基于巯基和聚电解质双层自组装膜的压电免疫传感器检测小鼠IgG气溶胶

本文结合自组装单分子层膜(SAMs)和聚电解质静电吸附组装技术,提出了一种新的用于气相压电免疫检测的生物分子固定化方法,研制了一种用于检测小鼠IgG抗体的压电免疫传感器。首先在石英晶片的金电极表面自组装了一层L-胱氨酸SAMs,再在膜上组装带相反电荷的海藻酸钠,最后通过调节pH值定向固定羊抗鼠纯化抗体,优化了固定条件。通过超声雾化法产生的小鼠IgG气溶胶,研制成了直接气相检测小鼠IgG的压电免疫系统。结果表明,该方法对所固定的生物分子活性影响较小,传感器对小鼠IgG的响应快,灵敏度高,在0.14~6μg.μL-1范围内具有良好的线性关系,精密度好,再生方便。     

基于碳纳米管固定抗原的电化学免疫传感器法测定IgG抗体

以1-萘酚磷酸酯为底物,将IgG抗原吸附固定在碳纳米管修饰玻碳电极的表面,利用待测IgG抗体和碱性磷酸酯酶标记IgG抗体共同竞争免疫传感器表面的IgG抗原,研制了一种新型的电化学免疫传感器用于IgG抗体的测定。碱性磷酸酯酶可以催化底物1-萘酚磷酸酯水解生成1-萘酚,在电极表面氧化产生电信号。在电位为+0.30 V(vs.SCE)时,响应电流与IgG抗体浓度在5.0×10-9～5.0×10-7g/mL范围内呈良好的线性关系,检出限为2.0×10-9g/mL。     

基于纳米金／壳聚糖掺杂碳纳米管修饰金电极非标记免疫传感器的研究

应用吸附法将羊抗人IgG抗体直接固定于纳米金(GNPs)/壳聚糖(Chit)掺杂碳纳米管(CNTs)修饰的金电极表面,制备了用于人IgG抗原检测的非标记电化学免疫传感器.利用循环伏安法和交流阻抗研究了修饰电极表面的电化学特性,用差分脉冲伏安法研究了测试底液的pH值对免疫传感器性能的影响.实验表明,在含不同浓度人IgG的...     

以膨胀石墨为基底的聚吡咯电化学免疫传感器

用恒电位法在膨胀石墨基底表面合成聚吡咯,聚吡咯上的亚氨基与戊二醛发生交联,制备成稳定的膨胀石墨/聚吡咯/戊二醛传感器界面.以此界面固定人IgG抗体,戊二醛作为交联剂,发展了一种新型的电化学免疫传感器.该传感器在IgG溶液中温育后,其表面结合的IgG和随后加入的辣根过氧化氢酶(HRP)标IgG二抗以及传感器表面的IgG抗...     

纳米金-蛋白A介导抗体定向固定的压电传感及电化学特性研究

以纳米金为载体标记蛋白A(PA),用于介导抗体在压电石英晶体金电极表面的定向固定化.以补体C_1q抗体为模型,采用压电传感技术实时监察了此敏感界面的免疫反应过程,并考察了与补体C_1q免疫反应的压电响应性能.金标PA固定抗体的方法与传统的直接PA固定化方法相比较,具有传感界面无需活化,固定抗体的免疫活性高等优点,可对相应抗原进行高灵敏的压电免疫检测.分别利用循环伏安和电化学交流阻抗技术对金标PA固定抗体及其免疫反应的动力学过程进行了表征.     

一种新的压电免疫传感器中生物分子固定化方法的研究

生物分子固定化或传感界面设计技术是研制压电免疫传感器的关键之一。本文 结合自组装单分子膜（SAMs）和聚电解质静电吸附组装技术，提出了一种新的压电 免疫传感器中生物分子固定化方法，研制成一种检测补体C_3的压电免疫传感器。 先在石英晶振的金电极表面组装一层胱胺SAMs，再在膜上组装带相反电荷的聚苯磺 酸钠（PSS）单层膜，通过静电吸附作用固定抗体（抗原），实现对相应抗原（抗 体）的检测。利用扫描电镜技术，从形态上考察了晶振组装胱氨SAMs与PSS及固定 补体C_3抗体后的表面形貌。研究了抗体的固定化条件，探讨了传感器采用这种固 定化方法的响应与再生性能，并与戊二醛键合固定法进行比较。结果表明，这种固 定化方法不仅对蛋白质类生物分子的固定化具有普适性，而且对所固定的生物分子 的活性影响小，传感器的响应的频移值大，灵敏度高，选择性和再生性能均较好。     

