高效液相色谱法测定石蒜中加兰他敏、力可拉敏及石蒜碱3种生物碱

以石蒜鳞茎为材料,建立了石蒜生物碱的反相高效液相色谱(HPLC)分析方法。探讨了流动相中乙腈含量、三乙胺含量、pH值、流速等对生物碱分离的影响,结果表明在ZORBAX ODS-C18(150 mm×4.6mm,5μm)反相色谱柱上,以0.9%三乙胺水溶液(pH 8.0)-乙腈-甲醇为流动相,梯度洗脱,流速为1mL/min,检测波长为234 nm时,石蒜样品可有效分离出14种石蒜生物碱,分离度良好。加兰他敏、力可拉敏和石蒜碱的检出限分别为3.375、0.475、0.495 mg/L,平均加标回收率均为98%。运用此法测定了石蒜不同部位中3种生物碱的含量,结果表明石蒜不同部位的3种生物碱含量差异较大,叶子中的含量最高;同一部位中,石蒜碱的含量最高,力可拉敏次之,加兰他敏最低。     

毛细管电泳-电化学发光法测定石蒜鳞茎中的石蒜碱

建立了毛细管电泳-电化学发光(CE-ECL)检测石蒜碱的方法。探讨了检测电位、分离缓冲液pH和浓度、分离电压、进样电压及进样时间等因素对石蒜碱分离检测的影响。在最佳实验条件下,石蒜碱含量在0.03~2μg/mL范围内与其峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.9995,检出限为0.005μg/mL(S/N=3)。对0.8μg/mL石蒜碱进行7次平行实验,其迁移时间、峰高和峰面积的RSD分别为1.7%,5.2%和5.6%。方法应用于石蒜鳞茎中石蒜碱的测定,加标回收率为92.2%~98.6%。     

离子液体微波辅助萃取石蒜中生物碱的研究

以离子液体溶液为溶剂,研究了离子液体微波辅助萃取石蒜中石蒜碱、力克拉敏和加兰他敏生物碱。考察了离子液体的种类和浓度对萃取石蒜生物碱的影响,并与传统有机溶剂和传统萃取技术进行了对比研究。结果表明,1.0mol/L[bmim]Cl溶液为溶剂,液固比(mL∶g)15∶1,80℃微波辅助萃取10min,石蒜碱、力可拉敏和加兰他敏生物碱的萃取率分别为2.730、0.857和0.179mg/g。与传统的萃取方法比较,本方法快速高效、环境友好。     

超高效液相色谱-四极杆线性离子阱质谱法同时检测石蒜属3种生物碱

基于超高效液相色谱-串联四极杆/线性离子阱质谱(UPLC-QTRAP-MS/MS),建立了一种同时检测石蒜属植物中加兰他敏(Gal)、力可拉敏(Lycm)和石蒜碱(Lyc)含量的方法。提取液超声波辅助提取离心后,经Waters ACQUITY UPLC BEH C18(150 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,以水溶液(0.1%甲酸)-乙腈为流动相梯度洗脱,流速0.2 m L/min,在正离子扫描下以MRM模式进行分析。结果表明,Gal、Lycm和Lyc在0.5~500μg/L质量浓度范围内线性关系良好,相关系数达0.999 9~1.000 0,可在6.0 min内得到检测结果,Gal、Lycm和Lyc的保留时间分别为2.86、2.31、1.95 min。3种物质的加标回收率为97.2%~98.6%,相对标准偏差为0.8%~4.3%。应用此方法测得石蒜属12个种的Gal、Lycm和Lyc含量分别在21.98~496.77、0.17~467.21、9.34~4 510.18μg/g干重之间,3种物质含量在种间差异均较大。     

