四川泡菜乳酸菌的分离鉴定及其特性研究

以6种四川泡菜汁为材料,分离到11株菌,均为革兰氏阳性菌株,接触酶实验呈阴性.从中筛选出一株产酸能力强、生长速度快的菌株,菌株编号为0708262-1.采用乳酸定性分析测出该菌发酵产物为乳酸.之后经Biolog微生物鉴定仪进一步鉴定,确定该菌株为Lactococcus lactis.该菌株的最适生长pH 为5～7,最适生长温度为30 ℃,最适生长盐浓度为0～5%.     

一株新型乳酸菌素产生菌的分离及其鉴定

从新鲜牛乳中分离得到乳酸菌Ｘ４。该菌株在发酵过程中产生的乳酸菌素有较广的抑菌谱,不仅对芽孢杆菌、葡萄球菌、链球菌等革兰氏阳性细菌的生长具有较强的抑制作用,而且对大肠杆菌、沙门氏菌等革兰氏阴性细菌的生长也具有较强的抑制作用。经鉴定,Ｘ４ 菌株为乳脂链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍ ｏｒｉｓ ｓｐ．Ｘ４）。     

克雷伯杆菌1,3-丙二醇氧化还原酶的分离纯化及其酶学性质

在有氧条件下,利用DEAE Sepharose Fast Flow弱阴离子离子交换层析和Blue Sepharose CL-6B亲和层析,同时分离并提纯克雷伯杆菌胞内的1,3-丙二醇氧化还原酶和甘油脱氢酶.研究表明,1,3-丙二醇氧化还原酶的纯化倍数为35.86倍,回收率为5.17%,该酶最适表观反应温度为57 ℃,最适反应pH值为9.5.在30 ℃及pH=8.0～10.0时,该酶具有良好的稳定性.在45 ℃和pH=9.5条件下,该酶以1,3-丙二醇和NAD+为底物,其米氏常数Km分别为15.8,0.2 mmol·L-1.1,3-丙二醇氧化还原酶对生理反应底物3-羟基丙醛活性最大,对其他醇类也有氧化能力.Mn2+对酶有显著激活作用,巯基保护剂能明显提高酶的活力.     

和田维吾尔族长寿老人肠道益生乳酸菌的分离鉴定

【目的】从和田维吾尔族长寿老人粪便中筛选并鉴定定植肺遣的益生乳酸篱。通过数量和种类与一般人进行比较,为后续筛遗高抑茵活性,具有降胆固醇功能的茵株提供基础。【方法】首先用微生物平板计数法统计粪便中的细菌总数,然后用改良的MRS＋CaCO3固体培养基筛选乳酸茵,经形态学．生理生化实验进行初步鉴定,挑进出18株长寿老人源肪道乳酸茵和9株一般人源肠道乳酸菌,并进行16SrDNA序列鉴定。【结果】从和田长寿老人粪便中分离得到乳酸茸18株,其中8株属于植物乳杆菌,10株属于肺球菌,一般人粪便中分离得到乳酸菌9株,都属于肠球菌。长寿老人肠道中腑球菌占优势,但是一般人肠道中没有植物乳杆菌,只有肪球菌。【结论】经形态学,生理生化,分子錾定等方法从和田长寿老人腑道中分离出的27椿乳酸茼属于肠球茸和植物乳杆菌的不同变异品系,为进一步研究抑菌活性,降胆固醇功能,安全性并益生茵与长寿的关系莫定一定的基础。     

1,3-丙二醇的脱盐工艺

1,3-丙二醇（1,3-Propanediol,简称1,3-PD）是重要的溶剂和化工原料,主要用于合成聚酯,聚氨酯等可生物降解材料。本文讨论采用化工工业传统的沉淀法除去发酵液中的盐类物质,同时可回收各种副产品,产生增值效应。     

两种策略实现1,3-丙二醇关键酶基因的共表达

甘油脱水酶(GDHt)和1,3-丙二醇氧化还原酶(PDOR)是甘油歧化为1,3-丙二醇(1,3-PD)的两个关键酶。采用多顺反子重组和质粒共存两种策略,对来自克雷伯肺炎杆菌(Klebsiela pneumoniae)的两个关键酶进行共表达。构建表达载体pET-28a-dhaB1B2B3-dhaT将两酶基因dhaB1B2B3和dhaT用SD序列相隔,在E.coli BL21(DE3)高水平共表达了GDHt 3个亚基和PDOR,表达蛋白分别约占菌体总蛋白的18%、9%、7%和9%。质粒pET-28a-dhaB1B2B3和pET-22b-dhaT共转化E.coli BL21(DE3)得到稳定的双质粒系统,48h后84%的细胞能同时含有两种质粒,GDHt 3亚基和PDOR分别约占菌体总蛋白的16%、8%、6%和14%。两种酶在两种表达方法下均显示高于原始菌株的酶活力。     