壳聚糖-纳米金复合膜修饰电化学发光免疫传感器检测人免疫球蛋白G

利用壳聚糖与纳米金良好的生物相容性及蛋白固定能力,制备了兼具导电性和透光性的人免疫球蛋白G(IgG)修饰膜,用于修饰玻碳电极,研制了新型电化学发光免疫传感器,并通过扫描电镜(SEM)及交流阻抗技术(EIS)考查了传感器表面性质.基于竞争免疫分析模式,以Ru(bpy)32+标记的羊抗人IgG为发光示踪物,采用新型共反应剂二丁基乙醇胺(DBAE)对光信号进行放大,建立了人IgG的检测方法,线性范围20ngmL-1～1.0μgmL-1,检测限6.5ngmL-1.将该电化学发光传感器应用于人血中IgG的检测,结果令人满意.     

基于电聚合膜和纳米金自组装的生物分子固定化新方法的研究

结合电聚合膜和纳米金自组装技术,提出了一种新的生物分子固定化方法,研制成一种检测抗胰蛋白酶的压电免疫传感器。通过在石英晶振金电极表面电聚合邻苯二胺膜,再在膜表面自组装一层纳米金粒．以静电吸附作用固定抗体(抗原),实现对相应抗原(抗体)的检测。利用扫描电镜技术,从形态上考察了晶振金电极上自组装纳米金后的表面形貌。研究了抗体的固定化条件,探讨了传感器的响应与再生性能结果表日月．这种固定化方法对所固定的生物分子的生物活性影响小,传感器的测定灵敏度高．响应性能和再生性能较好。     

基于微机电系统技术和纳米金自组装膜的安培型免疫传感器研究

基于微机电系统(MEMS)技术制备安培型免疫传感器,并利用基于硫醇单层膜的纳米金单层膜自组装技术设计传感器界面,用于固定人免疫球蛋白(IgG)抗体,研制了一种新型的安培型免疫传感器。采用MEMS技术,在硅片上制备微型的三电极系统以及SU-8反应池。基于自组装技术,先在金电极上自组装巯基乙胺单层膜,利用膜上氨基与纳米金共价结合组装纳米金单层膜,得到可用于固定抗体的界面。实验探讨了影响抗体固定的主要实验参数和条件;考察了采用此固定化方法传感器的响应性能,与金电极直接吸附固定法和戊二醛共价交联固定法进行了比较。对IgG检测的实验结果表明,采用纳米金自组装膜固定抗体,具有活性高、非特异性吸附小、检测线性范围宽等优点。并且,基于MEMS技术的安培型免疫传感器具有微型化、与集成电路工艺相兼容、易于实现传感器的阵列化和实时多参数检测等优点。     

电化学聚合吡咯掺杂蛋白A固定抗体的安培型沙门氏菌微传感器

基于电化学聚合将蛋白A(staphylococcal protein A)与吡咯掺杂后共聚于电极表面的新方法设计传感界面,结合采用微机电系统(micro electro mechanical systems, MEMS)技术制备的两电极系统,开发了一种新型的利用电聚合引入蛋白A进而固定抗体、提高检测性能的安培型免疫微传感器,并应用于沙门氏菌(Salmonella typhimurium, S.typhi)的检测.考察了传感器检测沙门氏菌的响应特性,优化了相关实验条件及参数,并结合扫描电镜(scanning electron microscopy,SEM)图像验证了该抗体固定方法的有效性.实验表明,采用电化学聚合方法固定蛋白A进行敏感膜修饰,操作简便省时(<10 min)、可控性强,试剂用量少(10 μL),能够有效改善抗体固定效果,提高传感器检测性能,适于微型免疫传感器的表面修饰研究.以此设计的安培型免疫微传感器能够检测100 cfu/mL沙门氏菌溶液,具有良好的重复性和特异性.     

