毒素蛋白Colicin E1与磷脂膜相互作用的荧光光谱研究——临界摩尔…

磷脂－蛋白相互作用的临界摩尔比是研究膜脂－蛋白相互作用的重要参数。本文利用荧光光谱技术首次测定了毒素蛋白Ｃｏｌｉｃｉｎ Ｅ１在不同条件下与不同磷脂膜相互作用的临界摩尔比并通过临界摩尔比的变化讨论了插膜蛋白与磷脂膜相互作用的规律，为进一步探讨毒素蛋白的插膜机制提供了重要的基础。     

高效液相色谱-荧光检测法测定敬钊毒素-I的磷脂膜结合活性

敬钊毒素-I(JZTX-I)是一种能够抑制心肌钠通道失活的新型蜘蛛神经毒素,该文结合高效液相色谱与色氨酸荧光测定技术研究了JZTX-I的磷脂膜结合活性。脂质体共沉淀实验表明,JZTX-I具有不依赖于带负电荷磷脂组成的生物膜结合活性。当加入由酸性或中性磷脂构成的脂质体后,JZTX-I能够分别产生6.4和4.7nm的蓝移以及7.4和8.0nm的红移激发漂移,显示JZTX-I能够插入磷脂膜,同时该分子疏水表面的色氨酸残基处于一个运动受限的界面区域。荧光淬灭实验进一步证实,与脂质体结合能够减少该毒素分子表面色氨酸残基的溶剂暴露。该研究结果为阐明JZTX-I的离子通道门控调节机制提供了新的信息。     

高效液相色谱-荧光检测法测定敬钊毒素-I的磷脂膜结合活性

敬钊毒素-I(JZTX-I)是一种能够抑制心肌钠通道失活的新型蜘蛛神经毒素,该文结合高效液相色谱与色氨酸荧光测定技术研究了JZTX-I的磷脂膜结合活性。脂质体共沉淀实验表明,JZTX-I具有不依赖于带负电荷磷脂组成的生物膜结合活性。当加入由酸性或中性磷脂构成的脂质体后,JZTX-I能够分别产生6.4和4.7 nm的蓝移以及7.4和8.0 nm的红移激发漂移,显示JZTX-I能够插入磷脂膜,同时该分子疏水表面的色氨酸残基处于一个运动受限的界面区域。荧光淬灭实验进一步证实,与脂质体结合能够减少该毒素分子表面色氨酸残基的溶剂暴露。该研究结果为阐明JZTX-I的离子通道门控调节机制提供了新的信息。     

叶酸与氨基酸相互作用的荧光光谱

在模拟动物生理条件下,利用荧光光谱法在分子水平上研究了叶酸同色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸的相互作用;根据双对数方程求出了不同温度下两者反应的结合常数和结合位点数.结果表明:叶酸能导致氨基酸的荧光猝灭,三种氨基酸的猝灭机制均为静态猝灭;从相应的热力学参数可知,色氨酸和酪氨酸与叶酸之间的主要作用力为疏水作用力,而苯丙氨酸与叶酸之间的主要作用力为氢键和范德华力.     

岩白菜素与牛血清蛋白相互作用的荧光光谱研究

应用荧光光谱研究了岩白菜素与牛血清白蛋白(BSA)分子间的相互作用.结果表明,岩白菜素对BSA内源荧光的猝灭机制属于形成化合物所引起的静态猝灭,猝灭常数Ksv为1.905×104L.mol-1;岩白菜素与BSA反应的结合常数为2.083×104,结合位点数为1.由热力学参数确定了岩白菜素与牛血清白蛋白的结合作用主要为静电作用.实验还发现随着岩白菜素的加入,BSA的猝灭值与岩白菜素浓度在1.5×10-5~1.5×10-4mol.L-1的范围内呈良好的线性关系,检出限2.0×10-6mol.L-1,可用于岩白菜素的测定.     

牛血清白蛋白与保泰松和布洛芬相互作用的荧光光谱研究

应用荧光光谱法研究了保泰松和布洛芬与牛血清白蛋白分子间的相互作用,得到了分子间的结合常数和热力学参数．利用已有的计算方法,建立了相应的计算机程序,使计算结果更合理．通过与常见公式计算的结果进行比较,所建立的方法得到了比较满意的结果．同时考察了常见金属离子对药物与蛋白相互作用的影响．     

无探针荧光光谱法测定十二烷基硫酸钠的临界胶束浓度

建立了无探针荧光光谱法测定表面活性剂临界胶束浓度(CMC)的新方法,测定了典型阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)在水溶液中的CMC,并与表面张力法和电导率法的测定结果进行了对比。结果表明,荧光光谱法样品用量少,测定的SDS的CMC与传统方法一致,说明采用无探针荧光光谱法能够测定一些物质的临界浓度。     

