等度反相高效液相色谱法测定熊胆中磷脂类化合物

 摘要：建立了一种分离、测定磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酸（PA）、心磷脂（CL）和磷脂酰甘油（PG）的等度RP-HPLC法。色谱条件为：在P-EC18柱上,用V（甲醇）：V（乙腈）：V（水）＝79:8:13的溶液作流动相,以2.0mL/min的流速进行等度洗脱,紫外检测波长205nm,谱带宽5nm。以熊胆为样品,经预处理后用所建立的方法进行分析,结果表明：6个熊胆样品中PC的质量比差别较大;PA的质量比除2号样品较低外,其余相近;PG除2号样品外都能检出,其中6号样品中PG的质量比稍大。PC的平均回收率为89     

HPLC与MALDI-TOF MS联用技术分析蛋黄中的磷脂

蛋黄中含有大量磷脂,其中磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)最为丰富.本研究采用高效液相色谱法(HPLC)与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)联用技术分析了蛋黄中磷脂粗提物.将从蛋黄中提取的多种磷脂通过HPLC预先分离,收集各组分后分别进行MAIDI-TOF MS分析得到比较清晰的质谱图.通过质谱图解析确定了蛋黄中磷脂酰胆碱、神经鞘磷脂(SM)的脂肪酸组成.     

高效液相色谱法测定大鼠肝过氧化物酶体膜磷脂

 用 HPL C测定了过氧化物酶体膜磷脂的含量。用 Folch法提取膜脂质 ,以 μ-Porasil Si60为固定相 ,以乙腈-甲醇 -磷酸为流动相 ,采用梯度洗脱 ,紫外检测波长 2 0 5 nm。标准回收率 :心磷脂 (C)为 (1 0 3 .97± 1 2 .5 7) % ,磷脂酰肌醇 (PI)为 (88.2 3± 5 .42 ) % ,磷脂酰丝氨酸 (PS)为 (90 .3 3± 6.84) % ,磷脂酰乙醇胺 (PE)为 (84.41±1 0 .2 2 ) % ,磷脂酰胆碱 (PC)为 (89.78± 8.70 ) % ,鞘磷脂 (SM)为 (84.0 4± 1 2 .0 6) %。最小检出限分别为 :C1 2ng,PI 8ng,PS 2 3 ng,PE 4ng,PC 2 3 ng,SM 7ng。线性关系与回收率较好 ,结果令人满意。     

高效液相色谱-蒸发光散射检测法分析何首乌中磷脂类化合物

建立了高效液相色谱测定何首乌中磷脂类化合物的新方法.采用Nuclesil100-5色谱柱(250×4.6 mm i.d.5 μm),以甲醇为流动相,流速0.8 mL/min,等度洗脱.蒸发光散射检测器的气体流速1.8 L/min,漂移管温度66℃,进样量15μL.四种磷脂类化合物的线性范围分别为:磷脂酰甘油(PG):0.0388～0.388 mg/mL(r2=0.9991),磷脂酰乙醇胺(PE):0.0500～0.250 mg/mL(r2=0.9996),磷脂酰胆碱(PC):0.0103～0.165 mg/mL(r2=0.9995),溶血磷脂酰胆碱(LPC):0.0103～0.343 mg/mL(r20.9995).该方法应用于首鸟中磷脂类化合物的分析,取得了较好的结果.     

高效液相色谱-蒸发光散射法测定甘油磷脂酰胆碱

建立了高效液相色谱-蒸发光散射法(HPLC-ELSD)测定甘油磷脂酰胆碱(L-α-GPC)的方法。得到最佳色谱条件:色谱柱为Tigerkin Diol柱(250×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(体积比90∶10),氮气流量为1.50L/min,漂移管温度为65℃。用外标法对L-α-GPC和磷脂酰胆碱(PC)进行定量分析,线性范围分别为0.25~3.00g/L和0.50~5.00g/L,相关系数分别为0.9993和0.9987;平均回收率分别为95.87%和95.72%;相对标准偏差分别为1.75%和1.93%。该方法能够简便快速的将L-α-GPC与其他磷脂进行分离。     

