白眉蝮蛇蛇毒L-氨基酸氧化酶的纯化与表征

用离子交换和凝胶过滤层析技术从长白山白眉蝮蛇蛇毒(Agkistrodonblomhoffiusurensis)中分离得到了L氨基酸氧化酶(Laminoacidoxidase),经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOFMS)鉴定,发现L氨基酸氧化酶由两个不相等的亚基组成,一个亚基的分子量约为36000,另一个亚基分子量约为57000.以L-亮氨酸作为底物进行L-氨基酸氧化酶活力测定时发现,其反应的适宜pH值为45.5和89,紫外吸收光谱明显表现出核黄素蛋白的特征.     

小肠蔗糖酶的化学修饰及对酶活力的影响

考察了苯甲基磺酰氟、N-溴化琥珀酰亚胺、琥珀酸酐、三硝基苯磺酸对猪小肠蔗糖酶活性的影响。将猪小肠匀浆后的粗提取物进行分段盐析、DEAB-Sepharose柱层析及Sephacryl S-200、Sephadex G-200凝胶过滤等纯化步骤，得到聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一蛋白质区带，比活力为1．79units/mg，经12％SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为一条区带，其亚基相对分子质量为51000。该酶的功能基团是半胱氨酸的巯基，蔗糖酶分子内没有二硫键存在。     

家兔骨胳肌中结合乳糖的凝集因子的分离纯化与性质

本文用乳糖尿素液和离心分离法从家兔骨胳肌中提取结合乳糖的凝集因子,再用DEAE纤维素离子交换柱层析和Sepharose 4B柱层析进一步纯化。经SephadexG-75柱层测定,其分子量约为28,000道尔顿;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,其亚基分子量约为14,000道尔顿。该因子能凝集经胰蛋白酶处理过的兔红细胞,胰蛋白酶、EDTA和乳糖能抑制其凝集作用。     

长白山白眉蝮蛇蛇毒酶的基质辅助激光解吸质谱分析

用基质辅助激光解吸飞行时间质谱法对长白山眉蝮蛇蛇毒所含４种主要酶：磷脂酶Ａ２,精氨酸酯酶,纤溶酶及Ｌ－氨基酸氧化酶进行了纯度鉴定和分子量测定,结果表明ＭＡＬＤＩ－ＴＯ－ＦＭＸ具有灵敏度高,分辨能力强,分析时间短及样品用量少等优点。用ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ法分析蛇毒酶的纯度和分子量简捷,快速且重现性好,是ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳所无法比拟的。     

淀粉酶产色链霉菌TUST2中ε-聚赖氨酸降解酶的纯化和性质

分离得到产抗菌聚氨基酸--ε-聚赖氨酸菌株淀粉酶产色链霉菌TUST2,从中纯化了ε-聚赖氨酸降解酶,并对其性质进行了研究.结果表明,该酶为膜结合蛋白.为提取该降解酶,先收集菌体细胞并用超声波破碎,细胞膜部分用1.0 moL/L NaSCN溶液溶解.将粗酶液进行Sephadex G100凝胶柱层析分离.用100mmol/L磷酸缓冲液洗脱,收集活性部分.纯化后的样品用SDS-PAGE检测,酶亚基分子量约为54700.酶活力在pH=6.0～9.0间稳定,最适宜pH=7.0.酶的最适温度为30℃,在10～50℃水浴30 min酶活力未见明显下降.研究了不同金属离子对酶活力的影响,结果表明,Zn~(2+),Cu~(2+)和Fe_(3+)可分别提高酶活力29.72%,15.85%和15.08%;但Ag~(+),Hg~(2+),Co~(2+)和Mn~(2+)对酶活力有强烈的抑制作用.Ca2~(2+),K~+和Ba~(2+)对酶活力没有影响.添加4%Tween-80能提高酶活力10%,但EDTA能强烈抑制酶活力.研究结果表明,此降解酶的性质与白色链霉菌产生的ε-聚赖氨酸降解酶的性质相似.     

