用聚乙烯醇固定化大肠杆菌AS1.881合成L—天门冬氨酸的研究

用含有一定量海藻酸钠的聚乙烯醇溶液为基质材料对具有高活力天门冬氨酸酶的大肠杆菌AS1.881进行了固定化,得到了高活力回收率和机械强度好的固定化细胞。对于不同的固定化方法和固定化条件对固定化细胞酶活力的影响进行了探讨,对于固定化细胞的一些酶学性质也进行了初步研究。     

ALG/SiO2杂化凝胶固定酪氨酸酶处理含酚废水

初步提纯的马铃薯酷氨酸酶(TYR)固定于海藻酸钠/二氧化硅(ALG/SiO2)凝胶复合物中,并用于含酚废水的处理。在pH=7.0时,固定化酪氨酸酶的比活力为1120 U/g。25℃,以邻苯二酚作底物时,其米氏常数为10.6 mmol/L。相对于游离酶和海藻酸钠固定化酶,本杂化凝胶固定酷氨酸酶具有良好的热稳定性、贮存稳定性及连续使用性。研究表明,本固定化酪氨酸酶有可能实际应用于含酚废水的处理。     

海藻酸钠固定化根霉脂肪酶的制备及其性质

 研究了以海藻酸钠为载体,用包埋法制备固定化德氏根霉(Rhizopus delemar)脂肪酶的条件. 将酶粉和海藻酸钠溶于pH 5.0的HAc-NaAc缓冲溶液,用注射器将此混合液滴入到0.05 mol/L无菌CaCl2溶液中,静置固化45 min, 经过滤、洗涤和干燥后得到球状固定化酶. 固定化酶的活力回收约为34.1%. 酶学性质研究表明,此固定化酶的热稳定性较好. 游离酶在 60 ℃下保温1 h已完全丧失活力,而固定化酶在100 ℃下保温1 h仅损失36.2%的活力,在100 ℃下保温6 h仍可保持46.8%的酶活力. 酶经固定化后,其橄榄油水解反应的最适温度由40 ℃上升至90 ℃, Km值由13.8 mg/ml下降为8.1 mg/ml. 常见有机溶剂对固定化酶的活力影响较小. 将该固定化脂肪酶用于非水溶剂中正戊酸异戊酯的合成,重复使用6次后,固定化酶仍保持95%的酶活力.     

固定化酶树脂进行酶固定化反应条件的研究

本文通过研究固定化青霉素酰化酶的酶活力,考察了固定化酶反应条件即缓冲溶液浓度、pH值、酶浓度以及反应时间等对固定化酶活力的影响。研究了反应条件与固定化酶活性之间的影响规律,从而为进一步优化固定化酶条件、提高固定化酶活性提供了实验依据与参考。     

氨基酰化酶的固定化及其对D,L—蛋氨酸的光学拆分

本文用大孔网高分子载体对氨基酰化酶进行固定化,并系统地研究了温度、pH值、离子浓度、底物浓度、激活离子及蛋白质变性剂对固定化酶活力的影响。由于载体的物理性质和功能基较适宜,因而吸附蛋白质的容量大,使固定化酶的活力和活力回收率都高。用固定化酶柱对D,L—蛋氨酸进行连续拆分,酶柱使用周期长,稳定性高。拆分的产物用离子交换法进行分离与精制后,可制得纯度高,产率理想的L—蛋氨酸盐酸盐。     

海藻酸钙凝胶包埋乳酸氧化酶催化DL-乳酸生产丙酮酸

研究了用海藻酸钠包埋、戊二醛交联法固定耻垢分枝杆菌(Mycobacterium Srnegmatis)生成乳酸氧化酶的最佳条件,比较了原酶与固定化酶的酶学性质.将1mL酶液和1 mL质量分数为3%的海藻酸钠溶液的混合液,用注射器滴加到20 mL0.2 mol/L.的CaCl2溶液中,25℃静置固化2 h后,过滤洗涤,将同体转移至20 mL质量分数为0.2%戊二醛溶液中37℃交联2 h后,过滤、洗涤和干燥得到球状同定化酶.固定化酶的活力回收率为39.8%.酶学性质研究表明,此固定化酶的热稳定性较好,游离酶在65 ℃保温l h酶蛋白完全变性失活,而固定化酶在65℃保温1 h仍可保持86%的酶活力;其最适酶促反应温度可由37℃升至55℃,最适反应pH=7.4保持不变;在不加保护剂的条件下,4℃放置50 d后游离酶仅保持40%以上的酶活力,而固定化酶能保持80%以上的酶活力.该固定化乳酸氧化酶用于催化氧化DL-乳酸生产丙酮酸,3 h后丙酮酸产率可达75%,连续循环使用5次固定化酶活力仍保持85%.     