微波辅助提取石蒜和虎杖中有效成分的动力学模型

基于微波辅助提取(MAE)中药材中化学成分的非稳态扩散过程, 根据Fick第二定律建立了石蒜中石蒜碱、力可拉敏和加兰他敏以及虎杖中白藜芦醇和大黄素微波辅助提取过程的动力学模型. 研究了提取时间、提取温度及药材粒度等因素对石蒜中石蒜碱、力可拉敏和加兰他敏以及虎杖中大黄素和白藜芦醇的提取率的影响, 采用Matlab软件编程对动力学模型进行回归分析, 拟合的动力学模型与实验结果吻合. 根据模型计算了石蒜中石蒜碱、力可拉敏和加兰他敏以及虎杖中大黄素和白藜芦醇在MAE提取过程中的扩散系数D, 与溶剂加热回流法(SRE)比较, 引入增强因子γ, 表征了微波对溶质分子扩散传质的影响及其对不同基质药材作用的差异.     

紫外分光光度法测定石蒜中石蒜碱含量

石蒜(Lycoris Herb.)属于单子叶植物纲石蒜科(Amaryllidaceae)植物,石蒜碱(Lycorien)是石蒜中具有显著生理活性的异喹啉类生物碱[1-2],具有很强的抗病毒活性和抗肿瘤作用[3-5],在临床上多用于小儿麻痹后遗症的治疗[1]。目前,石蒜碱的测定方法主要有高效液相色谱法(HPLC)[6],但由于该法操作复杂,不利于常规检测,因此建立石蒜碱的简便检测方法具有重要的现实意义。本工作用紫外分光光度法测定石蒜中石蒜碱含量。     

大孔吸附树脂纯化石蒜中石蒜碱

比较了9种大孔吸附树脂对石蒜碱的吸附率和解吸率,确定了HPD300为优选吸附树脂,研究了该树脂纯化石蒜碱的条件及参数. 室温下,9 BV 1.22 g/L的石蒜碱上样液以2 BV/h过柱,4 BV水以2 BV/h洗涤后用8 BV 70%乙醇以2 BV/h洗脱,石蒜碱的纯度由9.93%提高至23.07%.     

微波辅助提取/HPLC分析石蒜中的生物碱

石蒜科石蒜属(amaryllidaceae)植物,含有石蒜碱、力可拉敏和加兰他敏(图1)等生物碱,具有镇静、镇痛、解热、降压、抗炎、催吐、抗病毒、抗癌等作用[1]。目前石蒜生物碱的提取主要采用溶剂回流法(SRE),但SRE提取效率低、耗时、耗溶剂,而且有效成分易被破坏[2-3]。微波辅助提取法     

微波辅助提取-气相色谱-质谱法测定石蒜中加兰他敏和力可拉敏

采用乙醇(95+5)溶液于70℃提取石蒜中加兰他敏和力可拉敏,所得提取液经过滤后旋转蒸发至干。残渣溶于盐酸(2+98)溶液中,用氯仿萃取3次以除去杂质,用氨水调节水相酸度至pH 10,再用氯仿萃取3次,合并萃取液并蒸发至干。用甲醇溶解残渣,所得溶液用DB-5MS毛细管柱分离,进样量为1μL。质谱分析中采用电子轰击离子源及在(m/z)50～550范围内全扫描方式检测。检索图谱库NBS 75K.L及NIST 147对样品作定性分析,并根据[M~+]286及[M~+]288的丰度分别对加兰他敏和力可拉敏作定量分析。对方法做回收及精密度试验,测得回收率在93.0%～106.0%之间,相对标准偏差(n=9)为5.5%(加兰他敏)和2.4%(力可拉敏)。     

微波辅助提取石蒜和虎杖中有效成分的热力学机理研究

采用微波辅助提取(MAE)技术研究了石蒜和虎杖两种不同植物中石蒜碱、力可拉敏和加兰他敏以及白藜芦醇和大黄素提取过程的热力学机理. 以溶剂回流提取方法(SRE)作为对比, 采用一种简单的测定提取分配系数的方法, 计算了这些组分在两种提取过程中的热力学函数ΔH0, ΔS0和ΔG0, 对其化学结构与极性以及在MAE过程中的热力学行为进行了讨论, 并用扫描电镜法观察了MAE和SRE提取后样品的细胞结构. 结果表明, 石蒜和虎杖的提取是一个吸热熵增的过程, 微波的作用导致石蒜和虎杖细胞结构发生显著变化, 使MAE热力学函数变化较大, 其提取过程的热力学行为特征与SRE明显不同, 但提取效率提高.     

