肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖的免疫活性研究

利用临床分离的肺炎克雷伯氏菌致病株制备其荚膜多糖（CPS），对CPS的免疫活性进行了研究。结果显示，CPS具有很强的免疫原性，以其免疫家兔制备的多克隆抗体效价达1：32000，且对CPS具有高度特异性；体外免疫活性实验表明，CPS对细胞免疫具有双向调节作用，即低浓度CPS对小鼠脾细胞增殖具有显著的促进作用，而高浓度CPS对小鼠脾细胞增殖具有显著的抑制作用；溶血空斑实验结果显示，CPS对体液免疫刺激作用显著（P〈0．01）；同时CPS能激活巨噬细胞．促进细胞因子TNF-α的生成。     

AP—PCR技术在克雷伯氏菌DNA多态性分析中的应用

以一条含１０个碱基的随机引物对３０株克雷伯氏菌的ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，得到不同的指纹图谱。表明该技术可应用于细菌检测和流行病学调查。     

环介导等温扩增技术检测乳粉中肺炎克雷伯菌

以荚膜脂多糖(capsular polysaccharide,CPS)合成调控子resA为靶基因片段,设计了肺炎克雷伯菌特异性引物,建立了环介导恒温扩增技术(Loop-Mediated lsothermal Amplification,LAMP)检测方法.结果表明,3对LAMP引物对肺炎克雷伯菌不仅有菌种专一性,而且,具有相当高的灵敏度(2 CFU/100 g).因此,该方法有利于更快更准确的鉴定食品中肺炎克雷伯氏菌.     

新型氨气传感器检测肺炎克雷伯菌的应用

提出了一种通过自行研制的聚苯胺/TiO2-PQC新型氨气传感器来实现迅速定量检测肺炎克雷伯菌的方法。该方法是利用肺炎克雷伯菌在有尿素的存在下能够产生大量的氨气和二氧化碳,此时产生的氨气能够与自制的聚苯胺/TiO2-PQC氨气传感器反应,并引起其表面电参数的变化,信号通过电脑输出,从而达到检测肺炎克雷伯菌的目的。经过研究结果显示,与SPQC相比新方法操作简单,更加灵敏以及不需要特定的培养基等特性,而且能够实现定量实时监测肺炎克雷伯菌。     

基于全局转录工程促进肺炎克雷伯氏菌吡咯喹啉醌的生物合成

用易错PCR构建肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)RNA聚合酶rpoD基因的突变文库,将其与载体连接后转化肺炎克雷伯氏菌,从1500个阳性克隆中筛选出一株吡咯喹啉醌(PQQ)生产菌。发酵试验表明,该工程菌的PQQ产量为76mg/mL,比携带未突变rpoD基因的对照菌提高了10%。测序发现rpoD基因在核酸和蛋白质水平的突变率分别达到2.5%和0.5%。二级结构预测发现α螺旋、β转角和无规则卷曲数目均发生了变化,推测由此改变了σ因子与启动子的亲和程度,从而导致了PQQ基因的转录以及K. pneumoniae代谢流量再分配,使得PQQ得到更高效表达。     

NaCS/PDMDAAC微囊化肺炎克雷伯氏菌发酵产1,3-丙二醇

研究一种新型的生物微胶囊体系--NaCS/PDMDAAC,包埋肺炎克雷伯氏菌(K. Pneumoniae ZJU 5205)产1,3-丙二醇.比较不同初始菌体包埋量、胶囊/发酵液体积、发酵液pH值、初始甘油质量浓度等对微囊化细胞发酵结果的影响.结果表明,将细胞种子液稀释5倍后包埋,当胶囊与发酵液的体积比为1∶2、初始pH值为7、初始甘油质量浓度为60 g·L-1时,得到较好的发酵结果.考察肺炎克雷伯氏菌在囊内的生长曲线,以及底物和产物质量浓度随发酵时间的变化,发现由于胶囊引起的扩散限制,可以持续维持囊内较低的底物质量浓度,从而部分克服高质量浓度底物对菌体生长和生成产物的抑制.     

肺炎克雷伯氏菌D-乳酸脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

以肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增并克隆出D-乳酸脱氢酶的基因（ldhD）,将其连接到表达载体pET-22b(+)质粒上,构建pET-22b(+)-ldhD重组质粒,测序结果100%正确。将重组质粒pET-22b(+)-ldhD转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,通过氨苄霉素抗性平板筛选,构建大肠杆菌BL21(DE3)-pET-22b(+)-ldhD基因工程菌。重组菌株经IPTG诱导表达,SDS-PAGE蛋白电泳分析,目标条带出现在分子量约37000处,表明D-乳酸脱氢酶基因ldhD在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达。采用紫外分光光度法测定其酶活,底物丙酮酸终浓度为10mmol/L时,在丙酮酸还原为D-乳酸反应方向D-乳酸脱氢酶表现出119.04U/mL的酶活力;底物D-乳酸终浓度为50mmol/L时,在D-乳酸转化为丙酮酸的逆反应方向中表现出0.89U/mL的酶活力。比酶活则分别为9.16U/mg和 0.07U/mg。通过Lineweaver-Burk双倒数作图法,计算出酶反应的米氏常数K_M为10.54mmol/L。经摇瓶发酵后,通过高效液相色谱测定产物,D-乳酸的产量达到3.09g/L。     