淀粉酶产色链霉菌TUST2中ε-聚赖氨酸降解酶的纯化和性质

分离得到产抗菌聚氨基酸ε-聚赖氨酸菌株淀粉酶产色链霉菌TUST2, 从中纯化了ε-聚赖氨酸降解酶, 并对其性质进行了研究. 结果表明, 该酶为膜结合蛋白. 为提取该降解酶, 先收集菌体细胞并用超声波破碎, 细胞膜部分用1.0 mol/L NaSCN溶液溶解. 将粗酶液进行Sephadex G100凝胶柱层析分离. 用100 mmol/L磷酸缓冲液洗脱, 收集活性部分. 纯化后的样品用SDS-PAGE检测, 酶亚基分子量约为54700. 酶活力在pH=6.0~9.0间稳定, 最适宜pH=7.0. 酶的最适温度为30 ℃, 在10～50 ℃水浴30 min酶活力未见明显下降. 研究了不同金属离子对酶活力的影响, 结果表明, Zn²⁺, Cu²⁺和Fe³⁺可分别提高酶活力29.72%, 15.85%和15.08%; 但Ag⁺, Hg²⁺, Co²⁺和Mn²⁺对酶活力有强烈的抑制作用. Ca²⁺, K⁺和Ba²⁺对酶活力没有影响. 添加4%Tween-80能提高酶活力10%, 但EDTA能强烈抑制酶活力. 研究结果表明, 此降解酶的性质与白色链霉菌产生的ε-聚赖氨酸降解酶的性质相似.     

疏水缔合效应对聚丙烯酰胺类水溶液结构和流变性质的影响

以聚合物驱油为背景,研究了部分水解聚丙烯酰胺(HPAM)和缔合型部分水解聚丙烯酰胺(AHPAM)水溶液的结构与流变性质的差别.通过粘度法和静态激光光散射法得到了所分析的聚丙烯酰胺的分子量,用动态激光光散射法和粘度法分析了特定AHPAM分子缔合形态,并用流变学法测定了AHPAM在地层温度与矿化度条件下的线性粘弹性与非线性流变特性.着重讨论了临界缔合浓度的概念,研究了结构和流变性质的关系,以及分析了缔合对聚合物驱油的可能影响.实验结果表明,AHPAM水溶液在宽浓度范围存在分子缔合;一般临界缔合浓度的概念实际反映在进入亚浓溶液范围分子间缔合的效应,剪切速率约为10 s-1时,剪切粘度突降数倍,反映缔合结构在剪切场中的变化,该现象在高缠结浓度下较不明显;拉伸粘度随拉伸速率变化与HPAM定性不同,该拉伸特性反映了疏水缔合近程作用的本质.     

电泳/质谱技术研究鲨鱼肝铁蛋白及亚基多聚体特性

改良鲨鱼肝铁蛋白(liver ferritin ofsphyrna zygaena,SZLF)分离技术,并结合非变性梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳(NGPAGE)制备质谱纯SZLF,以维系铁蛋白分子和它的亚基之间的作用类型,供研究铁蛋白结构与功能。实验结果表明,SZLF由分子量约为20kDa的单类型亚基组成。SZLF和它的亚基均组成不同的聚合体。聚合体类型和聚合数目与铁蛋白亚基和分离介质有关。MALDI-TO F质谱仪的激光和基质协同能有效解吸SZLF中的亚基成为准分子离子,并供质量分析,其亚基特征质谱峰m/z值分别为10889.35和22030.45,确定为带双电荷[M 2H]2 和单电荷[M H] 的SZLF亚基分子量。SDS-PAGE和变性IEF技术研究指出,形成不同聚合态的SZLF,其分子之间的相互作用强度高于SZLF亚基自身,难以通过MALDI-TOF质谱技术测定其亚基的结构信息。尽管SZLF由单类型亚基组成,但它能通过聚合体和自身亚基之间的相互作用差异性发挥极其重要的生理功能。     

芽孢杆菌L4所产角蛋白酶的纯化工艺、理化性质及其应用研究

根据芽孢杆菌L4菌株发酵产生的角蛋白酶的分子量和等电点等特征,分别采用硫酸铵盐析沉淀,Sephadex G-75凝胶过滤、DEAE-cellulose 52离子交换和Sepharose 4B凝胶过滤等色谱层析对其进行分离纯化,经SDS-PAGE检测呈现单一条带,分子量为149kD;变性电泳结果显示,该酶由4个分子量约为37.5kD的亚基组成;采用等电聚焦电泳测得其等电点为7.76,并通过纸层析法初步确认该酶为高甘露糖型糖蛋白;最后通过羊毛水解实验确认该酶具有水解羊毛角蛋白的能力,在羊毛仿羊绒等领域具有一定的应用价值.     

人红细胞20S蛋白酶体的蛋白质组学表征及不同来源20S蛋白酶体异质性的研究

通过整合差速离心和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)技术,建立了能有效分离20S蛋白酶体(20S core particle,CP)的方法.与传统纯化方法比较,此方法具有经济、快速的特点,并且能够对不同组织细胞来源的CP进行分离.利用本方法对人红细胞来源的CP亚基进行了2-DE分离和MALDI-TOF/TOF MS鉴定.结果显示,可鉴定出33个具有不同相对分子量和等电点的蛋白点,此数量远远多于CP亚基的14种.此外,利用非变性/变性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(native/SDS-PAGE)技术,比较了来源于酵母、小鼠肝脏、人红细胞、人胰腺癌细胞系SW1990和PANC-1的CP及其亚基在电泳行为方面的差异,进行了蛋白酶体异质性初探.     