壳聚糖固定L-天门冬酰胺酶的研究

研究了以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，固定化Ｌ－天门冬酰胺酶的最适条件，并对固定化天门冬酰胺酶的理化性质进行了初步探讨。分别从不同固定化程序、缓冲液及保护剂等方面进行了固定化天门冬酰胺酶的条件优化；固定化酶的活力回收可达２０％左右。固定化酶的最适范围变宽，由游离酶的最适ｐＨ＝４～６变为ｐＨ＝６～１０。连续使用６次后仍可基本维持固定化酶的活力。固定化酶对胃蛋白酶的水解性也较游离酶大大提高。     

固定化木瓜蛋白酶的制备和性质研究

多孔硅球固定化木瓜蛋白酶具有热增活性 .本文在前文研究的基础上 ,用载体交联法制备了甲壳胺固定化木瓜蛋白酶和纤维素固定化木瓜蛋白酶 .考察了固定化pH值、戊二醛浓度和给酶量对固定化木瓜蛋白酶活力的影响 .研究了固定化木瓜蛋白酶的性质 ,特别是热稳定性和耐热性 ,并与溶液酶和多孔硅球固定化木瓜蛋白酶进行了比较 .所制得的甲壳胺固定化木瓜蛋白酶和纤维素固定化木瓜蛋白酶的最适反应温度均达到了 80℃ ;90℃温育 1h后固定化酶的活力保持在 95 %以上 ;70℃温育处理 5h和 6h后固定化酶的活力也仍能保持在 90 %以上 .固定化木瓜蛋白酶的热稳定性和耐热性得到了显著提高     

磁性CS-M固定HRP的条件研究

用磁性壳聚糖微球(磁性CS-M)作载体,用吸附法对辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,简称HRP)进行固定化研究。实验结果表明,磁性固定化酶的活力受壳聚糖浓度、交联剂的用量、乳化剂、载体与酶的比例、pH及固定化时间等因素的影响。     

多孔硅球固定化木瓜蛋白酶的制备和性质

用载体交联法制备了多孔硅球固定化木瓜蛋白酶。考察了固定化时间、温度、pH值、给酶量和成二醛浓度对固定化木瓜蛋白酶活力的影响。研究了固定化木瓜蛋白酶的性质，并同溶液酶进行了比较。着重考察了固定化木瓜蛋白酶的热稳定性。所制得的固定化木瓜蛋白酶最适温育温度达到80℃，对底物酪蛋白的水解活力随温度的升高而增加，在90℃达到最高值；在70℃温育12小时后酶活力仍能保持高水平。     

胶囊固定化辣根过氧化物酶酶促体系引发丙烯酰胺聚合研究

研究了以海藻酸钠／壳聚糖／海藻酸钠为囊壁材料的胶囊固定化辣根过氧化物酶的制备及其影响因素,并将肢囊固定化辣根过氧化物酶／乙酰丙酮／H2O2酶促体系用于引发丙稀酰胺的聚合。结果表明,作为囊壁材料之一的壳聚糖的平均分子量以1万左右为宜,以柠檬三酸钠溶液为溶芯荆的溶芯时间控制在2～4min时,固定化率可达60％,相对于游离酶,其相对活力约为60％。胶囊固定化辣根过氧化物酶／乙酰丙酮／H2O2酶促体系可引发丙稀酰胺的聚合。     

以HPD-750大孔树脂为载体材料固定化果胶酶

HPD-750树脂是中极性大孔吸附树脂,生物相容性好,机械性能稳定,具有较大的比表面积,可用于固定化酶载体材料。本文以HPD-750大孔树脂为载体固定化果胶酶,研究各因素对固定化酶的影响,并采用正交试验对固定化条件进行优化。结果表明,当pH为4.0、固定化温度为45℃、固定化时间为4h、加酶量为0.16g/mL时,固定化酶活力可达5146U/mg。以HPD-750大孔树脂为载体材料制备的固定化酶相较于游离酶具有更好的酸碱稳定性和热稳定性。在循环使用10次后,酶活力依然保留80%以上;4℃储藏25d之后,其酶活力仍保留60%以上。与D311大孔树脂、聚丙烯酰胺和海藻酸钠微球制备的固定化酶相比,HPD-750大孔树脂固定化酶的活性、操作稳定性、机械稳定性和储存稳定性都较好。该结果说明,HPD-750大孔树脂可作为固定化酶较好的载体材料。     

