绵羊和青贮料中单核细胞增多性李氏杆菌的分离鉴定

本文结合国标方法(GB4789.30-94)对健康绵羊和青贮料进行LM的分离，用常规生化试验和分子生物学方法对分离菌进行互映鉴定。从155只绵羊的鼻腔中分离到7株LM，阳性率为4.5％；从47份青贮料中共分离到5株LM，阳性率为10.64％，且从2份霉变青贮料中检出1株LM，霉变青贮料中LM阳性率高达50％。     

新疆部分地区绵羊及其环境中单核细胞增多性李氏杆菌的分离与鉴定

本研究通过对新疆部分地区羊场健康绵羊的鼻拭、肛拭、粪便、青贮、以及圈舍周围环境中的土壤、水源进行检测,初步掌握此菌在这些地区的分布及污染情况。经镜检、生化鉴定和PCR方法鉴定,结果从220个样本中分离到9株单核细胞增多性李氏杆菌,分布率达4.1%。     

从海狸鼠中分离出李氏杆菌的报道

某养殖场新近从国外引进的500只海狸鼠,因长途运输、气候炎热等原因,运回国内后就开始陆续死亡,先后损失近30只。这些死鼠的发病特点是:多于夜间突然死亡,死前无明显的临床症状,有的病鼠表现出后肢衰弱、麻痹等症状。我们从一只病死的母海狸鼠中分离出李氏杆菌,现报道如下:     

单核增多性李氏杆菌多克隆抗体的制备及纯化

采用家兔背部两侧多点皮内基础注射,静脉加强注射,利用饱和硫酸铵(SAS)盐析和G25分析法制备与纯化抗体,制得高纯度、高滴度(1：2560)的多抗,以此作为检测李氏杆菌的诊断试剂。     

河北省规模化猪场猪李氏杆菌的分离与鉴定

河北省某规模化猪场猪群发生李氏杆菌病,在试验过程中,采集病死猪的肝、脾等病理变化比较典型的病料,进行病原菌的分离培养与纯化,并对其进行鉴定。分离出了1株产单核细胞李氏杆菌。药敏试验表明,病原菌对庆大霉素和恩诺沙星极为敏感;动物接种试验表明,分离株具有较强的致病性,对雏鸡皮下接种、口腔接种和腹腔接种,小白鼠腹腔接种可引起发病,导致死亡。     

海鱼中李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌的检测

检测了来自4个商场的20种海鱼,共120个样品,按3管MPN计数法每100 g鱼肉中李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌的平均值分别为396.72和214.78,平均出现率各为80.8%和43.3%,其中4月份的李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌数量远高于其它月份;按季节分,则各数值从大到小依次是春季、秋季、夏季和冬季;检测次数在3次以上的不同种类海鱼中都有李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌的检出,其数量和出现率与海鱼的种类密切相关,其中海鲶中的感染最严重;各个商场的海鱼都有李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌的检出;所分离的单核细胞增生李氏菌的血清型以1型和4型为主。     

小鼠体内单核细胞增多性李氏杆菌的动态分布及病理变化

为进一步研究单核细胞增多性李氏杆菌的致病机制,培养浓度为9×109 cfu/mL单核细胞增多性李氏杆菌,采用Karber法测得该菌对小鼠的LD50为2.85×108 cfu/mL。由此建立小鼠模型,然后人工腹腔感染小鼠30只,分别在感染后2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h、48h和72h定期剖杀感染小鼠,取其脏器,采用PCR方法、分离培养及病理组织学方法,对感染模型小鼠体内的单核细胞增多性李氏杆菌动态分布及各器官的病理组织学变化进行初步研究。结果显示:感染2h,脾、肝、心血组织中均可检测到单核增多性李氏杆菌DNA,同时从上述脏器也可分离到单核增多性李氏杆菌;感染6h,大脑中可检测到单核增多性李氏杆菌DNA,并在感染后72h可分离到该细菌;感染4～6h,脾、心血、肝脑即开始出现病理变化和组织学变化。     

单核细胞增多性李斯特菌的脉冲场凝胶电泳分型研究

用限制性内切酶Sma Ⅰ和Apa Ⅰ分别对21株单核细胞增多性李斯特菌菌株基因组DNA进行酶切,用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法进行遗传多样性分析。结果表明：3株临床分离株（00181、00174和0194）分别存在于亚型A、B、D中;16个单核细胞增多性李斯特菌奶相关和环境分离株主要存在于4个亚型中,其中2个亚型（C、D）均为奶相关分离株（包括原料奶、均质奶（储奶罐）和成品奶分离株）,而加工厂地面污水分离株为独立的一个亚型（A）。     