人胎盘膜铁蛋白同类型双亚基功能、铁核结构和释放铁动力学研究

以人胎盘组织为实验材料,小批量制备电泳纯人胎盘膜铁蛋白(HPMF),对其结构与功能进行研究.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术揭示,HPMF蛋白壳由分子量分别为15 kDa(MF15)和20 kDa(MF20)的亚基组成,其中MF15蛋白含量约为MF20的3倍.经肽质量指纹图谱(PMF)技术鉴定...     

P(AMPS-co-BMA)水凝胶的电场敏感性及电刺激响应机理

以离子型单体2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸(AMPS)及非离子型单体甲基丙烯酸丁酯为原料, 偶氮二异丁腈为引发剂, N,N′-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂, N,N-二甲基甲酰胺为溶剂, 通过自由基聚合合成了一系列聚离子浓度不同的聚(2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸-co-甲基丙烯酸丁酯)电场敏感性水凝胶. 研究了其在去离子水及NaCl溶液中的溶胀行为. 结果表明, 该水凝胶在去离子水中的平衡溶胀度在236.4~298.5之间, 其溶胀速率随着AMPS用量的增加而增加; 并且随着凝胶内部聚离子浓度的增加, 凝胶在NaCl溶液中的消溶胀速率及消溶胀度逐渐减小. 凝胶的电刺激响应性能研究结果表明, 在电场存在下, 凝胶在NaCl溶液中的溶胀行为与凝胶内部聚离子浓度和溶液中NaCl浓度的相对大小有关, 当凝胶内部聚离子浓度大于溶液中NaCl浓度时, 凝胶溶胀, 反之则凝胶消溶胀; 而且, 凝胶在电场作用下的偏转行为同样与凝胶内部聚离子浓度和溶液中NaCl浓度的相对大小有关, 当凝胶内部聚离子浓度大于溶液中NaCl浓度时, 偏向阴极, 反之则凝胶偏向阳极. 另外, 在电场存在下, 凝胶在NaCl溶液中的电偏转速度与环境温度密切相关.     

牛心线粒体F_1-ATP酶亚基的相互作用和化学计量关系

本文证明牛心线粒体F_1与[~(14)C]-NBD-Cl在黑暗中保温,生成O-NBD-F_1,其NBD/F_1标记率为1;ATP酶活力抑制率为98％,但可被2mmol/L DTT恢复,提示F_1酪氨酸残基被标记。O-NBD-F_1经光照后NBD基团转移到氨基上,生成N-NBD-F_1;其NBD/F_1标记率为0.825,酶活力抑制率为83％。N-NRD-F_1脲聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明,63.4％放射活性标记在F_1的β亚基,但纯化的β基中放射活性为20％。结果证明F_1含3个β亚基,亚基之间和位点之间有相互调控作用,从而支持F_1酶催化反应中三位点模型(Boyer,1977年)。     

2-(N,N-二羧甲基)-氨甲基-4-氯酚铜(Ⅱ)的合成、结构与催化降解聚丙烯酰胺性能研究

合成了2-(N,N-二羧甲基)氨甲基4-氯酚,进而在水溶液中合成了其铜(Ⅱ)配合物,通过X-射线单晶衍射法测定了晶体结构.配合物中心Cu(Ⅱ)为五配位四方锥结构,在该配合物的晶体结构中存在两种构象异构体,相互问隔通过分子问氢键连接,延伸为一维链状结构.催化性能研究表明该配合物对H<,2>O<,2>的氧化降解聚丙烯酰胺有一定的催化作用,可以使分子量由6.1×10<'6>降低至1.66×10<'5>.     

可生物降解的聚磷酸异山梨醇酯的合成与表征

由异山梨醇和苯膦酰二氯经本体聚合法和溶液聚合法得到了不同分子量的新型聚磷酸酯(PPI),采用傅立叶变换红外(FTIR),核磁共振氢谱(~1H-NMR)和凝胶渗透色谱(GPC)对聚酯的组成和分子量进行表征,结果表明产物为聚磷酸酯结构.聚合物在水溶液和酶溶液中的降解和溶胀实验表明,当PPI的分子量(M_w)低于5×10~4时,聚合物具有很好的降解性能和溶胀性能,25天后其降解率达到80%,溶胀率达到150%.当M_w高于5×10~4时,其降解速率和吸水率明显下降,25天后降解率和溶胀率分别仅为25%和40%.研究了PPI的玻璃化转变温度(T_g)和分子量的关系,PPI具有较高的Tg,且随着分子量的增加,聚合物的T_g显著增加.当PPI的分子量为6×10~4时,其玻璃化转变温度达到176℃.同时研究了聚合物分子量对其热稳定性的影响,当重均分子量由2×10~4增加到6×10~4时,PPI的起始分解温度从260℃提高到315℃.结果表明提高分子量有助于提高PPI的热分解温度.     

