肝素亲和层析介质制备方法及应用研究进展

肝素亲和层析是利用生物大分子与层析介质表面的肝素特异性结合而进行选择性分离的一种技术,使用条件温和,纯化过程中能较好保持目标蛋白的生物活性。本文在阐述肝素与层析介质化学反应机理的基础上,系统论述了溴化氰活化及偶联法、环氧活化及偶联法、席夫碱法和碳二亚胺缩合法四种肝素亲和层析介质制备方法,深入分析了各制备方法的优缺点,总结了肝素亲和层析在血液制品、病毒纯化方面的应用。最后,进一步分析了肝素亲和层析在蛋白分离纯化领域应用存在的问题,并展望了其未来发展趋势,以期为肝素亲和层析介质的制备方法提供新思路。     

甲基化聚胺型硅基强阴离子交换剂用于生物大分子的分离

用聚胺键合法合成了聚胺型碱性硅胶基质，进一步甲基化后制得了强阴离子交换剂，该强阴离子交换剂将硅工礅子交换剂和树脂型离子交换剂的优点有机地结合起来，具有稳定性好，使用ＰＨ值范围宽（ＰＨ１－１２），柱渗透性好和优点，可理想地用于生物大分子和蛋白南，多肽和酸等的分离。型碱性硅胶     

应用卵黄免疫球蛋白作为亲和配基分离目的蛋白的研究

实验通过给母鸡注射抗原BSA－V，从鸡蛋中分离获得抗体IgY。以BSA－V作介质分离纯化IgY后，IgY纯度可达电泳纯，且抗体活性提高了35倍以上。反之，将纯化后的特异性IgY为介质亲和分离胎牛血清中的BSA，分离后的BSA纯度可达电泳一条带，明显高于市售产品。以卵黄免疫球蛋白为配基的亲和介质在4℃条件下可保存半年以上，且柱的最大载量基本保持恒定。同时测定出卵黄中特异性IgY可占到总IgY的5％左右。     

以硅胶为载体的交联壳聚糖作为亲和层析填料基质的研究

采用硅胶为载体的交联壳聚糖（CTS－SiO2）作为亲和层析填料基质，对其卵清蛋白的偶联能力，以及亲和纯化小鼠抗卵清蛋白抗体效果等进行了研究。结果显示卵清蛋白能方便地用二醛偶联于CTS－SiO2基质，该新型亲和层析填料稳定性高，选择性好，非特异性吸附小，每克交联壳聚糖上可偶联卵清蛋白54.25mg，用该填料可有效地亲和吸附小鼠抗卵清蛋白抗体，并可用碱性缓冲液将该抗体洗脱，初步显示出较好的分离纯化效果。     

亲和膜色谱技术研究进展

对一种崭新的生物大分子分离技术－－亲和膜色谱技术做了全面的评述,介绍了亲和膜色谱分离的过程,评价了亲和膜基质材料活化、改性方法、给出了配基间隔臂的选择原则,概括了亲和膜色谱理论研究的进展,并对亲和膜色谱技术进行了展望。     

疏水膜色谱法对生物大分子的快速纯化

首次采用自制的分别级合了辛基、丁基、苯基及聚乙二醇-4000的4种常用疏水基团的纤维素疏水膜色谱柱,以键合了辛基、苯基的SepharoseCL－4B凝胶柱为对照,考察了疏水膜色谱柱对牛血清白蛋白（BSA）的动态吸附容量及流速对吸附容量的影响。疏水膜色谱柱对蛋白及酶具有较好的疏水吸附及纯化作用,但吸附容量比相应的琼脂糖凝胶柱低得多。增大流速及降低蛋白溶液质量浓度对疏水膜色谱柱的吸附容量影响较小,这些性能使膜色谱柱非常适合于大体积低质量浓度蛋白溶液（如基团工程培养液）的分离纯化。     

亲和色谱法的进展

概述了亲和色谱法分离机理、色谱填料及其应用的新进展,着重介绍了亲和固定相中配基发掘的新途径。全文包括66篇文献。     

浊点萃取在生物大分子分离及分析中的应用

浊点萃取是一种新兴的环保型液2液萃取方法。本文介绍了表面活性剂胶束溶液的形成过程和浊点现象, 总结了浊点萃取法的操作方法, 并且详细讨论了它在生物大分子分离纯化及生物分析中的应用。最后探讨了该技术的发展前景。     

亲和层析分离纯化乳酸脱氢酶

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,氨基三乙酸为配基,制备固载铜离子的金属螯合亲和吸附剂,层析分离纯化乳酸脱氢酶(LDH),收得率为23.3％,纯化倍数达3.1.实验结果表明该亲和层析固定相对LDH有较高的分离纯化选择性.     