基于邻苯二胺电聚合膜的抗体固定化方法研究

Si等 [1] 在压电石英晶体金电极表面先电聚合了一层聚苯胺膜 (PAn) ,再于 PAn膜上电聚合一层聚间苯二胺膜 (Pm PD) ,形成一双层膜 (Pm PD和 PAn) ,而后通过戊二醛共价键合固定化方法 ,实现对生物蛋白质分子的固定和对生物细胞的测定 .但在上述方法中 ,传感器难以再生且蛋白质分子的固定量较少 .参照文献 [2 ],本文提出了一种在电聚合邻苯二胺薄膜上进行可逆的抗体固定化的新方法 .通过控制溶液的 p H值 ,在带正电的电聚合邻苯二胺膜表面先自组装一层聚阴离子聚苯磺酸根 (PSS)层 ,使传感器得到一个带负电的载体表面 ,再通过静电吸附 ,…     

压电胰岛素-C肽微阵列免疫传感器研究

以AT切型、基频10MHz的镀金膜石英晶体作为换能器,将抗人胰岛素和C肽单克隆抗体固定在石英晶体电极表面,用2×5检测池固定夹具构建一种新型压电胰岛素-C肽微阵列免疫传感器.研究了抗体固定方法、抗体工作浓度、固定量、一致性以及传感器的响应参数如检测温度、时间和特异性等的影响.该微阵列传感器在胰岛素浓度为2.5～160.0mIU/L、C肽浓度为0.375～12.0ng/mL范围内响应特性良好,压电晶体频率偏移值与胰岛素和C肽浓度呈良好的线性关系.将此微阵列传感器用于人血清标本的测定,结果与放射免疫法符合(r为0.92和0.94).此微阵列传感器具有灵敏度高、特异性好,低密度阵列结构,检测通量较高,不需标记,操作简单、能实时在线检测和重复使用等优点,能用于临床实验诊断,具有临床推广应用价值.     

用于液相中检测的压电免疫传感器研究

利用聚乙烯亚胺法,将Ｃ２型葡萄菌肠毒素（ＳＥ）抗体固化在未抛光的压电晶体的金电极上,利用双调式振荡电路制作的振荡器,构建压电免疫传感器,其稳定性,特异性都较好。     

一种新的基于正丁胺等离子体聚合膜的免疫传感器抗体(抗原)固定化方法

等离子体聚合膜 ( Plasma- polymerized film)是由有机蒸气在辉光放电下聚合而成 ,这种高度交联的膜具有均匀、超薄、附着力强、化学稳定、机械性能良好、基质类型多样以及成膜有机物品种多样等优点 ,因此已引起了传感器工作者的兴趣 ,目前 ,所研制的传感器已用于有机气体的测定 [1 ,2 ] .Karube小组报道了乙烯二胺等离子体聚合膜在免疫传感器方面的应用[3,4] .但由于抗体直接共价键合于等离子体聚合膜上 ,无法洗脱 ,使等离子体聚合膜修饰的传感器不能再生 ,而不同批次沉积的等离子体聚合膜其交联度、活性基团含量等又难以一致 ,严重影响了…     

Piezoelectric immunosensor based on magnetic nanoparticles with simple immobilization procedures

A novel method for immobilizing antibodies (antigens) based on magnetic nanoparticles has been proposed for piezoelectric immunoassay. The goat-anti-IgG antibody (IgGAb) as the model analyte was first covalently immobilized to magnetic nanoparticles, which were surface modified with amino-groups. The magnetic bio-nanoparticles (MBN-s) formed were attached to the surfaces of quartz crystal with the help of a permanent magnet. The detection of immunoglobulin G (IgG) was performed with the sensor prepared. The process of immobilization and immunoreaction was monitored by frequency recording. From the SEM images of the sensor surface before and after immobilization of MBN, one can see that the MBN was homogeneously adsorbed on sensor surface. The piezoelectric immunosensor can determine IgG in the range of 0.6-34.9 μg ml⁻¹ with a detection limit of 0.36 μg ml⁻¹. The MBN and immunocomplex layer can easily be removed simply by taking away the magnetic field, making the piezoelectric sensor easy to be regenerated.     