气相色谱法测定多烯磷脂酰胆碱注射液中的苯甲醇

建立了多烯磷脂酰胆碱注射液中苯甲醇含量的测定方法。 采用毛细管气相色谱法,以环己醇作为内标物,使用AT.SE-54毛细管色谱柱,程序升温,N2为载气,不分流进样模式,氢火焰离子化检测器（FID）检测。 结果表明苯甲醇在0.01~20.0 g/L范围内峰面积与内标峰面积的比值与其质量浓度呈良好的线性关系（r=0.9997）,平均加样回收率为99.7%,相对标准偏差（RSD）为1.07%。 该方法简便,准确,重现性好,精密度高,适用于多烯磷脂酰胆碱注射液中苯甲醇含量的测定,为同类药物的质量控制提供了实验依据。     

高效液相色谱法测定烧烫灵软膏中磺胺醋酰钠和磺胺含量

建立了用HPLC测定烧烫灵软膏中磺胺醋酰钠和磺胺含量的方法。在SpherisorbC18柱上,以V（甲醇）：V（体积分数为0．25％的醋酸溶液）=7：93为流动相,于257nm波长处检测。平均回收率：砍胶醋酰钠为98．9％（n=5）,RSD=0．64％;磺胺为99．3％（n=5）,RSD=1．58％。方法简便、快速、准确、重现性好。     

超声提取正相高效液相色谱法测定大豆及大豆油中的磷酸甘油酯

建立了超声提取-固相萃取纯化/正相高效液相色谱测定大豆及大豆油中磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)的方法。考察了提取溶剂、超声功率、超声时间、提取温度及净化方式的影响,并研究了不同色谱固定相对磷酸甘油酯分离效果的影响。优化的实验条件为:以氯仿-甲醇(2∶1,体积比)为提取溶剂,1 500 W功率超声提取30 min;氨基固相萃取柱为纯化小柱;正己烷-异丙醇-1%HAc(8∶8∶1,体积比)为流动相。在该条件下,PC、PE、PI的线性范围分别为0.08～8.00、0.15～15.00、0.30～20.00 g.L-1,定量下限分别为0.021、0.050、0.060 g.L-1,检出限在8～23 mg.L-1之间,其在大豆和大豆油中的回收率为85%～108%。日内与日间精密度分别不大于4.7%和8.6%。     

肝源性磷脂酰胆碱的分离纯化及其对肝癌细胞抑制作用的评价

采用氧化铝柱色谱法以95%乙醇作为洗脱剂分离纯化了肝源性磷脂酰胆碱(PC)，并采用GF254硅胶板薄层色谱法以氯仿-甲醇-水（65∶25∶4，体积比)为展开剂测定了PC的纯度。结果表明以95%乙醇洗脱氧化铝色谱柱中的磷脂时,PC可完全与磷脂酰乙醇胺分离,其纯度和得率均高于80%。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定了不同浓度的PC对大鼠肝癌CBRH-7919 胞增殖的影响,并与人白血病K562细胞做比较,发现肝源性PC对肝癌细胞的生长具有明显的抑制作用,且存在时间-剂量依赖关系。     

高效液相色谱法分析大豆中磷脂酰胆碱的分子种

用高效液相色谱法（HPLC）在正相半制备硅胶柱上将大豆磷脂酰胆碱与其它组分分离，从柱后收集磷脂酰胆碱（PC），然后在反相C18柱上分析其分子种组成，蒸发光散射检测器检测。在25min内将大豆磷脂酰胆碱分离成11个分子种组分，使用易挥发溶剂，可获得各种分子种的纯物质，供进一步分析。分子种根据HPLC峰的脂肪酸组成分析而确定。     

Action of phosphatidylinositol-specific phospholipase C from Bacillus thuringiensis is significantly influenced by coexisting lipids in substrate-detergent micelles.

The effects of phosphatidylcholine (PC), phosphatidylethanolamine (PE), sphingomyelin (SM), and cholesterol on the activity of phosphatidylinositol-specific phospholipase C (PI-PLC) from Bacillus thuringiensis were studied in detail in phosphatidylinositol (PI)/detergent mixed micelles. By addition of PC, the enzymatic hydrolysis of PI was significantly stimulated in PI/Triton X-100 as well as PI/sodium deoxycholate (SDC) mixed micelles. SM stimulated enzyme activity toward PI/Triton X-100 micelles at a lower molar ratio of SM to PI, but was rather inhibitory at a ratio higher than 2.0. The enzyme activity became significantly lower with an increase of PE or cholesterol in PI/Triton X-100 micelles. Actually, both PE and cholesterol were intensively inhibitory when added at a higher molar ratio to PI in Triton X-100-containing micelles. In the system of PI/SDC mixed micelles, not only PC but also SM, PE and cholesterol enhanced the enzymatic hydrolysis of PI. The difference between PI/Triton X-100 and PI/SDC micelles regarding the effects of these lipids on PI-PLC action, must be dependent on the physical state of micelles formed by these detergents and lipids.     