兔源多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌多重PCR检测方法的建立

目的 建立兔源多杀性巴氏杆菌(Pm)、金黄色葡萄球菌(Sa)和肺炎克雷伯菌(Kp)的多重PCR方法。方法 本研究参考Pm kmt1基因、Sa nuc基因和Kp kh1基因的保守区域,设计3对特异性引物,以温度梯度PCR法确定最适退火温度(Tm),采用控制单一变量法优化引物浓度,构建kmt1、nuc和kh1基因的重组质粒标准品pMD-Pm、pMD-Sa和pMD-Kp,确定最小检测量;以兔源支气管败血波氏杆菌和产气荚膜梭菌等9种病原体核酸样本确定多重PCR法的特异性;通过批间和批内实验验证其重复性;经检测疑似感染的临床样本与已报道的检测方法进行比较,评估其临床应用效果。结果 最适退火温度为54.5℃;扩增kmt1和nuc基因的引物最适浓度均为1μL(10μmol/L),扩增kh1基因的引物最适浓度为0.5μL(10μmol/L);pMD-Pm最低检测限为20.6 copies/μL,pMD-Sa最低检测限为18.2 copies/μL,pMD-Kp最低检测限为23.2 copies/μL,表明其灵敏性高;该方法仅对Pm、Sa和Kp有特异性扩增条带,对其他病原体均无扩增条带,表明特异性较强;...     

肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性分析

目的：通过实验的方式,熟悉通辽地区革兰氏阴性杆菌中肺炎克雷伯菌产超广谱β—内酰胺酶（ES-BLs）的情况,并初步掌握该种细菌对常用的抗生素耐药状况,为临床合理使用抗生素提供有效的依据.方法：样本采集区间为2012年1月至2012年12月,采集地点为内蒙古民族大学附属医院样本分离出的肺炎克雷伯菌共258株,通过采用双纸片协同扩散法检测革兰氏阴性杆菌产超广谱β—内酰胺酶,并且采用K-B法做药敏试验,对肺炎克雷伯杆菌做具体耐药性分析,最终将分析出的耐药性结果按照世界卫生组织细菌耐药性监测网提供的WHONET5.6软件进行数据统计分析,并根据美国国家临床实验标准化委员会订立的标准（2009年版）做出敏感性和耐药性的分析报告.结果：肺炎克雷伯菌在ICU、呼吸内科、神经外科分布较多.肺炎克雷伯菌及其产酶菌株耐药性强,给临床治疗带来很大麻烦,其中亚胺培南是治疗首选,另外对头孢类复合制剂药物也相对敏感.结论：临床可以使用交叉用药方案,避免耐药菌的出现.     

构建组成型肺炎克雷伯氏菌表达系统生产3-羟基丙酸

利用组成型卡那霉素抗性基因启动子(Pkan),在肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)中过表达大肠杆菌醛脱氢酶基因ald H,获得重组菌K.p(p ETPkan-ald H)。微氧摇瓶发酵表明,该重组菌可高效利用甘油生产3-羟基丙酸,产量为0.47 g/L,较野生菌提高89.5%,甘油转化率、单位菌体产量分别提高100%和92%。5 L发酵罐微氧流加发酵表明,该菌3-HP产量达15.28 g/L,甘油转化率、产率分别为13.02%、12.73%。     

套式PCR检测淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)方法应用

目的检测目前小鼠和地鼠中淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒的感染情况。方法采用套式PCR方法对小鼠和地鼠脑及小鼠脏器进行扩增,检测LCMV基因;同时对血清进行ELISA试验,将两种方法的结果进行比较。结果从小鼠的脾脏和肾脏中检测到NP基因的存在,检出率2/148;ELISA检出率5/148。结论PCR与ELISA检测方法相结合,准确率高,证明目前小鼠中存在LCMV的感染。     

PCR技术检测致病真菌感染的研究

目的建立适合临床实践的常见致病真菌的PCR检测方法。方法根据真菌的保守基因设计不同的特异性引物,对152例临床标本进行PCR检测,与传统检验方法的结果进行比较。结果真菌培养阳性46例;真菌PCR检测阳性57例,分别为白色念珠菌感染30份、烟曲霉感染9份、黄曲菌感染8份,其他真菌感染10份。两种方法比较,检出率差异无统计学意义。结论 PCR法可快速、特异、灵敏地检测致病真菌,适合临床实验室的快速诊断。     

