蛋白蛋分离与纯化过程中高效离子交换色谱柱的再生

高效离子交换色谱法分离和纯化蛋白质时,蛋白质在色谱柱上的不可逆吸附使柱效降低,柱压升高。本文使用2％的胰蛋白酶溶液在37℃下处理TSKgelCM-5PW和TSKgelDEAE-5PW（7×7．5mmI.D.）离子交换色谱柱24h后,柱压显著降低,柱效提高4~13倍,交换容量也得到恢复。离子交换色谱柱的恢复程度和交换容量与处理液的用量有关。     

利用离子交换色谱快速纯化α－淀粉酶

本文开发了一个用强阴离子高效液相色谱分离纯化α－淀粉酶的的新方法。详细讨论了纯比的最佳条件＊在给定的条件下纯化工业α－淀粉酶，其活性回收率达９６％，比活性为３８８ｕ／ｍｇ蛋白，纯化倍数提高３０倍，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，得到分子量分别为５８Ｋ和３３Ｋ两条α－淀粉酶谱带。此法纯化α－淀粉酶简单，快速，效率高。不仅能纯化工业粗酶，也可纯化其它来源的α－淀粉酶。     

应用卵黄免疫球蛋白作为亲和配基分离目的蛋白的研究

实验通过给母鸡注射抗原BSA－V，从鸡蛋中分离获得抗体IgY。以BSA－V作介质分离纯化IgY后，IgY纯度可达电泳纯，且抗体活性提高了35倍以上。反之，将纯化后的特异性IgY为介质亲和分离胎牛血清中的BSA，分离后的BSA纯度可达电泳一条带，明显高于市售产品。以卵黄免疫球蛋白为配基的亲和介质在4℃条件下可保存半年以上，且柱的最大载量基本保持恒定。同时测定出卵黄中特异性IgY可占到总IgY的5％左右。     

利用离子交换色谱快速纯化α－淀粉酶

 本文开发了一个用强阴离子高效液相色谱分离纯化α－淀粉酶的的新方法。详细讨论了纯比的最佳条件＊在给定的条件下纯化工业α－淀粉酶，其活性回收率达９６％，比活性为３８８ｕ／ｍｇ蛋白，纯化倍数提高３０倍，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，得到分子量分别为５８Ｋ和３３Ｋ两条α－淀粉酶谱带。此法纯化α－淀粉酶简单，快速，效率高。不仅能纯化工业粗酶，也可纯化其它来源的α－淀粉酶。     

超大孔离子交换制备色谱分离纯化高活性凝血因子VIII

建立了一条从人血浆中分离高活性凝血因子VIII(FVIII)的纯化工艺。基于FVIII和介质孔径的尺度比及其对蛋白质活性影响的分析,设计了以超大孔离子交换制备色谱为核心步骤的新型分离纯化工艺。分别进行超大孔离子交换色谱与传统离子交换色谱的条件优化,并对优化工艺所得产品进行了活性检测(底物显色法)和纯度检测(高效凝胶过滤和凝胶电泳)。结果表明,超大孔介质结构不但可以有效地保护蛋白质大分子结构,而且能够大幅度地提高制备色谱的传质速率,从而得到具有高凝血活性的FVIII产品。FVIII在超大孔制备色谱过程中的回收率(85%)比传统离子交换制备色谱高4～5倍,产品比活高达154 IU/mg。此外,还研究了超大孔介质的再生程序,采用5个柱体积的1 mol/L NaOH低流速清洗色谱柱,保证了色谱工艺的稳定性。本纯化工艺步骤简单,重现性好,易于放大生产。     

大孔离子交换树脂分离纯化玻璃酸的研究

本文选用了四种离子交换树脂进行分离纯化玻璃酸的研究。结果采用Ｄ３１５大孔离子交换树脂,以去离子水为淋洗液,０．６ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ溶液为洗脱液,纯化效果较佳,纯化产品杂蛋白含量≤０．３％,回收率达７１．１％,粘均分子量大于９６万。     

用离子交换法从植物水提液中纯化分离左旋多巴的研究

本文比较了D290、D296、D370、D301、201×4、201×7等6种树脂对植物水提液中左旋多巴的静态交换和动态交换性能。筛选出D296用以研究不同pH、不同流速、不同解吸剂对吸附交换或解吸交换的影响。实验结果表明：用此工艺得到的产品，有关质量符合药典要求，收率可达4．0％以上。     