基于等离子体聚合膜的日本血吸虫压电免疫传感器的研究

提出了一种测定日本血吸虫抗体的可逆压电免疫传感器。先在石英晶振上沉积正丁胺等离子体聚合膜,再自组装聚电解质,用以静电吸附固定日本血吸虫抗原。然后采用BSA和NRS作封闭剂,以封闭晶振上非特异必吸附位点,实现对日本血吸虫感染兔血清的测定。探讨了聚电解质(PSS和AASS)自组装、抗原包被和免疫反应等实难条件的影响;考察了该传感器的响应特性与再生性能,并与采用戊二醛共价键合固定法进行比较。发现该传感器具有灵敏度高、重现性好、非物异性吸附低、再生简便等优点。将它用于测定一系列不同感染程度的兔血清样本,结果表明,该传感系统是临床定性和定量诊断日本血吸虫病的一种有效工具。     

蛋白A定向固定抗体的纤维蛋白压电免疫传感器的研究

将9MHz双面镀金石英晶体浸入蛋白A溶液中,在晶体电极表面形成一层均匀的蛋白A薄层,用于定向固定人体纤维蛋白抗体.在蛋白A层上形成一层有序致密的自组装抗体分子膜,研制成一种新型的用于人体纤维蛋白检测的压电免疫传感器.比较了3种固定抗体方法的效果,从传感器的灵敏度、稳定性、重现性等考虑,蛋白A吸附法优于聚乙烯亚胺及牛血清白蛋白固定抗体的方法.研究了蛋白A浓度、抗体效价以及抗原抗体反应时间等对传感器灵敏度的影响,考察了电极的选择性和再生能力.纤维蛋白在1×10^-4～1×10^-2g/L浓度范围内有良好响应.     

Piezoelectric crystal for sensing bacteria by immobilizing antibodies on divinylsulphone activated poly-m-aminophenol film

A polymer sorbent formed at the surface of gold-plated piezoelectric crystal by anodic oxidation of m-aminophenol was investigated by voltammetric, FTIR techniques for antibody coupling after activation by divinylsulphone. A novel film with increased capacity for immobilizing antibodies was obtained using phloroglucinol to modify poly-m-aminophenol via divinylsulphone. Compared with the dip-coating methods using polyethylenimine and (gamma-aminopropyl)trimethoxysilane, this new technique gave more reproducible results for the immobilization of antibody from sample to sample due to the improved homogeneity and reproducibility of the coating. With present modification method, a piezoelectric immunosensor was developed for the detection of Salmonella enteritidis. A detection limit of 1x10(5) cells ml(-1) and an assay time of 25 min were achieved.     

Single-step sandwich immunoreaction in a square glass capillary immobilizing capture and enzyme-linked antibodies for simplified enzyme-linked immunosorbent assay

To simplify the complicated operation steps and to minimize sample and reagent amounts for enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA), we developed a square glass capillary immunosensor containing both covalently immobilized capture antibodies and physically adsorbed enzyme-linked antibodies. The immobilization of capture antibodies (anti-human IgG) was carried out by the treatment of 3-aminopropyltriethoxy silane, glutaraldehyde, and protein-A, followed by affinity capture of the antibody. In contrast, the enzyme-linked antibodies (alkaline phosphatase (ALP)-linked anti-human IgG) were physically adsorbed on the four corners of the capillary with the aid of polyethylene glycol (PEG) acting as a scaffold. A nanoliter volume of antigen (human IgG)-containing sample solution was introduced via capillary action. This addition resulted in the release and diffusion of ALP-linked anti-human IgG into the bulk solution. This event led to a 20-min single-step sandwich immunoreaction at the inner wall of capillary; the reaction was detected through the reaction with fluorescein diphosphate (FDP) which generated a fluorescent product, fluorescein. Using this technique, we obtained an intra-capillary precision with a coefficient of variation of 9.7%. In addition, the specificity study showed that the human IgG capillary immunosensor did not respond to rabbit IgG. Quantitative analysis was possible within the response range of 10 - 5000 ng mL(-1) anti-human IgG. This capillary immunosensor can act as a single analytical unit or can be integrated into a capillary array for multiple bioanalysis.