疏水缔合聚合物重均分子量的测定

采用毛细管法和荧光探针法研究了疏水缔合聚合物在不同甲酰胺浓度和盐浓度的溶剂中的特性黏数和疏水缔合作用强度.找到可以消除缔合作用和聚电解质效应的溶剂条件,用静态光散射法测定疏水缔合聚合物的重均分子量.结果表明,NaCl能够有效的屏蔽聚电解质效应,但是不能消除缔合作用,而且由于NaCl增加了溶液的极性,会进一步促进疏水缔合作用,疏水缔合聚合物以聚集体形态存在溶液中,因此,在NaCl溶剂中测得的疏水缔合聚合物的重均分子量不是真实分子量;而甲酰胺可以完全破坏疏水缔合作用,使聚合物分子以单分子态分散在溶液中,进而测得疏水缔合聚合物的真实分子量.当溶剂中的NaCl浓度为0.2 mol/L、甲酰胺体积分数为50%时,可准确测定疏水缔合聚合物的重均分子量.当缔合作用消除后再改变甲酰胺浓度,测得的重均分子量不再变化;聚电解质效应消除后,盐离子浓度的变化不会再改变测得的重均分子量结果.     

驱油用聚丙烯酰胺分子量测试的光散射研究

利用旋转流变仪分析了超高分子量部分水解聚丙烯酰胺溶液的流变性质,并根据光散射动态模式分析了其在不同浓度和不同盐离子浓度下的尺寸分布.建立了利用多角度激光光散射准确测量驱油用超高分子量聚丙烯酰胺重均分子量(Mw)、均方根回转半径()和第二位力系数值(A2)的方法.准确测量了商品化驱油用超高分子量聚丙烯酰胺FP3630S的这3个参数,分别为Mw=(1.33±0.06)×107,     

高效液相色谱-荧光检测BMVC对核酸酶的抑制作用

本文利用荧光标记代替传统的同位素标记,用高效液相色谱法(HPLC)研究了端粒酶抑制剂BMVC浓度依赖的酶切抑制作用,得到了和聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳一致的结果.说明了该方法的可行性,也为高通量筛选提供了可能性.     

嗜热古细菌Sulfolobus tokodaii脱卤酶在D-乳酸生产中的应用

将来源于嗜热古菌Sulfolobus tokodaii的脱卤酶(L-HADST)基因克隆到载体p ET28b,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,在蛋白的N末端带有6个组氨酸融合标签,纯化后经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示融合蛋白的分子量约为25000.融合蛋白催化2-氯丙酸(2-CPA)的最适反应温度为70℃,最适p H值为9.5.以外消旋2-CPA为底物生产D-乳酸,利用HPLC检测反应液中2-CPA及乳酸的变化,发现L-HADST只催化L-2-CPA脱氯反应.对酶催化反应条件进行了优化,结果表明,在p H值为9.5,温度为60℃的条件下,当反应体系中缓冲液浓度为3 mol/L,底物浓度为0.5 mol/L,酶浓度为3×104U/L时有较高的底物转化率及乳酸生成量.依据条件优化结果可知,影响反应速度的因素有底物浓度、缓冲液浓度以及酶浓度,其中底物浓度变化对转换率的影响最明显.     

非还原脲变性蛋白溶菌酶稀释复性过程中集聚现象的研究

用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、阴极聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效凝胶排阻色谱法, 研究了非还原脲变性蛋白溶菌酶在稀释复性过程中的集聚现象. 实验发现, 在整个稀释复性过程中, 没有蛋白溶菌酶集聚体沉淀产生. 当最终复性液中蛋白溶菌酶浓度小于4.0 mg/mL时, 复性过程中不会形成蛋白溶菌酶分子集聚体; 当最终复性液中蛋白溶菌酶浓度介于4.0～8.0 mg/mL时, 复性过程中会形成由非共价相互作用所引起的蛋白溶菌酶二分子和三分子集聚体; 而当最终复性液中蛋白溶菌酶浓度大于8.0 mg/mL时, 复性过程中除了会形成二分子和三分子蛋白溶菌酶集聚体外, 还会形成四分子蛋白溶菌酶集聚体. 在此基础上, 结合文献, 对非还原脲变性蛋白溶菌酶的稀释复性过程进行了描述.