Simultaneous determination of galanthamine and lycorine in Lycoris radiata by a capillary electrophoresis with an electrochemiluminescence method

A novel capillary electrophoresis with electrochemiluminescence determination method was developed for the determination of two alkaloids based on the electrochemiluminescence signal enhancement effect of the tertiary amine group on tris(2,2′‐bipyridyl)ruthenium(II). A linear relationship between the electrochemiluminescence peak area and concentrations of galanthamine and lycorine in the range of 0.07 ～ 17 μg/mL and 0.07 ～ 18 μg/mL was obtained and the detection limit was 0.008 and 0.002 μg/mL, respectively. The method is selective, simple, and convenient. It had been successfully applied to the analysis of galanthamine and lycorine in Lycoris radiata samples purchased from a local market.     

Pressurized liquid extraction and anticholinesterase activity-based thin-layer chromatography with bioautography of Amaryllidaceae alkaloids

Modern extraction technique-pressurized liquid extraction (PLE) was optimised for extraction of lycorine and galanthamine (Amaryllidaceae alkaloids) from Narcissus jonquilla ‘Pipit’. Crude extracts were purified on Oasis MCX cartridges, and the alkaloids eluted with 80-100% recoveries using methanol-10% ammonia solution (3:1, v/v). Quantitative results were obtained by both HPTLC-densitometry on silica gel plates and RP-HPLC with diode array (DAD) on XTerra C₁₈ stationary phase. Both methods were fully validated in terms of specificity, precision (including intra- and inter-day measurements), LOD and LOQ values, correlation of UV spectra and linearity of calibration curves. The methods were also well correlated each other with correlation coefficients (r) 0.98823 and 0.99081, respectively, for the mean values of galanthamine and lycorine.Among the investigated solvents methanol and 1% tartaric acid methanolic solution at default conditions (120 °C, p = 60 bar, time: 10 min, one static cycle) permit the highest yields of the total sum of the alkaloids, whereas for toluene the lowest amounts were measured. Lycorine to galanthamine mean ratios were dependant on the type of solvent used, and in toluene galanthamine and related alkaloids were preferably extracted.In temperature experiments for galanthamine, the levels of this compound increased from the temperature of 20 till 150 °C in the investigated solvent systems, then decreased with slight increase from the temperature of 175 to 200 °C in 1% tartaric acid methanolic solution. When lycorine was analysed, similar trends were observed, however the maximum of the concentration was measured at a temperature about 125 °C. The ratios of the mean values of these two compounds differed in temperature-dependant experiments in both solvent systems.Further more, two TLC with bioautography approaches were used in screening for anticholinesterese properties of the extracts. No qualitative differences were found among the different solvent extracts, and AChE inhibition was correlated with galanthamine and related compounds.In conclusion, optimised PLE was much more effective than previously applied hot-solvent extraction, microwave-assisted extraction (MAE) or ultrasound-assisted extraction (USAE).     

手性试剂柱前衍生化高效液相色谱法测定α-苯乙胺的光学纯度

建立了一种简便的手性试剂柱前衍生化反相高效液相色谱测定α-苯乙胺光学纯度的方法。采用2,3,4,6-四-O-β-D-吡喃葡萄糖异氰酸酯(GITC)对α-苯乙胺进行衍生化,优化了衍生化反应参数;使用Agilent Zorbax C18色谱柱分离衍生化产物,流动相为甲醇-磷酸盐缓冲溶液(pH 3.0)(体积比为58:42),流速1.0 mL/min,检测波长241 nm,柱温为30 ℃。实验结果表明,α-苯乙胺两个对映体的衍生化产物分离良好,在0.15～15.0 mg/L范围内呈现良好的线性关系。方法的检出限为0.05 mg/L,定量限为0.15 mg/L,日内和日间精密度考察中测定值的相对标准偏差(RSD)均小于0.5%。建立的方法适用于α-苯乙胺的质量控制。     