高效离子交换液相色谱法分离绿脓杆菌外膜蛋白

 利用高效ＤＥＡＥ离子交换液相色谱法分离纯化了绿脓杆菌标准菌株ＰＡＯ１外膜蛋白。流动相为ｐＨ８．０Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液,色谱柱为ＴＳＫｇｅｌ－ＤＥＡＥ－５ＰＷ（０．７５ｃｍ×７．５ｃｍｉ．ｄ．）。通过纯化外膜蛋白,可以为研究绿脓杆菌外膜通透性与抗生素耐药性之间的关系及缩短研究周期提供有效的方法。     

高效离子交换液相色谱法分离绿脓杆菌外膜蛋白

利用高效ＤＥＡＥ离子交换液相色谱法分离纯化了绿脓杆菌标准菌株ＰＡＯ１外膜蛋白。流动相为ｐＨ８．０Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液,色谱柱为ＴＳＫｇｅｌ－ＤＥＡＥ－５ＰＷ（０．７５ｃｍ×７．５ｃｍｉ．ｄ．）。通过纯化外膜蛋白,可以为研究绿脓杆菌外膜通透性与抗生素耐药性之间的关系及缩短研究周期提供有效的方法。     

大孔离子交换树脂分离纯化玻璃酸的研究

本文选用了四种离子交换树脂进行分离纯化玻璃酸的研究，结果表明，采用 Ｄ３１５大孔离子交换树脂，以去离子水为淋洗液， ０．６ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ溶液为洗脱液，纯化效果较佳。纯化产品杂蛋白含量≤０．３％，回收率达７１．１％，粘均分子量大于９６万。     

离子排斥色谱结合光度检测的水质监测系统用于测定离子型营养物（英文）

A unified ion-exclusion chromatography(IEC) system for monitoring anionic and cationic nutrients like NH + 4,NO 2,NO 3,phosphate ion,silicate ion and HCO 3 was developed and applied to several environmental waters.The IEC system consisted of four IEC methodologies,including the IEC with ultraviolet(UV) detection at 210 nm for determining NH + 4 on anion-exchange separation column in OH form connected with anion-exchange UV-conversion column in I form in tandem,the IEC with UV-detection at 210 nm for determining simultaneously NO 2 and NO 3 on cation-exchange separation column in H + form,the IEC with UV-detection at 210 nm for determining HCO 3 on cation-exchange separation column in H + form connected with anion-exchange UV-conversion column in I form in tandem,and the IEC with visible-detection based on molybdenum-blue reaction for determining simultaneously silicate and phosphate ions on cation-exchange separation column in H + form.These IEC systems were combined through three manually-driven 6-port column selection valves to select each separation column to determine selectively the ionic nutrients.Using this sequential water quality monitoring system,the analytical performances such as calibration linearity,reproducibility,detection limit and recovery were also tested under the optimized chromatographic conditions.This novel water quality monitoring system has been applied successfully for the determination of the ionic eutrophication components in sub-urban river waters.     

强阴离子交换色谱结合分子排阻色谱纯化血清中免疫球蛋白和白蛋白

动物血清中免疫球蛋白和白蛋白的等电点分别约为7.8和4.8,根据它们等电点的较大差别,利用Q SepharoseTM-XL强阴离子交换色谱结合分子排阻色谱同时分离纯化这2种蛋白。以0.02 mol/L pH 8.0的Tris-HCl缓冲液平衡离子交换色谱柱并将已稀释10倍的高免疫的兔血清上样,采用pH分段洗脱。在pH 6.0时以0.3 mL/min低流速洗脱得到高纯度的免疫球蛋白,继续在pH 4.0时洗脱,再辅以Sephadex G-75分子排阻色谱可获得纯度大于95%的白蛋白。对纯化后的蛋白进行活性检测,证明所纯化的免疫球蛋白和白蛋白都保持正常的生物活性。蛋白质含量测定说明免疫球蛋白的纯化回收率达到95%以上,而白蛋白的纯化回收率大于90%。该法简便快速,可同时从动物血清中纯化出保持生物活性的免疫球蛋白和白蛋白,纯化效率高。     

