实验动物生产和使用中的福利保障技术

摘要: 动物福利是实验动物学科中的重要部分,随着学科的发展,现在已越来越受到科研工作者的重视。本文对实验动物生产与实验中常见的福利问题进行了归纳和分析,并介绍了可加以改善的措施和技术。     

音乐与实验动物福利的研究进展

摘要: 音乐治疗是音乐在艺术欣赏和审美领域之外的应用与发展,已经广泛运用于医疗、心理健康和特殊教育等领域。动物模型研究表明,音乐对动物生理、认知均有影响,提示音乐可以用来提高实验动物的环境丰富度,改善动物的福利水平。但是音乐在实验动物福利方面的应用十分滞后。基于音乐风格内容的多样性和动物听觉系统的差异,音乐对于实验动物的福利水平取决于音乐的类型和实验动物的品种。     

不同福利条件下ICR小鼠肝细胞NF-κB表达的比较

目的比较不同福利水平下ICR小鼠肝脏NF-κB的表达。方法选取6周龄雄性ICR小鼠,交叉使用制动和丰富环境干预形成不同的福利环境,观测小鼠的体质量增重、饲料能效及脾脏系数,ELISA法测定血清IL-2和CORT,实时定量PCR和免疫印迹法分别检测小鼠肝细胞内NF-κB p65的mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,丰富环境组小鼠的体质量增重显著提高(P0.05),其他指标无差异(P0.05);丰富环境+制动组小鼠的体质量增重、脾脏系数显著低于对照组(P0.05),而CORT、NF-κB p65的基因和蛋白表达显著高于对照组(P0.05);制动组的体质量增重、饲料能效、脾脏系数及血清IL-2均显著低于对照组(P0.05),CORT、NF-κB p65的基因和蛋白表达均显著高于对照组(P0.05)。其中制动组的体质量增重显著低于丰富环境+制动组(P0.05),CORT、NF-κB p65的基因和蛋白表达显著高于丰富环境+制动组(P0.05)。结论不同组别小鼠存在福利水平差异,NF-κB表达差异与福利差异相类似,福利水平与NF-κB表达水平之间存在紧密关联。     

国内外实验动物玩具的发展现状及展望

摘要: 实验动物作为科学实验的基础条件,在生命科学发展中起到重要作用。随着国际动物权益保护观念的深入人心,保护实验动物、维护实验动物福利也呼声日高。在这个大环境下,实验动物玩具作为实验动物福利之一也逐渐被人们重视起来。本文将讨论实验动物玩具的发展现状及未来方向。     

ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠杂交群体的建立

摘要: 目的建立ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷的CＲG 小鼠杂交群体。方法将ＲAG2 基因缺陷小鼠与IL2ＲG 基因缺陷小鼠分别进行繁殖,选取ＲAG2 基因缺陷雄鼠ＲAG2( － / － ) 与IL2ＲG 基因缺陷雌鼠IL2ＲG( － / － ) 进行配对,培育杂交后代,通过PCＲ 扩增基因组ＲAG2 和IL2ＲG 基因进行鉴定; 应用流式细胞仪分析检测ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠外周血T 细胞( CD3 + ) 、B 细胞( CD19 + ) 和NK 细胞( CD49b + ) 含量; 并测定8—12 周龄ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠血液生理生化及主要脏器重量指标。结果成功繁育ＲAG2 基因缺陷小鼠和IL2ＲG 基因缺陷小鼠,筛选获得稳定的ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠并成功保种和扩群; 该双基因缺陷小鼠外周血淋巴细胞中T 细胞、B 细胞,NK 细胞比例显著降低( P ＜ 0. 05) ; 与相同周龄野生型C57BL/6 相比9 项血清生化指标无明显变化( P ＞ 0. 05) ; 18 项血液生理指标中红细胞( ＲBC) 和血红蛋白( HGB) 含量显著降低( P ＜ 0. 05) ; 白细胞( WBC) 、淋巴细胞数( LYMPH) 、淋巴细胞比率( LYM) 、单核细胞、中性细胞数( NEUT) 降低极显著( P ＜ 0. 01) ; 脾脏重量显著均低于野生型C57BL/6 小鼠( P ＜ 0. 05) ; 人肝肿瘤传代细胞移植于ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠后,肿瘤移植成功率和生长速率均明显高于亲本单基因缺陷小鼠( P ＜ 0. 05) ,成功获得了临床肝癌病人肿瘤组织的异种移植模型。结论 成功构建筛选出ＲAG2 /IL2ＲG 双基因缺陷小鼠杂交群体。     

