环糊精葡萄糖基转移酶的固定化及其应用研究．Ⅱ．壳素糖作载体固定化环糊精葡萄糖基转移酶的研究

使用经戊二醛处理过的壳素糖作载体固定化环糊精葡萄糖基转移酶，研究了给酶量、吸附时间等对固定化效果的影响。考察了固定化后酶学性质的变化。实验表明，酶经固定化后，热稳定性提高，最适ｐＨ值向前移１个单位。１０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＣａＣｌ２可以使酶活力有较大提高。     

猪胰脂肪酶的固定化及其在有机相中催化丁酸甲酯和正丁醇的酯交换反应研究

考察了大孔苯乙烯－二乙烯苯交联共聚物的交联度、致孔剂量及胺化试剂对载体固定化猪胰脂肪酶的影响。选择出一种最佳载体对猪胰脂肪酶进行固定化，对比了自由酶和固定化酶在有机相中催化丁酸甲酯和正丁醇的酯交换反应。结果表明，酶经固定化后催化反应活力比自由酶提高近１倍。     

猪胰脂肪酶的固定化及其在有机相中催化丁酸甲酯和正丁…

考察了大孔苯乙烯－二乙烯苯交联共聚物的交联度、致孔剂理及胺化试剂对载体固定化猪胰脂肪酶的影响。选择出一种最佳载体对猪胰脂肪酶进行固定化，对比了自由酶和固定化酶在有机相中催化丁酸甲酯和正丁醇的酯交换反应。结果表明，酶经固定化后催化反应活力比自由酶提高近１倍。     

环糊精葡萄糖基转移酶的固定化及其应用：Ⅲ.固定化环糊精葡萄糖基转…

用固定化环糊精葡萄糖基转移酶催化淀粉环化反应，考察了反应时间，乙醇浓度和淀粉液化程度对环糊精产率的影响。环糊精产率最高达５４％，固定化酶经多次重复使用或长时间连连续操作，酶活力降低较少。     

高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学检测法分析大鼠脑微透析液中的乙酰胆碱和胆碱

建立了用高效液相色谱分离－柱后固定化酶反应器酶解－电化学检测器检测酶解最终产物Ｈ２Ｏ２的方法，分析了麻醉和自由活动大鼠脑微透析液中乙酰胆碱（ＡＣｈ）和胆碱（Ｃｈ）的含量。至少在０．２～１００μｍｏｌ／Ｌ范围内ＡＣｈ和Ｃｈ的浓度与其响应的线性关系良好，它们的检测极限都可达５０ｆｍｏｌ。对高效液相色谱结合固定化酶反应器的分析方法作了简要的讨论。     

高效液相色谱-柱后固定化酶反应器-电化学检测法分析大鼠脑微透析液中的乙酰胆碱和胆碱

 建立了用高效液相色谱分离－柱后固定化酶反应器酶解－电化学检测器检测酶解最终产物Ｈ２Ｏ２的方法，分析了麻醉和自由活动大鼠脑微透析液中乙酰胆碱（ＡＣｈ）和胆碱（Ｃｈ）的含量。至少在０．２～１００μｍｏｌ／Ｌ范围内ＡＣｈ和Ｃｈ的浓度与其响应的线性关系良好，它们的检测极限都可达５０ｆｍｏｌ。对高效液相色谱结合固定化酶反应器的分析方法作了简要的讨论。     

钛氯活化纤维素固定5’-磷酸二酯酶的研究 Ⅰ.固定化酶的制备和性质

以纤维素为载体,通过四氯化钛活化,可赋予纤维素较好的固酶功能。本文研究了固定化酶的制备条件和性质。当溶液5’-磷酸二酯酶的活力为200—300单位/毫升,经最佳条件固定化后,固定化5’-磷酸二酯酶的活力可达每克3000—3500单位(干基),酶的话力回收可达70—75％,固定化5’-磷酸二酯酶的热稳定性和贮藏稳定性与溶液酶相比有所提高。采用本法固定5’-磷酸二酯溶液酶具有载体制备简单易行、成本低廉、效果好、所用化工原料无毒等特点。     

钛氯活化纤维素固定5′-磷酸二酯酶的研究 Ⅱ.用固定化酶降解核糖核酸

用固定化5′-磷酸二酯酶在75℃及pH5.2的条件下分批降解0.5％浓度的核糖核酸(RNA),用酶量可减少到1.75个活性单位/毫升底物,溶液酶的利用率可提高6倍左右,酶解转化率达70％以上,产品质量符合国家标准。经两次工厂扩大试验结果表明,固定化酶的实际降解效率与实验室结果基本一致。     