强碱阴离子交换树脂及碱性洗脱剂的离子排阻/阴离子交换色谱法同时测定NH4+ ，NO2-和NO3-（英文）

Ion-exclusion/anion-exchange chromatography(IEC/AEC) on a combination of a strongly basic anion-exchange resin in the OH——form with basic eluent has been developed.The separation mechanism is based on the ion-exclusion/penetration effect for cations and the anion-exchange effect for anions to anion-exchange resin phase.This system is useful for simultaneous separation and determination of ammonium ion(NH+4),nitrite ion(NO-2),and nitrate ion(NO-3) in water samples.The resolution of analyte ions can be manipulated by changing the concentration of base in eluent on a polystyrene-divinylbenzene based strongly basic anion-exchange resin column.In this study,several separation columns,which consisted of different particle sizes,different functional groups and different anion-exchange capacities,were compared.As the results,the separation column with the smaller anion-exchange capacity(TSKgel Super IC-Anion) showed well-resolved separation of cations and anions.In the optimization of the basic eluent,lithium hydroxide(LiOH) was used as the eluent and the optimal concentration was concluded to be 2 mmol/L,considering the resolution of analyte ions and the whole retention times.In the optimal conditions,the relative standard deviations of the peak areas and the retention times of NH+4,NO-2,and NO-3 ranged 1.28%-3.57% and 0.54%-1.55%,respectively.The limits of detection at signal-to-noise of 3 were 4.10 μmol/L for NH+4,1.87 μmol/L for NO-2 and 2.83 μmol/L for NO-3.     

高效凝胶渗透色谱法检测马初乳中的免疫球蛋白G

建立了高效凝胶渗透色谱(HPGPC)测定马初乳中免疫球蛋白G(IgG)含量的方法。采用TOSOH TSK-G4000PWXL色谱柱(300 mm×7.8 mm, 5 μm)分离,以0.05 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.9)为流动相,流速0.8 mL/min,检测波长280 nm,温度25 ℃。结果表明: 免疫球蛋白G的线性范围为0.2～3.0 g/L(r2=0.9995),平均回收率为97.47%,相对标准偏差(RSD)为1.22%,检出限(信噪比为10)为0.08 mg/L,方法的稳定性、精密度和重现性(以峰面积的RSD计)分别为2.86%、1.62%、1.82%。在优先满足小马哺育的前提下,采集新疆昭苏马场中两个不同品种马匹的马乳,于低温保存,在4 ℃和12000 r/min下30 min内离心两次,制得乳清,测得第一次泌乳时,IgG含量在2 h时高达35.0～50.0 g/L,而在72 h后,马乳中IgG含量迅速下降为2.0～4.0 g/L。该方法前处理过程简单、快速,方法简便、准确、重现性好、精密度高,适合作为马初乳中IgG的检测方法。     

非对称场流分离技术在蛋黄浆质低密度脂蛋白粒径表征中的应用

通过自组装的非对称场流分离系统(AF4)与紫外可见光检测器联用分离表征了笼养鸡蛋、柴鸡蛋、鹌鹑蛋和鸭蛋蛋黄浆质中的低密度脂蛋白(LDL)。在近似蛋黄浆质生理条件下,研究了进样量、交叉流流速、膜的类型对AF4蛋黄浆质中LDL分离表征的影响;考察了该方法的精密度。在优化的AF4分析条件下,检测出了笼养鸡蛋、柴鸡蛋、鹌鹑蛋和鸭蛋蛋黄浆质中LDL的水力学粒径分布。LDL的AF4洗脱峰高和峰面积的日内精密度分别为1.3%和1.9%(n=7),日间精密度分别为2.4%和2.3%(n=7)。研究结果表明,该方法可用于分离禽类蛋黄浆质中的LDL,同时能够得到LDL水力学粒径分布。     

鸡肉中11种喹诺酮类药物多残留的高效液相色谱检测

建立了用荧光检测器同时测定11种喹诺酮类药物(包括诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、达氟沙星、洛美沙星、二氟沙星、沙拉沙星、恶喹酸和氟甲喹)在鸡肉中的多残留的高效液相色谱检测方法。鸡肉样品用10%三氯乙酸-乙腈(体积比为7∶3)提取两次并稀释,随后用反相固相萃取柱净化。采用Hypersil BDS-C18色谱柱分离,以乙腈和水为流动相梯度洗脱,荧光检测器用程序编程检测波长检测。11种喹诺酮类药物标准曲线的线性范围为5～1200 μg/L,相关系数大于0.998。在高、中、低三个添加水平下的回收率为56%～119%,批内相对标准偏差为0.4%～16.1%,批间相对标准偏差为1.4%～23.0%。检出限和定量限分别为1～23 μg/kg和4～40 μg/kg。该方法快速、灵敏,达到了兽药残留检测的要求。     

