杜仲叶中绿原酸类物质的提取研究

该文首先采用Ｅｔ２Ｏ－ＥｔＯＨ回流法从产于江西九连山自然保护区的杜仲叶中提取绿原酸类物质、然后用铅盐沉淀，酸化，ＥｔＯＡｃ萃取，重结晶等手段对绿原酸类物质进行纯化，平均得率为０．３１％，取得了预期的结果。     

杜仲叶与皮中绿原酸的正交提取对比实验

对四川道地中药材杜仲叶与皮中所含有的一种重要的生物活性物质绿原酸进行提取工艺研究.采用乙醇—水溶液体系作浸提剂,以绿原酸提取率为指标,考察温度、乙醇浓度、料液比、溶剂pH对提取工艺的影响.结果表明,杜仲叶绿原酸的最佳工艺条件为A3B2C3D1,杜仲皮的最佳工艺条件为为A3B1,在此条件下,杜仲叶中绿原酸提取率为3.324%;杜仲皮中绿原酸提取率为0.647%.     

离子交换树脂纯化杜仲叶绿原酸条件的筛选

目的：探讨采用离子交换树脂对杜仲叶绿原酸提取液进行纯化的工艺条件。方法：本实验利用静态吸附法,分别采用AmberliteFPA98CL、Amberlite FPA958CL、强碱性苯乙烯离子交换树脂（AMBERLITE FPA90Cl）三类树脂对杜仲叶绿原酸粗提液进行纯化。结果：通过比较绿原酸的提取率和树脂吸附率筛选出最适合纯化绿原酸的工艺条件即采用罗门哈斯公司Amberlite FPA98CL树脂在pH4条件下,与其它两种树脂相比,对绿原酸的收率最高,能够达到鲜叶绿原酸的最大收率为3.04%。结论：采用罗门哈斯公司Amberlite FPA98CL树脂分离杜仲叶绿原酸可到达收率较高、纯度较好的分离效果。     

绿原酸的分离纯化工艺研究

研究从杜仲提取物中分离纯化绿原酸的工艺,确定其分离纯化参数.采用料液比1∶20水超声提取,上聚酰胺柱分离,4BV15％乙醇洗脱,洗脱浓缩液调pH为1-2静置结晶,可得85％以上的绿原酸粗晶,再甲醇重结晶,可得97％绿原酸白色针状晶体.采用此工艺可以将杜仲提取物中绿原酸由20％分离纯化至97％,工艺适合工业化生产.     

HPLC法测定双黄连片中绿原酸的质量分数

探讨高效液相色谱法测定双黄连片中绿原酸含量的方法 ,控制其质量 .Shim -packVP -ODS(4 6mm× 15 0mm ,5 μm)色谱柱 ,流动相为甲醇 -水 -冰醋酸 (2 0∶80∶1) ,流速为 1 0mL/min ,检测波长为 32 7nm .绿原酸在 0 4 0 8～ 2 0 4 0 μg范围内呈良好的线性关系 ,回归方程为A =2 84 0 95 98C +6 894(r=1.0 0 0 ) ,平均回收率为 10 0 .98% (RSD为 1.13% ) ,重复性RSD为 0 .32 % .方法简便、快速、灵敏、准确、重现性好 ,可作为双黄连片中绿原酸的质量控制标准     

酶法提取杜仲叶中绿原酸的实验研究

通过对酶法提取杜仲叶中绿原酸的影响因素分析得到最佳提取工艺参数:蒸馏水浸润→纤维素酶(45℃)和果胶酶(55℃)破坏细胞壁和大分子有机物(恒温10 min)→加热水恒温提取(50℃提取2次,每次10 min)→真空浓缩得粗品→重结晶得纯品(纯度为99.21%).本方法提取时间短、提取率高、杂质含量少,具有可操作性.     

两次制备薄层色谱分离纯化杜仲叶中的绿原酸

将杜仲叶粉先用氯仿除脂,乙醇超声提取绿原酸,再经适当萃取除杂后、通过两次制备薄层色谱纯化得到绿原酸.产品的紫外光谱特征与文献相符,薄层色谱主斑与绿原酸对照品对应,HPLC的主峰tR与绿原酸对照品的tR吻合.HPLC外标法测得产品绿原酸的纯度为91.6%以上.所建立的纯化制备方法简便、直观、对绿原酸有很好的分离效果,适合于数百毫克级~克级的制备.     

大孔树脂分离纯化杜仲叶中绿原酸的研究

通过静、动态吸附和洗脱实验,筛选出306型大孔树脂为绿原酸的吸附树脂;当上柱溶液pH值控制在2~3,吸附流速为4 mL/min,吸附完毕后用60%的乙醇洗脱,洗脱率在90%以上;洗脱液经浓缩干燥后得绿原酸粗品,纯度达40%以上。     

超声助提杜仲叶中绿原酸的溶剂效应

研究了超声条件下提取杜仲叶中绿原酸的溶剂效应.分别采用水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等不同极性的溶剂进行提取,考察了溶剂配比、溶剂pH值等因素对绿原酸提取率的影响.结果表明：用甲醇提取时,绿原酸提取率最高,超声助提杜仲叶中绿原酸的最佳溶剂条件是pH值为4.5的70%的甲醇水溶液.     