高效液相色谱法同时测定阿达帕林凝胶剂中的主药阿达帕林和两种防腐剂

建立了同时测定阿达帕林凝胶剂中主药阿达帕林和防腐剂(苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯)含量的反相高效液相色谱法(HPLC)。采用Tigerkin C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以pH 3.0的0.02 mol/L醋酸盐缓冲液-四氢呋喃-乙腈为流动相进行梯度洗脱,在270 nm波长条件下检测。线性范围:苯氧乙醇,10～100 mg/L(r=0.9999);对羟基苯甲酸甲酯,4～40 mg/L(r=0.9999);阿达帕林,4～40 mg/L(r=0.9999)。3种组分的平均回收率为98.0%～98.6%。该方法简便、可靠,可用于阿达帕林凝胶剂中阿达帕林、苯氧乙醇和对羟基苯甲酸甲酯的同时测定。     

高效液相色谱-二极管阵列检测法同时分析兽药粉剂中11种磺胺类药物

建立了高效液相色谱-二极管阵列检测法同时测定兽药粉剂中11种磺胺类药物的分析方法。试样采用95%乙腈提取,经碱性氧化铝固相萃取小柱净化,15%乙腈复溶残渣后用Agilent TC-C18色谱柱分离,0.017 mol/L磷酸溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱,二极管阵列检测器进行检测。结果表明,在优化实验条件下,11种磺胺类药物的色谱分离和相应光谱图匹配理想;在0.25～10.0 mg/L范围内线性关系良好;兽药粉剂中添加0.5～5.0 mg/kg水平的11种磺胺类药物的回收率在67%～97%之间,相对标准偏差为1.5%～9.9%;以3倍信噪比(S/N=3)结合相应光谱图计算得11种磺胺类药物的检出限均为0.25 mg/kg。     

流动注射在线预富集-高效液相色谱法测定四种硝基类化合物

建立了以香烟过滤嘴纤维作吸附剂,在线固相萃取-高效液相色谱（SPE—HPLC）测定水中邻硝基苯甲酸、对硝基苯胺、邻硝基苯酚、3-氯硝基苯四种硝基类化合物的方法。邻硝基苯甲酸、对硝基苯胺、邻硝基苯酚、3-氯硝基苯分别在0．006～4．80、0．003～2．40、0．002～1．60、0．002～1．60mg／L范围内峰面积与浓度呈线性关系,相关系数分别为0．9994、0．9996、0．9997和0．9996;检出限（S／N=3）分别为1．0、0．8、0．6,0．6μg／L;富集倍数分别为28．2、176．6、172．1、153．3。该法用于河水中四种硝基类化合物的测定,回收率为85．41％～116．44％,相对标准偏差在1．1％～5．4％范围内。     

反相离子对色谱-直接电导检测法分析六氟磷酸根离子液体阴离子

建立了反相离子对色谱-直接电导检测六氟磷酸根(PF6-)离子液体阴离子的分析方法。用DiamonsilC18反相色谱柱为分离柱,以离子对试剂-柠檬酸-乙腈混合水溶液为流动相,考察了离子对试剂、乙腈含量、pH值及色谱柱温度对六氟磷酸根保留的影响,并讨论了相关保留机理。在优化的色谱条件下,即流动相为0.05 mmol/L氢氧化四丁铵-0.038 mmol/L柠檬酸-35%乙腈(pH 5.5),流速1.0 mL/min,色谱柱温度40℃时,PF6-与其它常见阴离子(F-、Cl-、Br-、NO3-、SO24-、BF4-)达到基线分离且保留时间在15 min内。方法检出限(S/N=3)为0.25 mg/L,标准曲线的线性范围为0.5～100.0 mg/L,峰面积和保留时间的相对标准偏差(n=5)分别为0.17%和0.15%。该法用于1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐和1-丙基-2,3-二甲基咪唑六氟磷酸盐两种离子液体中PF6-的测定,加标回收率分别为99%和104%。该方法简单、准确、可靠,实用性好。