同步荧光光谱法测定十二烷基苯磺酸钠的临界胶束浓度

采用表面张力、电导率、紫外可见吸收光谱、恒波长同步荧光光谱法分析了典型阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠在水溶液中的临界胶束浓度（CMC）。 结果表明,同步荧光光谱法测定CMC时的样品用量少,检测灵敏度高,具有较高的准确性;测定的十二烷基苯磺酸钠的第一临界胶束浓度和第二临界胶束浓度分别为1.48和6.90 mmol/L,与传统的表面张力法和电导率法的测定结果一致。 验证了同步荧光光谱法测定表面活性剂CMC的可靠性。     

核黄素与牛血清白蛋白相互作用的荧光光谱研究

采用荧光猝灭光谱、同步荧光光谱研究了核黄素与牛血清白蛋白(BSA)相互作用的光谱行为。结果发现,在温度为293 K和310 K时核黄素与BSA的结合常数(Kb)分别为4.879×105L.mol-1和1.880×105L.mol-1,结合热力学方程计算得到了对应温度下的热力学参数。结果表明核黄素对BSA有较强的荧光猝灭作用,其荧光猝灭过程属于动态猝灭机制,二者主要靠疏水作用力结合。采用同步荧光光谱探讨了核黄素对BSA构象的影响。     

十溴联苯醚与牛血清白蛋白相互作用的荧光光谱研究

在模拟生理条件下,采用荧光光谱法研究十溴联苯醚(Deca-BDE)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.结果表明: Deca-BDE对BSA的内源荧光有静态猝灭作用.Deca-BDE与BSA在277, 298和310 K的结合常数分别为1.92×105, 1.97×105和2.16×105 L/mol.Deca-BDE在BSA接近于色氨酸残基附近有2个结合位点.热力学参数表明, Deca-BDE与BSA相结合的主要驱动力是疏水作用力. 与Deca-BDE结合后,BSA色氨酸残基附近肽键伸展程度增加,蛋白分子结构疏松.     

Measurement of the Binding of Adenosylcobalamin to Glutamate Mutase by Fluorescence Spectroscopy

Fluorescence spectroscopy is a fast, highly sensitive technique for investigating protein‐ligand interactions. Intrinsic protein fluorescence is usually occurred by exciting the proteins with 280‐295 nm ultraviolet light, and the light emission is observed approximately between 330‐350 nm. No emission light between 330‐350 nm can be observed when adenosylcobalamin (AdoCbl) is excited at 282 nm. The binding of AdoCbl to glutamate mutase was therefore investigated by fluorescence spectroscopy in this study. Our results show that direct measurement for determining the K_d of AdoCbl by fluorescence spectroscopy leads to significant errors. Here we report the source of error and a corrected method for measuring the binding of coenzyme B₁₂ to glutamate mutase using fluorescence spectroscopy.     

荧光各向异性法快速测定荧光标记物对蛋白质的标记比

免疫荧光技术是免疫学检测的重要手段之一,该技术在病原微生物的早期诊断、自身免疫研究、抗原或抗体的免疫组化定位等方面都得到了广泛应用^[1].荧光色素对抗体(或抗原)标记比的测定是免疫荧光技术的重要部分.     

丝裂霉素C、阿霉素与过氧化氢酶的相互作用

用荧光光谱法研究了水溶液中抗癌药物丝裂霉素C、阿霉素与过氧化氢酶分子间的结合反应。结果表明：药物对过氧化氢酶的内源荧光有较强的猝灭作用，形成复合物所产生的静态猝灭是引起过氧化氢酶荧光猝灭的主要原因。进一步依据荧光猝灭结果确定了药物-酶复合物的形成常数。     

柚皮素、柚皮苷与溶菌酶相互作用的荧光光谱法研究

应用荧光光谱法研究了50%甲醇/水体系中柚皮素、柚皮苷与溶菌酶分子间的结合反应. 以Lineweaver-Burk双倒数方程和能量传递原理分别计算了两者与溶菌酶反应的结合常数(K)和结合距离(r): K_柚皮素^{25 ℃}＝4.00×10⁴, K_柚皮苷^{25 ℃}＝3.48×10⁴; r_柚皮素＝3.21 nm, r_柚皮苷＝3.30 nm, 以及由热力学参数的计算判断了两种分子与溶菌酶之间的作用力类型. 结果表明: 柚皮素、柚皮苷均能与溶菌酶以疏水作用相结合形成非共价化合物, 从而导致溶菌酶内在荧光的静态猝灭; 相对柚皮素, 柚皮苷与溶菌酶的结合距离增大, 作用强度减弱, 表明黄酮分子上多糖的取代不利于黄酮分子与蛋白之间的亲和作用. 根据Haslam等提出的多酚-蛋白质反应模型, 从分子水平初步探讨了糖取代对黄酮分子与蛋白相互作用减弱的原因.     