亲和膜色谱

亲和膜色谱又称亲和膜分离，其在蛋白质的分离纯化中作为一种综合性的技术出现在80年代末。亲和膜色谱主要优点是克服了颗粒状多孔载体扩散传质阻力大的缺点，代之以对流传质，这样就可以在较低的操作压和较高的流速下对目标蛋白进行快速的分离和纯化，从而缩短操作时间、提高纯化效率。本文将就近年来亲和膜色谱及其在蛋白质分离和纯化中的应用作一综述性介绍。     

抗体纯化中亲和色谱配体的研究进展

亲和色谱是用于抗体纯化的有效方法,本文对亲和色谱配体的研究进展进行了综述.     

壳聚糖涂层亲和层析介质合成的研究

研究了壳聚糖涂层亲和层析介质的制备工艺。采用合适的涂层条件，壳聚糖在玻璃珠上一次涂层量可达34mg／g介质。采用二氯化物交联剂可提高壳聚糖涂层介质的稳定性。当pH＞4．3时，交联壳聚糖涂层介质对Cu2＋的吸附容量达13．6mgCu2＋／g壳聚糖。在本介质的膨胀床中，最大液体流速可达1m／h。     

PREPARATION OF CHITOSAN COATED METAL AFFINITY CHROMATOGRAPHY ADSORBENT

1NTRODUCTIONImmobilizedmetalionaffinitychromatography(IMAC)hasattractedconsiderableattentioninthepurificationofproteinssincePorathfirstlyuseditin1975Llj.IMAChassomeadvantagescomparingtootheraffinitychromatography.Forexample,IMACcanbeoperatedatanhighionstrengthandtheligandsuchasC.2 ischeapandstable.TheconventionalIMACadsorbentswereproducedbyreactingiminodiaceticacid(IDA)withpolysaccharidesuchasagaroseandthentheaffinityligandC.2 waschelatedtothe.d...b..t[2].Thepreparationwasexpensi…     

IMMOBILIZED CIBACRON BLUE F3G-A ON CROSSLINKED POLY (VINYL ALCOHOL) FOR AFFINITY CHROMATOGRAPHY

Immobilized triazine dye affinity chromatography has been widely used for protein purification. In this paper, cibacron Blue F3G-A was immobilized,through a spacer arm, onto a rigid hydrophilic porous polymer by reacting an epoxy-group-containing poly(vinyl alcohol) with 6-aminohexyl-N'-Cibacron Blue F3G-A,which was obtained by reacting Cibacron Blue F3G-A with excess of 1,6-diaminohexane, in a pH 8.6 buffer. The epoxy-group-containing poly(vinyl alcohol) was prepared by hydrolysis of macroporous crosslinded poly(vinyl acetate),which was synthesized by suspension copolymerization of vinyl acetate and triallyl isocyanurate in the presence of butyl acetate and n-heptane as diluents. The cibacron Blue F3G-A-immobilized poly(vinyl alcohol)was packed in a stainless steel column (250×5 mm I. D.) and the chromatographic behaviors of several proteins (cytochrome c, lysozyme, bovine serum albumin, insulin, and lactate dehydrogenase) were determined.     

BORONIC ACIDS AS LIGANDS FOR AFFINITY CHROMATOGRAPHY

 A review on the principles and applications of boronic acids as affinity ligands for the chromatographic separation of carbohydrates, nucleic acid components, glycoproteins, and other small biomolecules. The mechanisms of interactions between boronate ligands and analytes are described. Various boronate ligands and supports are discussed. Examples of the use of boronate affinity chromatography for separation of each class of analytes are presented.     

核苷和核苷酸混合物的层析

本文介绍五个核苷和六个核苷酸混合物的反相柱层析。柱上用涂有N263固定相(它与聚三氟氯乙烯担体的重量比为1:1)的交换剂装填。以含有KCl的咪唑·盐酸缓冲液(pH7.0)分三级洗脱,除了3＇-T_p和3＇-A_p外,每一对洗脱成份的分离度都大于1。     

离子交换色谱法研究蛋白质与RNA的结合特异性

RNA是以磷酸二酯键相连的核苷酸组成的聚阴离子,而蛋白质在PH小于它的等电点的缓冲溶液中带有正电性.因此,它们在离子交换色谱分子时能出现在差异很大的洗脱组分中.据此.我们设计了用离子交换色谱法研究蛋白质与RNA的结合特异性方法,用以研究位于T细胞核内的具有RNA结合活性的蛋白质人环素33(hCyP33)与不同RNA的结合特性.结果表明,人亲环素33只有ply(A)尾序列结构的mRNA,即poly(A)^ RNA发生特异性结合.     

新型聚乙烯醇系亲和吸附剂的制备及其在糖蛋白纯化中的应用 (I)基质合成

以醋酸乙烯酯（ＶＡＣ）和甲基丙烯酸缩水甘油酯（ＧＭＡ）为单体,甲基丙烯酸烯丙酯（ＡＭＡ）为交联剂,在致孔剂正庚烷／乙酸丁酯的存在下,悬浮聚合,制得了一系列大孔共聚物;醇解后得到一种新型聚乙烯醇系亲和层析基质。依据单体的Ｑ、ｅ值,计算了体系的竞聚率,讨论了不同交联度、ＧＭＡ含量、致孔剂用量及配比对基质孔结构和性能的影响。