α,ω—二羧基聚乙二醇磁性毫微粒固定化碱性蛋白酶的研究

本文用共沉淀法制备了平均直径为３８４纳米的α，ω－二羧基聚乙二醇磁性毫微粒，碱性蛋白酶通过吸附交联法被固定于磁性毫微粒，研究了制备研究中的吸附时间，给酶量，戊二醛浓度，ｐＨ和离子强度对磁性固定化酶活力及酶固定化率的影响。比较了碱性蛋白酶磁性固定化酶与自由酶的酶学性质，磁性固定化酶的最适温度没有改变，但热稳定性显著使高；磁性固定化酶的最适ｐＨ向酸性方向移动了１．０个ｐＨ单位。     

环糊精葡萄糖基转移酶的固定化及其应用：Ⅲ.固定化环糊精葡萄糖基转…

用固定化环糊精葡萄糖基转移酶催化淀粉环化反应，考察了反应时间，乙醇浓度和淀粉液化程度对环糊精产率的影响。环糊精产率最高达５４％，固定化酶经多次重复使用或长时间连连续操作，酶活力降低较少。     

巨大芽胞杆菌环氧水解酶的固定化及其催化性能

考察了多种载体对巨大芽孢杆菌ECU1001环氧水解酶的固定化.以大孔DEAE-纤维素离子交换树脂为载体时,固定化酶的活力回收达70%.进一步考察了温度和pH对固定化酶活力的影响,并使用该固定化酶进行了缩水甘油苯基醚对映选择性水解批次反应.结果表明,在较低的底物浓度下该固定化酶的稳定性较好,10批反应后仍然剩余72.4%的活力.     

α，ω─二羧基聚乙二醇磁性毫微粒固定化碱性蛋白酶的研究

本文用共沉淀法制备了平均直径为３８４纳米的α，ω─二羧基聚乙二醇磁性毫微粒．碱性蛋白酶通过吸附交联法被固定于磁性毫微粒．研究了制备过程中的吸附时间、给酶量、戊二醛浓度、ｐＨ和离子强度对磁性固定化酶活力及酶固定化率的影响．比较了磁性蛋白酶磁性固定化酶与自由酶的酶学性质，磁性固定化酶的最适温度有改变，但热稳定性显著提高；磁性固定化酶的最适ｐＨ向酸性方向移动了１．０个ＰＨ单位。     

固定化L-天门冬酰胺酶活性的X射线微区分析

1　引　　言固定化L 天门冬酰胺酶的研究长期以来倍受人们的关注。共价法是一种常用的方法 ,该方法通过载体与酶之间形成共价键而将酶固定于载体上 ,这样可防止酶的脱落 ,故而起到了催化作用。对固定化L 天门冬酰胺酶进行活性定位的研究 ,将有助于L 天门冬酰胺酶的固定化 ,其活性定位的基本原理如下 :底物 酶 产物 +捕捉剂 (金属离子 )活性部位沉淀利用聚焦电子束对固定化酶表面进行激发 ,有活性的部位发射出沉淀金属的特征X 射线 ,利用X 射线能谱分析即可定位酶的活性部位。本文利用MgCl2 作为捕捉剂 ,以L 天门冬酰胺为底物 ,经固定化L…     

氨化大孔球状聚氯乙烯固定化木瓜蛋白酶的研究

以氨化大孔球状聚氯乙烯为载体,采用戊二醛载体交联的方法,将木瓜蛋白酶进行了固定化。以酪蛋白为底物,测定了固定化酶的活力回收。研究了固定化条件对固定化酶活力回收的影响。同时,对所得固定化酶的性质,如温度-活力关系、pH-活力关系、热稳定性以及重复使用性进行了考察。结果表明,所得固定化木瓜蛋白酶具有较好的稳定性和重复使用性。     

环糊精葡萄糖基转移酶的固定化及其应用──Ⅲ．固定化环糊精葡萄糖基转移酶制备环糊精的研究

用固定化环糊精葡萄糖基转移酶催化淀粉环化反应,考察了反应时间、乙醇浓度和淀粉液化程度对环糊精产率的影响。环糊精产率最高达54%,固定化酶经多次重复使用或长时间连续操作,酶活力降低较少,产品经纸色谱分离后用碘显色,发现产品主要为β-环糊精。     

磁性固定化酶处理含酚废水的研究

研究了磁性壳聚糖微球(磁性CS-M)及壳聚糖微球(CS-M)固定化辣根过氧化物酶(HRP)对模拟含酚废水的催化效果,探讨了反应时间、酶活力、H2O2浓度及酚浓度对反应的影响。对均相与非均相酶处理酚效果进行比较,显示固定化酶处理含酚废水具有很大的优越性,且磁性酶的效果最佳。