离子淌度质谱结合荧光光谱法研究5-氟尿苷与铜锌超氧化物歧化酶的相互作用

分别利用离子淌度质谱和荧光光谱方法研究了5-氟尿苷（5-Furd）与铜锌超氧化物歧化酶（SOD1）的相互作用.离子淌度质谱研究结果表明,5-Furd能够稳定SOD1构型,减缓其碰撞诱导去折叠;外源荧光光谱方法进一步证明5-Furd可以抑制SOD1的聚集.利用荧光光谱研究了不同温度下5-Furd与SOD1的相互作用,阐明了二者的作用机制、结合常数和结合位点数,并根据热力学函数推断二者的作用力类型为典型的疏水作用.     

牛血清白蛋白与Indo-1相互作用的荧光光谱法研究

以牛血清白蛋白(Bovine serum albumin, BSA)与荧光探针Indo-1为蛋白质和配体模型, 基于Indo-1的荧光强度与BSA的分析浓度间的关系, 建立了计算二者相互作用位点数的方法, 并利用荧光共振能量转移及各种荧光技术对Indo-1和BSA的相互作用进行了研究. 结果表明, Indo-1在BSA中有3个作用位点, 这3个作用位点与BSA中的212位色氨酸(Trp 212)间的距离分别为2.93, 2.57和2.40 nm; Indo-1通过疏水性作用进入到BSA的3个疏水性空腔. 在荧光猝灭实验中, 通过Microlab 500 系列进样器和PTI荧光仪的联用实现了荧光强度的自动和实时记录.     

N-(1-异喹啉)硫代亚胺碳酸乙酯荧光光谱的pH效应研究

本文合成了一种新的1位取代的异喹啉衍生物的脲类似物, 发现该化合物的荧光性质随溶液酸碱度的变化十分敏感. 详细研究该化合物的荧光光谱与溶液pH的相关性, 将有助于了解和阐明异喹啉衍生物的脲类似物的激发态光物理行为, 为进一步研究其它异喹啉衍生物的脲类似物及其配合物的光学性质提供理论依据.     

Preparation of (2E)-3-(4'-Halophenyl)prop-2-enoyl Sulfachlorpyridazine Sodium Salts and Their Interaction with Bovine Serum Albumin by Fluorescence Spectroscopy

Three (2E)-3-(4'-halophenyl)prop-2-enoyl sulfachlorpyridazine sodium salts(XPSCA) were synthesized. Their chemical structures were confirmed by ¹H NMR and ¹³C NMR, electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS), and infrared(IR) spectroscopy. The interactions between XPSCA and bovine serum albumin(BSA) were investigated under imitated physiological condition by fluorescence quenching technique and UV-Vis absorption spectroscopy according to the Stern-Volmer equation. The results from the emission quenching at different temperatures indicate that the quenching mechanism of serum albumin by XPSCA was static quenching mechanism at low XPSCA concentrations or a combined quenching(static and dynamic) mechanism at higher XPSCA concentrations. At different temperatures, the binding constant and the binding sites of XPSCA with BSA were investigated, and the distances were evaluated according to Förster non-radiative resonance energy transfer theory. The thermodynamic parameters were calculated according to van't Hoff equation, which implies that both van der Waals interaction and hydrogen bond played major roles in stabilizing the XPSCA-BSA complexes, whereas hydrophobic interactions were secondary. Moreover, the conformational changes in BSA were analyzed by synchronous fluorescence spectra.     

Studies of Adriamycin Binding to Histone H1 by Resonant Mirror Biosensor and Fluorescence Spectroscopy

Abstract

Adriamycin is a clinically used antitumor anthracycline antibiotic. Histone H1 is a target for the activity of anthracycline drug at the chromatin level. A new optical biosensor technique based on the resonant mirror was used to characterize interaction of adriamycin with H1, and the binding constant was obtained. By the analysis of fluorescence spectrum and fluorescence intensity, it was shown that adriamycin can quench the intrinsic fluorescence of tyrosine in H1 through a static quenching procedure. The binding constants of adriamycin with H1 were determined at different temperatures based on the fluorescence quenching results. The binding sites were obtained, and the binding forces were suggested to be mainly hydrophobic. The interaction of adriamycin and H1 in the presence of denaturant or salt was studied. The effect of Fe³⁺ on the binding constant was also investigated by optical biosensor and fluorescence spectroscopy. Furthermore, the steady‐state Stern–Volmer collisional quenching study of Tyr72 with acrylamide indicated that the association between adriamycin and H1 did not change molecular conformation of H1.