应用聚合酶链式反应检测犬细小病毒

将具有犬细小病毒病典型症状的病犬肠溶物经ＳＤＳ－酚裂解法提取总ＤＮＡ,并以此ＤＮＡ为模板,通过人工合成的两条２０ｍｅｒ引物进行ＰＣＲ扩增,该对引物扩增的片段为犬细小病毒结构蛋白ＶＰ２基因中间１／３区段,ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳,试验结果表明：用ＰＣＲ扩增检测犬细小病毒具有良好的特异性,应用该方法检测的２７份病犬肠溶物样品块获得了预计长度的ＤＮＡ片段（５３１ｂｐ）,而健康犬的肠溶物样品ＰＣＲ结果为     

应用聚合酶链反应检测环境污水脊髓灰质炎病毒的研究

用聚合酶链反应技术检测５个市县１５份环境污水中肠道病毒，其中１１份阳性，与细胞中和试验鉴定阳笥结果符合率９０．９０％－１００％，该法不仅简单，敏感，特异分型，而且可作型内鉴别，使细胞中和试验分型和Ｔ特征型内鉴别所需１４ｄ缩短到２ｄ。为环境样品中脊髓灰质炎病毒污染提供了检测手段。     

猴空泡病毒(SV40)PCR检测方法的建立与初步应用

目的建立检测实验猴及生物制品中猴空泡病毒(SV40)的PCR方法。方法根据SV40-776株设计合成三对引物对现有毒株进行PCR扩增并克隆测序。用这三对引物对56份猴肾、肺、脾及10批脊髓灰质炎疫苗进行检测。结果三对引物均扩增出目的片段;56份猴脏器和10批疫苗SV40检测均为阴性。结论56只恒河猴和10批疫苗中未检测到SV40,所设计的三对引物检测结果准确,均可用于检测。     

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)PCR检测方法的建立与初步应用

目的建立检测淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)的PCR方法。方法根据LCMV CDNA S片段的GPC和NP基因设计合成4对引物,对标准毒株进行套式PCR扩增并克隆测序,并对15份已知阳性或阴性小鼠鼠脑进行检测。结果目的片断与LCMV cDNA序列99%同源,对鼠脑的检测结果为10只阳性,5只阴性。结论检测小鼠鼠脑LCMV的结果准确,证明套式PCR能够应用于LCMV的实验室检测。     

聚合酶链反应检测石蜡切片中金黄色葡萄球菌DNA的研究

目的　探讨聚合酶链反应技术 (PCR)在检测石蜡包埋组织中金黄色葡萄球菌DNA的应用及价值。方法　利用PCR技术 ,对 55例福尔马林固定、石蜡包埋小鼠组织中SA DNA进行了检测。结果　 55例石蜡包埋的小鼠组织中均检测到SA DNA ,这与临床病理诊断为金黄色葡萄球菌 (S .aureus)感染相一致。结论　PCR技术可用于检测石蜡包埋组织中的SA DNA片段 ,为鼠S .aureus感染的回顾性分析提供了有效手段     

逆转录聚合酶链式反应快速检测水稻条叶枯病毒

逆转录聚合酶链式反应（Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ,ＲＴ－ＰＣＲ）具有灵敏度高,准确性好的特点,因而被广泛应用于植物病毒检测。在ＲＴ反应中,ＲＮＡ样品的快速制备尤为重要用异丙醇二步沉淀法获得ＲＮＡ,快速检测水地片中ＲＳｔＶ伯ＲＴ－ＰＣＲ方法,可使测定时间缩短至６ｈ,并可从０．０７８ｍｇ感病叶片中检测出ＲＳｔＶ。     

Meta-Analysis of Polymerase Chain Reaction in the Detection of Human Leptospirosis

Leptospirosis, a major zoonotic disease widespread in the world, would infect humans and other animals by direct contacting with the soil or water contaminated by the pathogenic leptospires. This report analyzes the accuracy of polymerase chain reaction(PCR) assay used in the detection of leptospira specific genes in humans. Seventeen published articles which included 2 526 samples satisfied all inclusion standards and were applied to meta-analysis. Pooled sensitivity and specificity were 0.73(95% CI 0.70-0.76) and 0.94(95% CI 0.93-0.95), respectively. Heterogeneity was statistically significant among studies, but none of the sources for heterogeneity(disease stage, PCR type, targeted genes) could adequately interpret this finding. Meta-regression advised that real-time PCR(qPCR) targeted 16 s rRNA would be the best choice for early detection of cases during the acute stage of the disease and was accounted as a good screening tool in all stages of the disease.