核酸杂交酶联桥接分析系统定量分析寡核苷酸

建立了基于核酸杂交及连接酶和核酸内切酶的酶联桥接分析(ELBA)系统,用于生物基质中反义寡核苷酸(ODN)药物的定量分析.对ELBA系统中的亲和素包被、俘获探针/检测探针浓度、T4 DNA连接酶及S1核酸酶用量、碱性磷酸酶底物反应时间等条件进行了优化,确定使用中性亲和素包被的酶标板,俘获探针与检测探针浓度比为2∶3,S1酶为40 U/孔,显色15min为最优条件,并考察了生物基质效应和稀释效应对方法的影响,建立了猕猴血浆中反义寡核苷酸的定量方法,并进行方法学确证,方法学定量范围为0.10～6.25 nmol/L.本方法成功应用于反义硫代寡核苷酸药物在低剂量(1 mg/kg)静脉滴注后的药代动力学研究,成为生物基质中寡核苷酸类药物定量分析的有效手段.     

市场动态

我国研制成功电化学发光检测仪　　具有独特电化学发光检测功能的“毛细管电泳电化学发光检测仪” ,不久前由中国科学院长春应用化学所与西安瑞迈电子科技有限公司合作研制成功 ,并通过鉴定。有关专家认为 ,这种具有我国自主知识产权的仪器 ,创新性显著 ,设计制作新颖 ,达到国际领先水平。该电化学分析仪器可用于药物、氨基酸、多肽、蛋白质及核酸等的检测分析 ,并可适用于蛋白质与药物、核酸相互作用的研究 ,在生化、医药、临床 ,免疫等方面有着广阔的市场前景。它与相关领域通常应用的进口“毛细管电泳激光诱导荧光分析仪”相比 ,大大降低…     

丝组二肽对DNA的切割作用的研究

近20年来,人工核酸切割试剂的研究一直是生物化学中最为活跃的前沿领域之一,研究人工核酸切割试剂的主要目的是合成定点切割试剂,后者是一种重要的分子生物学工具,在疾病的基团治疗、反义PCR技术等领域中有着重要的应用价值。此外,人工核酸切割试剂还可以在足迹技术和核酸高级结构的研究中用作高分辨率的化学探针。     

核酸适配体在肿瘤靶向治疗方面的研究进展

传统的抗肿瘤药物大多不具有选择性,在临床治疗中产生了严重的毒副作用。核酸适配体是一种小分子核酸,能够与靶标高亲和性、高特异性地结合。选择与癌症发生发展过程密切相关的生物标记物为靶标进行SELEX过程筛选出的核酸适配体自身可作为药物,也可与药物、siRNA、纳米粒等结合构成靶向给药体系,该体系能靶向作用于特定的肿瘤细胞,降低对正常细胞的毒性,用药量显著降低,药效提高。本文综述了近年来核酸适配体直接作为抗肿瘤药物、药物载体、siRNA载体以及作为纳米材料靶向剂构成多元复合靶向给药体系在肿瘤靶向治疗领域的研究进展。     

核酸适体偶联药物的生物偶联构建技术与应用

核酸适体被称为“化学抗体”, 具有与抗体类似或更加优异的特异性和亲和力, 可以精准地靶向靶蛋白, 与靶蛋白特异性结合. 此外, 核酸适体还具有获取简单、 合成简便、 易于进行化学修饰、 不易变性、 靶标范围广、 免疫原性低及细胞内化快等优点, 已被广泛应用于众多研究领域. 在癌症治疗领域, 核酸适体作为一种优异的靶向识别工具和药物递送载体, 可实现抗肿瘤药物的精准递送. 将核酸适体与药物分子偶联, 可通过核酸适体的靶向作用使药物分子随核酸适体共同进入靶细胞, 实现药物分子在靶细胞内的富集, 进而促进靶细胞的死亡. 近年来, 核酸适体偶联药物已成为癌症靶向治疗的前沿新兴领域, 希望通过该领域的深入研究为癌症靶向治疗领域提供新思路. 本文综合评述了以生物偶联技术构建的核酸适体偶联药物及其应用研究.     

可诱导核酸交联剂的研究进展

如何选择性的破坏癌细胞DNA链结构的药物,一直是研究的热点,可诱导核酸交联剂在增加药物靶标选择性方面有很多的优点,利用氧化、还原或光诱导产生的DNA交联作用,在临床治疗中具有重要意义,本文就可诱导核酸交联剂的最新研究进展做了评述。     

卤素对核酸类药物的修饰与影响研究进展

药物分子中引入卤素具有改善药物脂溶性、影响药物分子的电荷分布及影响药物的作用时间等特点,故被广泛应用。 作为抗病毒、抗肿瘤、干扰素诱导和免疫增强的、具有特定碱基序列的核酸药物也不例外。 本文综述了卤素对核酸结构中的嘧啶类、嘌呤类和核糖结构修饰后的核酸类药物生物活性产生的影响,以期为核酸及核酸类似物的药物研发提供新的思路。     