实验动物机构认可制度助力实验动物质量保障体系的建设与完善

摘要: 实验动物福利和伦理已经成为实验动物质量保障体系构建过程中需关注的重要内容。本文在介绍部分国外发达国家实验动物管理的核心、管理模式和管理方法的基础上,对构建适合我国国情的实验动物管理模式提出了设想和展望,并介绍了我国目前正在构建的实验动物机构认可制度的研究进展及认可示范情况。     

利用CRISPR-Cas9 构建syncytinA 条件敲除小鼠

摘要: 目的构建syncytinA( 合胞素A) 条件敲除小鼠,为进一步研究syncytinA 在胎盘形成过程中发挥的融合及非融合作用及研究子痫前期病理模型提供基础。方法在用ES 细胞打靶完成syncytinA 外显子上游loxp 同源重组基础上,利用CRISPR-Cas9 得到syncytinA-loxp 小鼠。构建syncytinA-loxp 转基因载体及sgRNA,通过原核显微注射方法将构建好的doner、Cas9 及sgRNA 一并注射到C57 小鼠受精卵中,并移植入同期受孕代孕受体ICR 输卵管中获得子代小鼠。用PCR 方法检测子代鼠尾基因型, loxp 阳性小鼠与WT 交配获得syncytinA-loxp 小鼠。为了检测syncytinA-loxp 能否被敲除,通过与prime1cre 及zp3cre 交配获得syncytinA － / － ,PCR 及q-PCR 检测syncytinA 是否被敲掉。结果经PCR 及q-PCR 方法检测,我们成功得到syncytinA － / － 胚胎。结论syncytinA 条件敲除小鼠构建成功,为更好的研究它在胎盘及子痫前期中的功能提供了基础。     

影像技术在动物实验中的应用

摘要: 影像技术研究是借助于某种介质与机体的相互作用,把内部组织器官结构、密度以影像方式表现出来。常用的方法包括: X 线、CT、MＲI、超声、血管造影和生物发光等。人们通过各种影像技术可以连续、准确、甚至无创观察动物体内疾病变化,极大提升了实验研究水平,推动疾病检测由传统的解剖形态,向功能、代谢,甚至是受体和基因的分子水平发展,其中涉及的福利是指在整个影像检测过程中保证动物的康乐。目的就是在动物福利与“人类利益”之间找到平衡点。即关注影像检测中可能影响动物康乐的因素,从而减少动物的痛苦; 同时,当福利条件满足动物康乐时,可最大限度地发挥影像实验的效能。     

鱼油中EPA 与DHA 不同配比对降血脂作用效果的比较

摘要: 目的通过高脂血症大鼠模型研究鱼油中二十碳五烯酸( EPA) 与二十二碳六烯酸( DHA) 的不同配比在降血脂方面的变化。方法给予70 只雄性SD 大鼠采用高脂高糖乳剂灌胃10 d,按总胆固醇( TC) 水平随机分为模型对照组、非诺贝特胶囊组( 28 mg /kg) 、海豹油组( 333 mg /kg) 、鱼油A( 167 mg /kg) 、鱼油C( 150 mg /kg) 、鱼油D( 183 mg /kg) 、鱼油E( 167 mg /kg) , 10 只/组,每天给予高脂高糖乳脂及治疗,连续30d。治疗结束后,检测各组动物大鼠血清( TC) 、甘油三酯( TG) 、高密度脂蛋白( HDLC) 、低密度脂蛋白( LDLC) 、白介素-2( IL-2) 、白介素-6( IL-6)及肝脏系数,并观察肝脏组织病理改变。结果与模型对照组相比, 0. 028 g /kg 非诺贝特胶囊可以降低高脂血症大鼠的TC、TG、HDLC、LDLC 含量,减轻肝细胞脂肪变性程度,但可增大肝脏系数( P ＜ 0. 05 或P ＜ 0. 01) ; 海豹油可以降低TC、TG、HDLC、LDLC 含量( P ＜ 0. 01) ,鱼油A、鱼油E 可以降低TC、HDLC、LDLC 含量( P ＜ 0. 01) ,鱼油D 可以降低TC、TG、HDLC、LDLC 含量( P ＜ 0. 01) ,但海豹油、鱼油A、鱼油C、鱼油D、鱼油E 均未见减轻肝细胞脂肪变性程度( P ＞ 0. 05) 。结论对于高脂血症大鼠模型,鱼油A、鱼油E 均具有降低TC、HDLC 和LDLC 的作用,鱼油D具有降低TC、TG、HDLC、LDLC 的作用,鱼油C 不具有降低TC、TG、HDLC、LDLC 的作用。     