克雷伯氏肺炎杆菌生产1,3-丙二醇代谢途径中的酶活变化

考察了不同条件下克雷伯氏肺炎杆菌(Klebsiella.pneumoniae)合成1,3-丙二醇(1,3-PD)的3种关键酶(甘油脱氢酶(GDH)、1,3-PD氧化还原酶(PDOR)及甘油脱水酶(GDHz))的表观酶活变化。结果显示:这3种酶的酶活变化与Klebsiella.pneumoniae的1,3-PD代谢不完全相关。用SDS-PAGE电泳分析上述不同发酵条件下酶活变化,结果显示不同于3种酶的蛋白条带,Mr约为4.0×104位置的蛋白条带有明显的变化,这可能与菌体代谢过程相关,结论有待进一步深入研究。     

酸乳中乳酸菌的分离及其发酵性能测试

酸乳中的乳酸菌有乳酸杆菌和乳酸球菌两种，本文选用较为简单的培养基，通过调节ｐＨ值对其进行分离。从平皿中挑选溶钙圈较大的杆菌和球菌菌落各２个作为供试菌株，进行发酵性能测试，结果表明：这些菌株均能产酸，活性较高，按比例再组合成酸乳发酵剂，使产酸时间缩短，酸度高。在实际生产中应用此法，可以不断优选高产乳酸菌株。     

产共轭亚油酸乳酸菌的选育和鉴定

采用紫外分光光度法测定共轭亚油酸的含量,从13株实验室保存的乳酸菌中筛选出8株具有转化亚油酸生成共轭亚油酸能力的菌株.其中As1.2686产量最高,发酵液中共轭亚油酸含量达到13.63 mg/L;其次是菌株B11693,共轭亚油酸产量为11.55 mg/L.选择B11693做进一步的菌种鉴定,将传统的形态学、生理生化鉴定方法和细菌16SrDNA分子生物学鉴定方法相结合,鉴定菌株B11693为短乳杆菌.     

甘油发酵生产1,3-丙二醇的菌种筛选

本实验室从上海地区的活性污泥中分离得到能使甘油转化产生1,3-丙二醇的细菌,经过初步筛选和GC-MS分析鉴定,得到一株转化率较高的菌株,随后对其发酵条件和培养基成分进行初步的探索,确定了较为优化的培养基配方．此菌株的甘油转化率达到47．3％．     

用于乳酸菌鉴定的几种分子生物学方法

对几种比较常用的乳酸茵分类和鉴定的分子生物学方法,如AFLP、rep-PCR等的原理、方法进行了较详细的介绍和比较。     

乳酸菌胞外多糖的提取与纯化

对乳酸茼胞外多糖的提取纯化进行了较为深入的研究,分别从保加利亚乳杆菌和嗜热乳链球菌的牛乳培养物中提取胞外多糖并进行了纯化．为进一步研究乳酸菌胞外多糖奠定了基础。     

酸乳中乳酸细菌的分离和鉴定

从酸乳中分离了乳酸细菌2属8个种,其中乳脂链球菌、保加利亚乳酸杆菌产酸率较高。     

耐酸乳酸菌的筛选及初步鉴定

以自然发酵泡菜汁液为菌源,以不同的pH值作为对照,并利用不同的pH值作为筛选的初步条件,对耐酸乳酸菌进行筛选,然后对筛选出的菌株做定性实验,包括:产生溶钙圈,革兰氏染色阳性,以及接触酶反应呈阴性.在本实验条件下初步筛选出耐酸性强的2株菌株:菌株2,菌株3,同时,对分离出的乳酸菌菌株划线于MRS固体斜面培养基上,于4℃下保存,为进一步研究奠定了良好的基础.     