电泳的原理、应用及进展（下）

三、核酸电泳 核酸(包括DNA和RNA)是一类带负电荷的生物大分子,在电场作用下可由负极向正极移动,因此可用电泳的方法进行分离、鉴定和纯化。核酸电泳根据所用凝胶介质的不同可以分两类,即琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。琼脂糖电泳几乎都在水平板上进行,操作简单,快速有效;聚丙烯酰胺电泳多在垂直板中进行,主要用于某些特殊需要,如DNA序列分析电泳、寡核苷酸的分离鉴定。根据外加电场的不同,核酸电泳又分为恒定电场的常规电泳和脉冲场电泳。     

国内首家代谢综合症新药重点实验室成立

不久前,国内首家代谢综合症新药重点实验室落户苏州西交利物浦大学。今后这座实验室将有数百名中外科研人员参与研究工作,成为苏州开展国内外生物医药领域科技合作交流的窗口。据悉,我国目前约10％的成人患有代谢紊乱综合症和糖尿病,另有16％的成人处于糖尿病发病前期,并呈上升趋势。由于发病机理不清楚,世界上尚无根治此类疾病的药物。作为苏州市“十二五”科技应用基础研究项目之一,该重点实验室的建成将针对这一问题进行临床应用研究,为开发诊断试剂提供基础。与此同时,还要进行糖尿病、心血管病生物药的研制,如胰升糖素样肽类似物（GLP）,治疗糖尿病的中药试剂、抗氧化剂、微小核酸和反义核酸等。     

天然多糖作为核酸载体的研究

基因治疗这种堪称革命性的治疗方法,开拓了治疗癌症的新思路,其最关键性问题是实现核酸药物靶向肿瘤组织并精准治疗。核酸药物直接递送存在核酸酶降解代谢、细胞膜上的负电荷排斥现象以及稳定性差等问题,所以核酸药物需要载体协助,成功的载体递送除能使核酸药物在肿瘤区域大量富集外,还要起到药物控释作用,而天然多糖除无毒、生物相容度高、易修饰的特点外,它本身就具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎等多种生物活性。本篇总结了最具代表性的五种多糖的结构特征及在核酸药物递送方面的应用,继而归纳了多糖的常用的纳米级载体形式,为构建天然多糖递送核酸的新型载体并将其应用到免疫抗肿瘤治疗研究中奠定基础。     

低pH毛细管区带电泳法分离寡核苷酸和硫代反义寡核苷酸

在低pH条件下采用毛细管区带电泳法对寡核苷酸(PO-ODNs)及具有药用价值的硫代反义寡核苷酸(PS-ODNs)药物“癌泰得”系列样品(18~20 mers)进行分离,并系统考察优化了缓冲溶液的pH、缓冲溶液的种类及浓度、添加剂的种类及浓度、电压、温度等因素对样品单碱基分离的影响。其中缓冲溶液的pH对分离起决定性的作用,而添加剂尿素的加入显著提高了PS-ODNs样品的分离度。结果表明,采用未涂层弹性石英毛细管(50 μm,总长49.0 cm,有效长度40.7 cm),以50 mmol/L磷酸二氢钠-磷酸(pH 2.24)-7 mol/L尿素为缓冲溶液,压力进样(2 kPa×10 s),负极进样,正极检测,在分离电压20 kV、柱温25 ℃、检测波长260 nm条件下,可实现寡核苷酸及硫代反义寡核苷酸混合样品的单碱基分离。PO-ODNs的18～19 mers及19~20 mers样品的平均分离度分别为4.68,3.20;PS-ODNs的18～19 mers及19~20 mers样品的平均分离度分别为1.23及0.81。该法操作简单,重现性好,可为反义寡核苷酸药物的分析提供借鉴。     

阴离子树脂分离富集光度法测定尾矿中微量钼

研究了717型阴离子交换树脂柱分离-富集钼的条件,建立了分光光度法测定尾矿中微量钼的方法。在pH 7.5的条件下,钼以MoO42-形式被树脂定量吸附后,采用体积比1:1的2 mol/L HNO3和0.5 mol/L NH4NO3混合溶液洗脱,消除了绝大部分共存离子的干扰。结果表明,采用硫氰酸盐光度法,体系的最大吸收波长为460 nm,线性范围为0～120.0μg/L,检出限为1.3μg/L。对实际样品测定结果与ICP-AES法相符,6次测定值的RSD=3.3%,加标回收率在96.2%～105.7%之间。     

甲基膦酸二甲庚酯萃取色谱法分离金、铂的研究

本文研究了以4.0mol/L H_2SO_4-0.50mol/L MgSO_4 为流动相,以硅烷化硅球负载的甲基膦酸二甲庚酯(P350)作固定相。萃取色谱法使微量铂、金与常见贱金属分离,富集在色谱柱上的铂和金分别用0.10mol/L HCl和1.0％Na_2SO_2溶液洗脱进行连续分离与测定。经实际样品的试用考核,结果令人满意。     