高效液相色谱法测定鸡组织与鸡蛋中氯苯胍的残留量

建立了测定鸡组织与鸡蛋中氯苯胍残留的高效液相色谱法。试样用乙腈提取,经HLB固相萃取柱净化和流动相定容后,采用高效液相色谱法测定。以乙腈-0.05 mol/L NH4H2PO4缓冲液(6:4, v/v, pH 6.5)为流动相,流速为1.0 mL/min,于317 nm波长下检测。氯苯胍在10～1000 μg/L范围内具有良好的线性关系;方法的检出限(信噪比为3)为10 μg/L,定量限(信噪比为10)为15 μg/kg;回收率为73.1%～88.7%。该法操作简便、快速、灵敏、准确,样品处理简便易行,适用于测定鸡组织与鸡蛋中残留的氯苯胍。     

高效液相色谱法测定鸡组织中苯并咪唑类药物残留标志物

建立了高效液相色谱同时测定鸡肉、鸡肝脏和鸡肾脏中11种苯并咪唑类药物残留标志物的方法。样品采用乙腈提取，经正己烷脱脂后以MCX固相萃取小柱净化，净化液浓缩处理后采用Atlantis T₃色谱柱分离，以甲醇-1%（v/v）乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，紫外检测波长为292 nm，外标法定量检测。目标化合物在25~1000 μg/L范围内线性良好，定量限为50 μg/kg；在不同添加水平下目标化合物的回收率为70.91%~103.21%，相对标准偏差为1.48%~10.08%（n=6），精密度和准确度均符合要求，能够满足鸡组织中苯并咪唑类药物残留标志物的检测要求。     

氨基己酸为配基的新型弱阳离子交换/疏水双功能色谱固定相对蛋白质的分离纯化

以硅胶为基质、氨基己酸为配基制备了一种新型弱阳离子交换/疏水（WCX/HIC）双功能混合模式色谱固定相。该固定相配基具有一定的疏水性且含有羧基,在高盐浓度下表现为HIC的性质,可作为HIC固定相使用;在低盐浓度条件下表现为离子交换的性质,可作为WCX固定相使用。分别考察了该介质在WCX和HIC两种模式下对标准蛋白质的分离性能,并与商品柱进行比较。结果表明,所合成的WCX/HIC双功能固定相在WCX和HIC两种模式下对蛋白质均有较高的分离度和选择性,且分离能力与商品柱相当,两种模式下标准蛋白质的质量和活性回收率均大于93%,表明该柱具有“一柱二用”的功能,适于生物大分子的分离纯化。基于此双功能色谱柱构建的在线单柱二维液相色谱（2DLC-1C）可在60 min内实现8种蛋白质的快速分离。在70 min内完成了对蛋清中溶菌酶的二维纯化,纯度可达到98.3%。该技术中一根色谱柱可当作两根色谱柱使用,对蛋白质组学研究和重组蛋白药物的生产具有重要的应用价值。     

Production of antibodies from chicken egg yolk to phenyl- N -methylcarbamate insecticides for analytical purposes

With the aim of developing polyclonal antibodies binding as many phenyl-N-methylcarbamate insecticides (PNMCs) as possible, IgY antibodies were produced in laying hens. Two haptens (3-(2,6-dimethyl-4-(methylcarbamoyl)phenylaminocarbonyl)propanoic acid and 4-((2,6-dimethyl-4-(methylcarbamoyl)phenylaminocarbonyl)-3,3-dimethyl)butanoic acid) were synthesized preserving the major structural features of PNMCs, by a novel synthetic pathway. These haptens differed only in the spacer arm incorporated. Immunizing antigen and coating antigen were prepared by coupling the first hapten with bovine serum albumin and the second with thyroglobulin, from porcine thyroid glands, respectively. The titre and maturation increase in the developed antibodies, in the egg yolk, were assessed by non-competitive ELISA. Avidity and cross-reactivity of the antibodies with selected pesticides were estimated by means of competitive ELISA. The produced IgYs exhibited a high binding capacity to carbaryl, trimethacarb, metolcarb, aminocarb, and promecarb. These antibodies can be used for immunosorbent preparation for analytical purposes.