固定化谷氨酸脱羧酶柱式反应器测定L—谷氨酸

用羧甲基化的Ｎ,Ｎ’－甲叉双丙烯酰胺交联的烯丙基葡萄糖（简称ＣＭ－ＣＡＤＢ）凝胶树脂为新型载体,研究了谷氨酸脱羧酶（ＧＤＣ）在ＣＭ－ＣＡＤＢ上的固定化与环境的依赖头等确定了酶固定化最佳条件,研究了固定化ＧＤＣ的性状与底物浓度,ｐＨ温度的依存性,动态响应特性,热稳定性的寿命,求算了米氏常数。将固定化ＧＤＣ酶柱与进样系统具ＣＯ２气敏电极的离子活度分析器－计算机数据采集系统匹配,构成酶反应谷氨酸检测装置     

多酚氧化酶在聚乙烯醇接枝谷氨酸树脂Cu(Ⅱ)配合物上的固定化

研究了固定化酶载体－聚乙烯醇接枝谷氨酸枝脂的合成及树脂络合金属铜离子后对多酚氧化酶的固定化。用红外光谱表征了树脂的结构,用DTA测定了树脂的热行为。考察了固定化酶的特性。结果表明,该树脂与Cu^2 配位后的高分子配合物能较好地对多酚氧化酶固定化,此固定化酶最适pH值为5．59和6．64,能重复多次使用,经5次使用后其活力仍保留20％。固定化酶的热稳定性比游离酶高,而米氏常数基本相同。     

壳聚糖固定L-天门冬酰胺酶的研究

研究了以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，固定化Ｌ－天门冬酰胺酶的最适条件，并对固定化天门冬酰胺酶的理化性质进行了初步探讨。分别从不同固定化程序、缓冲液及保护剂等方面进行了固定化天门冬酰胺酶的条件优化；固定化酶的活力回收可达２０％左右。固定化酶的最适范围变宽，由游离酶的最适ｐＨ＝４～６变为ｐＨ＝６～１０。连续使用６次后仍可基本维持固定化酶的活力。固定化酶对胃蛋白酶的水解性也较游离酶大大提高。     

聚苯乙烯阴离子交换树脂固定α—淀粉酶的研究（Ⅱ）

用聚苯乙烯阴离子交换树脂作载体，采用吸附法将ａ一淀粉酶固定化，研究了固定化条件和固定化酶的性能。固定化条件为：酶浓度１０ｍｇ／ｍｌ，固定化ｐＨ６．８，吸附时间１６ｈ，吸附温度６℃。固定化酶的ｐＨ稳定性、热稳定性、贮存稳定性都有一定的提高。最适作用温度及ＰＨ较自由酶为高，Ｋｍ值为自由酶的１．６倍。同时也进行了固定化酶的操作稳定性研究。     

交联烯丙基葡聚精凝胶固定化脂肪酸的研究

本文研究了烯丙基葡聚糖和N、N＇－亚甲基双丙烯酰胺经反相悬浮聚合包埋固定化脂肪酶的方法。考察了悬浮介质、交联度对固定化酶的影响，得出了包埋固定化脂肪酶的最佳条件；并测定了固定化脂肪酶的催化性能，确定了该固定化酶催化橄榄油水解的最适条件。     

粘质沙雷氏菌脂肪酶的固定化及催化拆分反式3-(4’-甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯

 对粘质沙雷氏菌脂肪酶进行了固定化研究,确定硅藻土和环氧树脂Eupergit C是较好的固定化载体. 固定化后酶的热稳定性、 pH稳定性及储存稳定性均明显提高. 以Eupergit C共价固定的脂肪酶,其操作稳定性比硅藻土吸附酶好,重复使用10批次后,剩余酶活力还有50%左右,戊二醛交联对Eupergit C固定化酶稳定性的提高没有明显效果,而硅藻土吸附酶经戊二醛交联后稳定性有所提高,经5批次反应后剩余酶活力还有50%. 使用交联后的硅藻土固定化酶(1 g, 200 U), 在两相搅拌反应器(工作体积200 ml, 甲苯∶水体积比=1)中对地尔硫卓手性前体(±)-反式3-(4’-甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯((±)-MPGM)(有机相浓度为0.5 mol/L)进行了催化拆分,经5批次反应后,共得纯(2R,3S)-(-)-MPGM 18.6 g, 产品光学纯度(对映体过量)>99%, 总收率为37.2%.     