离子色谱法分离分析Cr(Ⅲ)齐聚物

 用离子交换分析柱和二极管阵列检测器建立了水溶液中三价铬离子 [Cr(Ⅲ ) ]齐聚物的分析方法 ,研究了检测条件、流动相、离子强度对分析的影响 ,优化了分析条件。以 3mol/LNaClO4(内含 0 0 3mol/LHClO4)为流动相 ,在TSK GelSP 5PW离子交换分析柱 ( 75mm× 7 5mmi d ,10 μm)上对制备样品中的Cr(Ⅲ )齐聚物进行分离 ,以 2 0 0nm波长检测。该方法简便、快速 ,重复性好 ,10min内便可完成对制备样品中 3种Cr(Ⅲ )齐聚物的色谱分离。用该方法分析了各种制备条件下Cr(Ⅲ )齐聚物的含量 ,优化了制备条件。     

新型复合无机离子交换剂磷锑酸——磷钼酸铵的合成与性能研究

本文研究了新型复合无机离子交换剂磷锑酸—磷钼酸铵（ＰＡＡ—ＡＭＰ）的制备和对１３７Ｃｓ＋的交换性能。这种交换剂成型好且稳定，对Ｃｓ＋有良好的选择性和较高的交换容量，与以前的四价金属磷酸盐类复合材料相比，它吸附Ｃｓ＋后可直接用浓度高的ＨＮＯ３洗脱下来，实现了低酸交换吸附，高酸淋洗再生的工艺要求，是一种性能优良的无机离子交换材料，可从放射性废液中分离和回收（１３７）Ｃｓ＋。     

P204萃取色谱法对Co~(2+)的分离研究

对萃取色谱法分离钴与铜、镉、锰、锌、铁等金属离子进行了研究。用含Ｐ２０４萃取剂的萃淋树脂,经过ｐＨ４．０的ＮａＡｃ溶液转型后,只需用ｐＨ２．５的氯乙酸－氯乙酸钠缓冲溶液作为流动相淋洗,就可将钴与其它金属离子分离。方法分离效果好,操作简单方便,是分离分析钴的一种新方法。     

离子色谱法检测食品添加剂焦碳酸二甲酯中的氯离子

建立离子色谱法检测食品添加剂焦碳酸二甲酯（DMDC）中的杂质氯离子的方法。样品用水溶解超声定容后,采用SH-AC-1阴离子交换柱（250mm×4．6mm,5μm）分离,抑制电导法检测。考察了淋洗液种类、浓度对氯离子与干扰离子分离度的影响。最佳色谱条件：以0．005mol／L的四硼酸钠水溶液为淋洗液,流速1．0mL／min。在此条件下,样品中的氯离子可以和其它干扰离子分离,而且分离度达3．0以上,峰形对称。在氯离子浓度为0．1～5．0mg／L的范围内,可获得良好的线性关系,线性相关系数大于0．999;氯离子检出限（S／N=3）达0．007mg／L,加标回收率为97．5％～98．9％。该方法可以用于食品添加剂DMDC中氯离子的测定。     

反相高效液相法测定大鼠肝组织中DNA的碱基含量

 利用反相高效液相法 ,采用SupelcosilLC 18柱 (2 5 0mm× 4 6mmi d ,5 μm) ,以甲醇 0 0 5mol/LKH2 PO4缓冲液 (体积比为 2 0∶80 )为流动相 ,流速 0 8mL/min ,在 2 5 4nm波长处检测 ,对生活在高原 (海拔 2 3km)的习服大鼠肝组织中脱氧核糖核酸 (DNA)的碱基含量进行了检测 ,发现各碱基在DNA中所占的比例是相对稳定的 :腺嘌呤 (A) 2 8 8%、鸟嘌呤 (G) 2 3 3%、胞嘧啶 (C) 17 4 %、胸腺嘧啶 (T) 2 5 3% ,并利用内标法对DNA甲基化水平进行了测定。     

CL-7402萃淋树脂分离富集铅的研究及其应用

通过静态和动态实验,研究了CL-7402萃淋树脂吸附铅的性能和减压微色谱柱分离富集铅的最佳条件。实验表明,此萃淋树脂吸附快,吸附容量大。在减压条件下,以1mol/LHBr为上柱介质,2mol/LHNO3为洗脱液,可使铅与铜、铁等金属离子快速分离。采用三溴偶氮胂光度法测定样品中的铅。     

高效液相色谱法测定奶粉和液态奶中的三聚氰胺

建立了奶粉和液态奶中三聚氰胺的高效液相色谱（HPLC）检测方法。经阳离子交换固相萃取柱净化后的样品采用HPLC测定。优化的色谱条件：C18柱（4.6 mm ×200 mm,5 μm）,流动相为乙腈-0.01 mol/L庚烷磺酸钠（pH 3.3）（体积比为10∶90）,流速为1.0 mL/min,检测波长为236 nm,柱温为40 ℃,进样量为20 μL。方法的线性范围为1~500 mg/L,检出限为0.2 mg/kg （S/N=3）,定量限为1 mg/kg （S/N=15）,回收率为81.4%~83.7%,相对标准偏差为3.3%~8.5%（n=6）。