C57 － ras 转基因小鼠模型的血液生理生化指标比较分析

摘要: 目的测定C57 － ras 转基因小鼠的血液生理生化正常值,对成年动物两性的正常值进行比较,并比较4 周龄和8 周龄的血液生理生化正常值。方法将20 只8 周龄和20 只4 周龄的近交系C57 － ras 转基因小鼠,采血后,用日本光电MEK － 7222K 血球分析仪测定血液生理指标,用OLYMPUS AU400 全自动生化分析仪测定血清生化指标。结果8 周龄动物血液生化指标中,ALB、GLU 和CHO,3 项指标雌雄间比较有显著性差异( P ＜ 0. 05) ,血液生理指标中WBC和LYM 这2 个指标雌雄差异有显著性( P ＜ 0. 05) ; 在4 周龄和8 周龄的血液生化指标比较,其中ALT、TP、ALB、ALP、P、CHO 和T． Bili,7 项有显著性差异( P ＜ 0. 05) ; 血液生理指标4 周龄和8 周龄比较,WBC、ＲBC、HGB、HCT、MCV、MCHC、ＲDW、PLT、PCT、MPV、NEUT 和LYM 12 项指标有显著性差异( P ＜ 0. 05) 。结论成年的C57 － ras 转基因小鼠的血液生理生化值,部分指标两性间测定值有差异; 4 周龄和8 周龄C57 － ras 转基因小鼠的血液生理生化值中多数指标差异显著; 年龄对C57 － ras 转基因小鼠的血液生理生化值的影响比性别对其影响要大。     

P407 诱导和脂肪乳剂建立小鼠高血脂模型的比较研究

摘要: 目的比较P407( 泊洛沙姆) 和脂肪乳剂的小鼠高血脂模型的特点。方法采用灌胃法给予小鼠脂肪乳剂,腹腔注射法给予小鼠P407,之后测血清中的胆固醇( TC) 、甘油三酯( TG) 、高密度脂蛋白( HDL-C) 和低密度脂蛋白( LDL-C) 。结果脂肪乳剂造模后小鼠TC、LDL-C 显著升高,TG 显著降低,HDL-C 的变化没有显著性。P407-1d 组的小鼠TC、TG、LDL-C 显著升高,HDL-C 显著下降,符合临床典型高血脂的特征。结论用P407 建立小鼠高血脂模型更快速,更接近临床高血脂症。     

中国疾病预防控制中心实验动物从业人员岗位培训机制的研究

摘要: 通过对中国疾病预防控制中心实验动物从业人员现状调查,分析实验动物从业人员培训中存在的问题,建立和完善适合本中心实验动物从业人员岗位培训机制。重视从业人员上岗培训和人才队伍的建设,提高实验动物人才队伍专业素质和专业技术水平,促进实验动物工作的快速发展。     

人源性肿瘤异种移植的小鼠模型在肿瘤精准医学中的应用

摘要: 人源性肿瘤异种移植( PDX) 的小鼠模型使用至今已有近半个世纪的历史,是肿瘤学研究领域中的重要工具之一。与传统细胞株荷瘤小鼠模型不同的是,PDX 小鼠模型最大程度上保留了患者体内肿瘤真实的基因组、转录组、蛋白组学以及异常的信号通路特征,被广泛用作肿瘤患者的替代模型进行个性化药物筛选等诸多方面的研究。近年来,随着肿瘤精准医学概念的提出,对PDX 小鼠模型的需求和利用正日益扩大,尤其是借助于PDX 小鼠模型进行肿瘤有效药物的筛选和评估,并逐步将其应用于指导肿瘤患者的个体化治疗,正逐步走向临床。本文就PDX小鼠模型制备的关键因素、临床应用和潜在的不足进行综述。     

5 /6 肾切除小鼠中矿物质与骨代谢紊乱的特征

摘要: 目的通过制备5 /6 肾切除( 5 /6 Nx) 小鼠慢性肾脏病( CKD) 模型,观察小鼠成纤维生长因子23( FGF23) 及钙磷代谢指标,有助于研究矿物质与骨代谢紊乱的发病机制。方法28 只C57 雄性小鼠适应性饲养1 周后,切除模型组约5 /6 左肾,1周后切除右肾, 16 周后处死后收集血尿和肾脏组织标本,常规检测血尿FGF23、甲状旁腺素( PTH) 、活性维生素D、钙、磷等指标,观察肾脏病理。结果与假手术组和正常对照组相比,术后16 周5 /6 Nx 小鼠出现体质量减低,血清FGF23、PTH,血磷等异常升高,活性维生素D 水平显著降低,尿蛋白增加。肾脏病理发现系膜基质增生、胶原沉积及纤维化明显,和肾小球代偿性肥大。结论5 /6 Nx 小鼠可以出现明显的矿物质与骨代谢紊乱特征,是研究CKD 骨病合适的模型。     