漆树酶的固定化研究

本文对我国特产资源生漆液中漆树酶的固定化进行了研究。考查了各种无机盐溶液处理不同无机载体,活化反应及漆树酶固定化条件对固定化漆树酶性能的影响。研究表明,经ZrCl_4处理后的多孔硅胶作载体的固定化漆树酶活力回收高、稳定性好、重复使用20次其保留活力仍有75%。同时对固定化漆树酶和自由态漆树酶的反应pH、温度、K_m值作了比较。对漆树酶通过过渡金属氢氧化物固定在无机载体土的机理也作了初步探讨。     

α—胰凝乳蛋白酶的固定化及其对DL—苯丙氨酸的光学拆分

以氨丙基多孔球为载体，戊二醛为交联剂制得固定化α－胰凝乳蛋白酶。其含酶量为３．６ｍｇ／ｇ，米氏常数Ｋｍ＝１．２×１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ，最适宜温度为３５℃，ｐＨ值为７．０，对热、酸碱、甲醇以及尿素的稳定性有较大提高，Ｃａ＾２＋激活效应明显。用该固定化酶连续拆分ＤＬ－苯丙氨酸制备Ｌ－苯丙氨酸时，拆分产率高于９０％，产品纯度超过９６％；连续使用２个月后仍能保持较高酶活力。     

海藻酸钠固定化根霉脂肪酶的制备及其性质

 研究了以海藻酸钠为载体,用包埋法制备固定化德氏根霉(Rhizopus delemar)脂肪酶的条件. 将酶粉和海藻酸钠溶于pH 5.0的HAc-NaAc缓冲溶液,用注射器将此混合液滴入到0.05 mol/L无菌CaCl2溶液中,静置固化45 min, 经过滤、洗涤和干燥后得到球状固定化酶. 固定化酶的活力回收约为34.1%. 酶学性质研究表明,此固定化酶的热稳定性较好. 游离酶在 60 ℃下保温1 h已完全丧失活力,而固定化酶在100 ℃下保温1 h仅损失36.2%的活力,在100 ℃下保温6 h仍可保持46.8%的酶活力. 酶经固定化后,其橄榄油水解反应的最适温度由40 ℃上升至90 ℃, Km值由13.8 mg/ml下降为8.1 mg/ml. 常见有机溶剂对固定化酶的活力影响较小. 将该固定化脂肪酶用于非水溶剂中正戊酸异戊酯的合成,重复使用6次后,固定化酶仍保持95%的酶活力.     

基于聚乙烯醇/Fe2O3纳米颗粒的纤维素酶固定化

以聚乙烯醇/Fe2O3磁性纳米颗粒为纤维素酶固定化载体, 通过反复冻融的方法成功地实现了纤维素酶固定化. 采用透射电镜、红外光谱仪、振动样品磁强度计对固定化酶复合体进行了表征, 结果显示, 固定化酶复合体为大小约1 μm的微凝胶团, 内含10 nm左右的Fe2O3纳米颗粒. 研究影响固定化因素后发现, 当pH为6, 固定化时间为11 h, 纤维素酶/PVA质量比为4, PVA/Fe质量比为50时, 固定化纤维素酶效果最好. 通过该方法固定后酶活回收率达42%, 酶水解效率显著提高, 经过5次反应后的固定化酶相对酶活力保留50%以上. 因此, 基于聚乙烯醇/Fe2O3纳米颗粒的纤维素酶固定有利于酶的循环使用并显著提高酶的使用效率, 是一种有效固定化纤维素酶的新方法.     

葡萄糖异构酶的固定化及其性质研究

用分子沉积法，在多孔三甲胺基聚苯乙烯载体上成功地固定化了双层葡萄糖异构酶。结果表明，这种新固定化酶方法能使单位重量的因素化酶活力及蛋白载量成倍增加，活力达到１２００ＩＵ／ｇ湿胶，与吸附法相比，酶活力提高１倍，其半衰期与吸附法相比则基本相同，为４５ｄ，还确定了最佳固体化条件并测定了固定化酶的性质，固定化酶的最适反应温度比液相酶提高１５℃，而最适ｐＨ值则没有改变，Ｋｍ值与液相酶的相比有一定程度的增加，     

以甲壳胺为载体的固定化嗜热菌蛋白酶的研究

本文报道了以甲壳胺为载体,采用戊二醛交联的方法将嗜热菌蛋白酶进行固定化。以酪蛋白为废物。固定化酶的活力回收为38％。本工作研究了各种因素对固定化酶活力的影响,实验结果表明:固定化后的酶,在热稳定性、抗抑制作用等方面较原酶有一定的提高。