6株光合细菌的富集分离及初步鉴定

从保定市护城河及白洋淀底泥中富集分离出6株光合细菌,分别编号为PSB-1、PSB-2A、PSB-2B、PSB-3、PSB-4、PSB-5。通过形态学观察及生理生化特性试验,以伯杰细菌鉴定手册第九版为依据,鉴定认为PSB-1、PSB-2B、PSB-3、PSB-5属于红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)的成员,PSB-2A属于红细茵属(Rhodobacter)的成员,PSB-4属于蓝细菌(Cyanobacteria)。     

宫廷奶酪中优良乳酸菌菌株的分离与鉴定

利用梯度稀释法和划线纯化法对4种宫廷奶酪中的乳酸菌进行初筛,再通过产酸实验和过氧化氢酶实验进行复筛,得到4株乳酸菌。通过形态学特征观察和16S rDNA序列分子鉴定,确定2株为屎肠球菌(MRSA1、MRSB1),2株为乳明串珠菌(MRSA2、MRSD3)。抑菌实验表明乳明串珠菌MRSA2对大肠杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌具有良好的抑菌特性;4株菌均有抗氧化活性,菌悬液的DPPH自由基清除能力和羟自由基清除能力均高于无细胞提取物,其中菌株MRSA2菌悬液DPPH自由基和羟自由基清除能力分别高达60.67%和31.86%。研究筛选出的具有良好抑菌特性和抗氧化活性的乳明串珠菌MRSA2在功能性食品研发中具有潜在的应用价值。     

白酒窖泥中乳酸菌分离鉴定及其发酵产挥发性风味物质比较

从白酒窖泥中分离得到11株乳酸菌,经16S rDNA基因序列同源性分析,鉴定为1株短乳杆菌、1株鼠李糖乳杆菌、2株干酪乳杆菌和7株铅黄肠球菌。 分析了11株菌MRS培养基发酵产乳酸性能,结果表明:乳酸产量与菌群生长呈正相关,鼠李糖乳杆菌L₉、干酪乳杆菌L₁₀与L₁₁发酵液乳酸含量较高,分别为15.74、15.58、14.74g/L。4株代表菌相同条件下发酵高粱培养液产挥发性风味组分,共有物质13种,包含了白酒中重要香气成分:乙酸、己酸、乙酸苯乙酯和苯乙醇,且乙酸、己酸相对含量较高。各菌产可挥发性组分差异明显,相对含量较高的化合物种类为:短乳杆菌L₅产烷烃类化合物(27.91%),铅黄肠球菌L₈产醇类化合物(43.14%),鼠李糖乳杆菌L₉产酯类(7.35%)、酮类(3.61%)和吡嗪类(3.3%)化合物,干酪乳杆菌L₁₁产酸类(27.98%)和芳香类(5.96%)化合物。仅有短乳杆菌L₅产四甲基吡嗪,短乳杆菌L₅和铅黄肠球菌L₈可明显产乙醇,鼠李糖乳杆菌L₉和干酪乳杆菌L₁₁产3-羟基-2-丁酮。这些物质对白酒风味和口感有重要影响。研究显示,窖泥中各种乳酸菌特征不一,对白酒酿造有不同影响。本研究旨在为进一步挖掘白酒酿造功能微生物、拓展乳酸菌的应用提供理论依据。     

酸菜发酵的乳酸菌筛选及初步研究

本文从市售酸菜中分离出一株适合工业化生产的酸菜发酵菌株，通过鉴定为乳酸杆菌属，代时为２．３小时，其发酵产酸时间在２８℃时为８小时达到ＰＨ４．１。工业化发酵生产时为２２℃发酵１０天，产品发酵结束。     

三株染料脱色优势菌的分离与鉴定

从温州印染厂废水池污泥中分离出三株染料脱色优势菌,其中Ａ１对活性桃红ＫＤ－８Ｂ脱色率为８７．５％,Ａ２对活性桃红ＫＤ－８Ｂ脱色率为９０．２％,Ａ３对弱酸猩红ＦＧ的脱色率为８６．４％,并根据各菌株的个体、群体形态和生理化实验对细菌进行鉴定,三株细菌分别定名为：Ａ１为睾丸酮假单胞菌,Ａ２为嗜麦芽黄单胞菌,Ａ３为恶臭假单胞菌。     

海星内生细菌的分离与初步鉴定

从罗氏海盘车（Aster rollestoni Bell）的胃、幽门盲囊和生殖腺内共分离到20株菌株．其中从其胃中分离到14株,幽门盲囊中分离到5株,生殖腺中分离到1株．根据菌落及菌体形态特征和生理生化实验结果初步认定海星胃中的W1^#、幽门盲囊中的Y1^#以及生殖腺中的S1^#为同一菌株,另外海星胃中的两株菌株（W13^#、W2^#）分别与幽门盲囊中的两株菌株（Y3^#、Y4^#）相同．所得菌株中只有一株为革兰氏阳性球菌,其余为革兰氏阴性杆菌．实验表明海星内生细菌中有62．5％的菌株分属于假单胞菌属（Pseudomonas）和弧菌属（Vibrio）．