ApoE － / － 小鼠的繁殖与鉴定

摘要: 目的繁殖和鉴定ApoE － / － 小鼠,建立血管损伤模型,为进一步研究动脉粥样硬化奠定基础。方法将引进的小鼠采用1 只雌性与1 只雄性同笼的方式进行繁殖。从子代小鼠尾巴中提取DNA,用PCＲ 法和琼脂糖凝胶电泳法鉴定小鼠的基因型。获取ApoE － / － 纯合子小鼠,并绘制其0 ～ 20 周龄生长曲线。采用油红O 脂类染色法从血管形态学方面观察ApoE － / － 小鼠。结果成功繁育出的ApoE － / － 纯合小鼠较C57 小鼠生长缓慢,且20 周龄ApoE － / －小鼠血管有明显损伤。结论利用ApoE － / － 纯合子小鼠能够建立良好的血管损伤模型。     

多种沙门氏菌分离培养基效果比较及在实验动物和垫料检测中的应用

摘要: 目的改进实验动物沙门氏菌分离培养方法,建立垫料中沙门氏菌检测方法。方法参考国内外沙门氏菌检测方法,用不同分离培养基对沙门氏菌、大肠杆菌和变形杆菌进行培养。选用最佳筛选效果培养基对动物肠道和垫料样品进行检测。结果BPW 预增菌、MKTTn 选择性增菌转种XLT4 培养基分离沙门氏菌的效果优于其他培养基,在1015 份动物样品中检测出3 份沙门氏菌阳性,能够检测出垫料中1CFU/g 的沙门氏菌。结论改进的沙门氏菌分离培养方法检出率高于现有国标方法,结果准确,可用于实验动物沙门氏菌及垫料的检测。     

小鼠巨细胞病毒PCR 诊断方法的建立及其应用

摘要: 目的建立小鼠巨细胞病毒( MCMV) PCR 检测方法,并进行初步应用。方法根据NCBI 公布的巨细胞病毒设计引物,进行PCR 体系优化、敏感性、特异性测试; 运用优化后的方法,对87 份小鼠血清进行检测,对阳性样本进行测序分析。结果建立的小鼠巨细胞病毒PCR 方法灵敏度高,特异性好,初步检测4 个屏障设施的87 份小鼠血清, 13 份为阳性,通过测序证实为小鼠巨细胞病毒,验证了此方法的可行性。结论为小鼠巨细胞病毒的快速检测提供了方法。     

小鼠肝肿瘤细胞原位灌注分离培养方法的建立

摘要: 目的建立一种有效分离小鼠肝肿瘤细胞的原代培养方法,为肝癌发生发展的机制研究提供有效的实验手段。方法以9 月龄H-ras12V 转基因肝癌小鼠为实验材料,采用传统的小鼠肝细胞原代培养的灌注分离法,并对其进行改进,即在灌注的同时,用剪刀剪去肿瘤表面阻塞的血管和组织,疏通灌注液流,达到有效消化肿瘤组织的目的。对用此改良灌注法分离的肝肿瘤细胞和肿瘤周围组织细胞进行成活率计数,并进行后续的原代细胞培养,观察第3、5、7 天的细胞生长状态和形态特征。结果通过对传统的灌注分离肝细胞法进行改良,分离的肝肿瘤细胞成活率由未改良前的10%提升到40%。原代培养的结果表明,分离的肝肿瘤细胞与肝肿瘤周围的正常肝细胞的形态和随时间延长的凋亡变化状态没有显著差异。结论改良的灌注法能够有效的分离小鼠肝肿瘤细胞,并显著提高其存活率和细胞质量,可用于后续的原代细胞培养并开展相关的实验。另外,本文对改良灌注法的详细叙述也为相关的科研工作者提供了切实可行的操作规程。     

实验动物从业人员培训考核系统的应用与推广

摘要: 实验动物从业人员培训考核系统的7 个子系统已经全部建立起来,并在推广中不断完善。其中,实验动物从业人员上岗证考试系统于2014 年4 月份正式在北京地区推广使用,到2015 年6 月底,北京举行99 场考试,参考7 439人,合格人数为6 709 人,合格率95. 35%; 同时,黑龙江、内蒙、天津、辽宁、陕西和四川等地也已组织考试或正在准备采用该系统考试。实验动物从业人员培训考核管理系统的推广和应用,规范了不同省市间实验动物人员培训内容,统一了考核标准,达到了全国实验动物从业人员素质评价的一致性。     

实验动物质量检测信息资源的建设与共享

摘要: 实验动物质量检测信息资源共享是我国实验动物管理工作顺应社会信息化潮流的趋势所在。文章在正确认识实验动物质量检测信息资源内涵、具体分析实验动物质量检测信息资源共享现状的基础上,系统论述了实现实验动物质量检测信息资源的共享协调解决机制。