镜、X-粉末衍射、氮吸附法等手段研究了其表面物理化学性质,表明所制多孔微球粒径均匀(5μm~7μm),孔径在中孔范围内(7.4 nm),平均孔体积(0.31 cm3.g-1),比表面积大(116.6 m2.g-1),孔径分布较窄,性质较其它常用方法都有较大提高;电位滴定结果显示微球表面酸性弱于常规硅胶。将其用于分离中性和碱性化合物时,显示出较好的色谱性能。     

磁性纳米氮化铝颗粒固定化β-葡萄糖苷酶的性质

以戊二醛为交联剂,研究了磁性纳米氮化铝颗粒固定化β-葡萄糖苷酶的条件及固定化酶的结构特征,并考察了固定化酶的某些酶学性质.结果表明,在4.5 ml磁性纳米氮化铝颗粒悬液(100 mg/ml)中加入0.5 ml戊二醛溶液(2%)超声波分散后,加入5 ml β-葡萄糖苷酶溶液(50 mg/ml),于20℃,pH 5.0和100 r/min条件下固载3.5 h,酶蛋白和酶活回收率分别为82.6%和78.4%.固定化β-葡萄糖苷酶的结构松散,不改变酶的结构特征.与游离酶相比,固定化酶对对硝基苯基-β-D-葡萄糖苷水解反应的最佳反应温度有所降低,最佳反应pH值有所升高,而米氏常数Km值有所增大,且具有良好的贮存稳定性和操作稳定性,表明磁性纳米氮化铝颗粒适合作为β-葡萄糖苷酶的固定化载体.     

固定化酶在生物医学上的应用(Ⅰ)——聚丙烯酰胺固定化尿酶的制备及性能

本文以交联聚丙烯酰胺对尿酶包埋进行了研究,制备出了球形固定化尿酶,其含酶量高(1份酶对1份聚合物),相对活性为50%左右,对尿素的分解活性:120m/ml(固定化尿酶,37℃,2小时),提高了稳定性,在4℃下,66天后活性降低8%,106天后活性降低22%,37℃下11天后活性降低18%,并且不泄漏酶。基于以上特点,该固定化尿酶为吸附型人工肾提供了一个较合适的活性材料。     

多孔硅球固定化木瓜蛋白酶的制备和性质

用载体交联法制备了多孔硅球固定化木瓜蛋白酶。考察了固定化时间、温度、pH值、给酶量和成二醛浓度对固定化木瓜蛋白酶活力的影响。研究了固定化木瓜蛋白酶的性质，并同溶液酶进行了比较。着重考察了固定化木瓜蛋白酶的热稳定性。所制得的固定化木瓜蛋白酶最适温育温度达到80℃，对底物酪蛋白的水解活力随温度的升高而增加，在90℃达到最高值；在70℃温育12小时后酶活力仍能保持高水平。     

纤维素三(3, 5-二硝基)苯甲酸酯手性固定相的制备和应用研究

纤维素三(3,5-二硝基)苯甲酸酯用超声反应合成,具有反PirkleI型手性固定相的结构,将其涂布在大孔硅胶载体上,用作一种新的高效液相色谱手性固定相,成功地拆分了布洛芬和氰戊菊酯的中间体。讨论了其分离的机理。     

纤维素磁性微球的制备及其生物活化研究

通过基因重组技术将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因插入含有纤维素结合域(CBD)标签的载体pET-35b(+),使EGFP与CBD进行融合表达,表达的融合蛋白分子量约为53kDa,该蛋白既具有与纤维素结合的功能,又能够作为示踪信号.此外,通过反向悬浮包埋技术制备纤维素磁性微球(MCMS),并对其性能进行了考察,其平均粒径为(158.7±14.7)μm,磁含量为(3.83±0.29)%,磁响应时间为(66±2.9)s,磁漏损为(0.139±0.06)‰,蛋白的偶联量和漏损量分别为(12.27±0.82)mg/mL和(77±7.35)ng/mL.经由EGFP的示踪信号观察制备的MCMS与CBD具有良好的结合能力,吸附后微球表面具有明显的绿色荧光信号,本研究建立的CBD-MCMS将为后继的MCMS的生物活化和随后的分离、纯化等工作奠定基础.     

两种反胶束固定化酶的催化性质研究

探讨十六烷基三甲基氯化铵(CATC)-戊醇-辛烷反胶束体系固定化乳酸脱氢酶(LDH)和醇脱氢酶(ADH)的催化作用。试验了含水量、表面活性剂以及助溶剂浓度对于酶固载量的影响。对游离酶和固定化酶催化性质研究表明:LDH酶促反应的适宜p H值分别为9.2和9.0,适宜温度为51℃和29℃,米氏常数15mmol·L-1和2mmol·L-1;ADH酶促反应的适宜p H值为8.8和8.2,适宜温度为33℃和39℃,米氏常数4mmol·L-1和17mmol·L-1。应用反胶束固定化酶测定了试样中微量组分。