基于ActA基因的单核细胞增多性李斯特菌的序列分型研究

根据单核细胞增多性李斯特菌ActA基因序列保守区设计一对引物,对21个菌株进行PCR扩增,得到长度为820bp的片段。PCR产物经过纯化后直接测序,并对其中的506bp进行同源性分析。结果表明单核细胞增多性李斯特菌分离株具有5个明显不同的克隆谱系,每个谱系的同源性均在95％～100％。16个单核细胞增多性李斯特菌奶相关和环境分离株可被分成4个谱系,其中2个谱系（C、D）均为奶相关分离株和成品奶分离株;加工厂地面污水分离株为独立的一个谱系。初步表明,成品奶中污染的单核细胞增多性李斯特菌来自于奶牛场,而非加工环境。     

野燕麦3号致病菌株的生物学特性初步研究

筛选野燕麦致病菌株,研究其致病性及生物学特性,为野燕麦的生物防治提供理论依据。利用离体叶片接种测定,筛选对野燕麦有良好抑制作用的致病菌,并通过对致病菌的培养特征和形态特征分析鉴定其分类地位;以单因素试验法对影响该菌菌丝生长和孢子萌发的各种培养条件进行优化。经初步鉴定3号菌株属于镰孢菌属(FusariumLink ex Fr.),对野燕麦有致病性,发病率在80%以上,在SCS培养基生长最好,生长适宜温度范围为25~32℃,最适为28℃,pH范围2~11,最适6.0,在以葡萄糖为碳源、以磷酸氢二铵为氮源的Czapek培养基上生长良好。分生孢子萌发的适宜温度范围20~35℃,最适28~30℃,pH2~11,最适6.0,以自由水或饱和湿度条件下萌发最高;蛋白胨、牛肉浸膏、吐温-80明显提高孢子萌发速度。结果提示3号致病菌株对野燕麦有较好的致病作用,具有进行野燕麦杂草生物防治的应用潜力。     

ERIC-PCR方法鉴定单核细胞增生性李斯特氏菌研究

本研究工作共收集食物样品6种62份，从中分离单核细胞增生性李斯特氏菌可疑菌落，用ERIC PCR方法进行鉴定。并用国际生化方法验证，结果表明，两种鉴定方法结论完全一致，证明使用ERIC－PCR技术鉴定单核细胞增生性李斯特氏菌是可行的，并且耗时短，操作简单。     

Studies on biological characteristics of ginkgo hairy root culture

The comparative studies on properties of growth and cultivated conditions of seven transformed ginkgo hairy root clones were reported. Different clones display various phenotypes characterized by growth rate. The results show that the suitable inoculum is benefical to the growth of ginkgo hairy root. NH₄ ⁺/NO₃ ⁻, pH, sucrose, and inositol have important effects on the growth of ginkgo hairy root. Foundation item: Supported by China National Center for Biotechnology Development Ministry of Science and Technology Biography: Li Gen-bao(1970-), male, Postgraduate.     

植物乳杆菌Y42无细胞培养上清抑制单增李斯特菌生物膜形成研究

为研究植物乳杆菌Y42无细胞培养上清对单核细胞增生李斯特菌(LM)生物膜形成的抑制作用,采用微孔酶标板刃天青显色法确定Y42上清的最小抑菌质量浓度(MIC),微孔酶标板结晶紫染色法检测Y42上清对LM生物膜形成的影响,软琼脂法测定Y42上清对LM爬行运动性的影响。结果显示Y42上清最小抑菌质量浓度为60mg/mL;当Y42上清作用质量浓度为MIC的1/32、1/16、 1/8、 1/4、 1/2时,LM的运动圈直径由81.15mm减小为78.31、 75.35、 69.51、 54.91、33.09mm,对LM生物膜形成的抑制率达到32.90%、 30.81%、 40.75%、 39.93% 、12.15%;普通光学显微镜在10×40倍放大倍数下,观察到Y42上清可显著减少LM在盖玻片上形成生物膜的量。Y42无细胞培养上清可通过抑制LM的运行性来抑制其生物膜的形成。     

食品中单增李氏菌实时荧光PCR检测鉴定方法的建立

运用实时荧光PCR(Real-time PCR)技术建立了对食品中单增李氏菌进行检测的快速方法，设计的引物和探针的序列特异性强，省去凝胶电泳的繁琐，降低了污染的可能性，在对26种病原菌进行检测过程中，运用实时荧光PCR法和经典培养法进行比较，结果表明用实时荧光PCR法检测单核细胞增多李斯特氏菌，更快速、敏感、特异性更高。