基于转录组高通量测序分析白光对杜仲愈伤组织中绿原酸含量的影响

利用Illumina HiSeq 2500平台对光暗培养的杜仲愈伤组织进行了转录组高通量测序,利用BLAST软件进行差异表达基因的功能注释和富集分析,就白光(光强为12 000 lux,16 h 光照,8 h 黑暗)对杜仲愈伤组织中绿原酸含量的影响进行了研究.结果表明:通过Trinity软件合并组装后共获得62 030个Unigenes,通过BLASTX比对,共获得25 417(40.98%)个有注释信息的Unigenes.通过对KEGG通路进行深入分析表明,白光(光强为12 000 lux,16 h 光照,8 h 黑暗)培养杜仲愈伤组织18 d,与绿原酸合成相关的3种酶基因上调表达,它们分别为苯丙氨酸解氨酶(EC 4.3.1.24,phenylalanine ammonia-lyase,PAL)、肉桂酸-4-羟基化酶(EC 1.14.13.11,trans-cinnamate 4-monooxygenase,C4H)、奎宁酸羟基肉桂酰转移酶(EC 2.3.1.133,Shikimate o-hydroxyl-cinnamoyltransferase,HCT).由此推断,白光能促进杜仲愈伤组织中绿原酸的积累.研究结果为获取高产绿原酸资源和杜仲遗传分析提供有价值的资料.     

杜仲叶脂肪酸的GC-MS分析

采用毛细管气相色谱—质谱联用方法对杜仲叶中的脂肪酸（以甲脂形式）进行分析，鉴定出１０种脂肪酸，其质量分数为９９．３２％，其中不饱和脂肪酸十六碳三烯酸、亚油酸和亚麻酸的质量分数分别为０．７５％、１．５９％和４５．８５％。     

ASE-UPLC法同时测定杜仲制剂中3种成分

建立ASE-UPLC(快速溶剂萃取仪-超高效液相色谱)法同时测定不同杜仲制剂中京尼平苷酸(GPA)、绿原酸(CA)、松脂醇二葡萄糖苷(PDG)3种指标成分含量的方法.采用70%甲醇水,温度40℃,压力103.4MPa的ASE法提取;色谱柱Acquity UPLCBEHC18(100mm×2.1mm,1.7μm);乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相;流速0.15m L/min;洗脱梯度:0~15min,70%B~90%B;检测波长237nm;柱温20℃.结果显示3种被测成分分别在选定的范围内线性关系良好;精密度、重复性良好,相对标准偏差(RSD)分别均小于3.0%;平均加标回收率在95.84%~102.69%,RSD均小于3.0%.表明所建立的方法快捷、准确、重复性好,可用于杜仲制剂中主要成分的含量测定.     

杜仲叶发育过程中结构及杜仲胶含量变化研究

应用石蜡切片法和实验室综合提胶法,研究了杜仲叶的结构发育,探讨了杜仲叶结构发育与杜仲胶积累的变化规律,旨在确定杜仲叶的最适采收季节,为生产实践提供参考。结果表明,杜仲叶内杜仲胶随着季节的变化基本呈跳跃式变化;叶片发育早期,随着栅栏薄壁组织、海绵组织等叶肉细胞的分化发育,叶片中的含胶细胞也在不断地形成、积累。七月份叶片组织结构发育成熟时,含胶细胞仍继续增加和生长,叶片含胶率总体上呈增加的趋势。由于杜仲树叶内杜仲胶为一年逐步积累的结果,11月份将近黄落的叶子含胶量较高,为1.19%。综合分析叶片生物量和杜仲胶的含量,11月份杜仲叶子黄落时收集较合适。     

模拟酸雨对杜仲叶膜脂过氧化及氮代谢的影响

研究了模拟酸雨对杜仲叶膜脂过氧化及氮代谢的影响。结果表明：杜仲叶超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT)活性在春夏两季均随酸雨pH的降低而先后降;随酸雨降雨量增大和胁迫时间的延长,3种保护酶受抑情况夏季较春季严重,膜脂过氧化产物丙二醛（MDA）含量与酸雨pH值呈显著负相关;春夏两季氮代谢关键酶硝酸还原酶（NR0和谷酰胺合成酶（GS）活性在一定pH值酸雨胁迫下随酸雨、pH值降低而降低,夏季2种酶活性下降率比春季高;可溶性蛋白质和总氮含量春夏两季与随酸雨pH降低（夏季可溶性蛋白质含量与pH值呈正相关）,由此可见,酸雨对杜仲叶膜脂过氧化及氮代谢产生了显著影响。