高效液相色谱法测定地榆中金丝桃甙的含量

采用高效液相色谱法测定了地榆中金丝桃甙的含量。色谱柱为Ｓｈｉｍ－ｐａｃｋＣＬＣ－ＯＤＳ柱,以甲醇－０．０２５ｍｏｌ／Ｌ磷酸（５０５０）为流动相,检测波长３７０ｎｍ,测定组分与其它组分的色谱峰达到基线分离。加样回收率平均值为９８．７％,ＲＳＤ为１．９％。为控制中药地榆的内在质量提供了新的测定指标和可靠的方法。     

用高效液相色谱法测定热应激时大鼠肺及肝组织中细胞膜磷脂的变化

 应用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定了正常大鼠肺及肝组织中细胞膜磷脂的含量及热应激时膜磷脂的含量变化。流动相为甲醇∶乙腈∶８５％磷酸（３∶１００∶１，Ｖ／Ｖ／Ｖ），色谱柱为μ－Ｐｏｒａｓｉｌ柱（３．９ｍｍｉ．ｄ．×３００ｍｍ）。通过测定膜磷脂的变化，可以为阐明机体的发病机理提供可靠的数据。     

用反相高效液相色谱法分析测定Cd,Hg,Pb和Cu

用直接进样（Ｃ１８柱）反相高效液相色谱法研究了Ｍｅｎ＋－Ｄｚ（二硫腙）体系的色谱行为,建立了同时测定Ｃｄ,Ｈｇ,Ｐｂ和Ｃｕ的分析方法。方法的线性范围为０．０１～２．０ｍｇ／Ｌ,最低检出质量浓度为２．４～５．０μｇ／Ｌ,相对标准偏差为１．８％～９．７％,回收率为９４％～１０３％（Ｈｇ除外）。直接进样反相高效液相色谱法比萃取进样正相液相色谱法更快速,更简便,更容易操作,已用于人发测定。     

HPLC及LC-MS法测定全血中青霉素

青霉素(penicilinG)属于青霉素类杀菌剂药物,极易溶于水,在甲醇、乙醇中溶解,在脂溶性溶剂中不溶解。易吸潮,遇酸、碱或氧化剂等迅速失效,水溶液也易分解。人体肌注后15～30min血浓度达到高峰值,有60％-90％原形物从肾脏中排出。青霉素毒性很小,人类即使使用大剂量也难以中毒,但是青霉素肌内注射、输液常引起过敏,并导致死亡。据1952～1966年的不完全统计,国内文献中关于发生青霉素过敏性休克的报告,至少400余例,其中50余例死亡。近2、3年间国内文献中仍有青霉素引起过敏反应的大量报告,尤其游医郎中的不合理用药,致死案例时有发生。这就要求我们对死者体内是否有青霉素进行分析测定。     

Marine Algae Membrane Phospholipids Study by High Resolution 31P NMR

Abstract

Membrane phospholipids were extracted using a modified Folch, Lees and Sloane-Stanley method, from 21 different algae species covering three major divisions of the protista kingdom. In the modified method after chloroform/methanol (2:1 v/v) extraction and filtration, the solution was backwashed with K-EDTA, 0.6 M, instead of KCl, 1 M. Because algae samples are eavily loaded with cations that broaden NMR signals, the K-EDTA wash results in more highly resolved NMR signals. Following rotary evaporation, the crude algae lipid extract was dissolved in the chloroform-benzene(d6)/methanol-CsEDTA (2:l ml/ml) reagent and analyzed using a 500 MHz NMR spectrophotometer. Phospholipid chemical shifts were determined relative to standard phosphoric acid (85%), following the UIPAC convention. The internal reference used was phosphatidylcholine (PC, -0.84 δ) Division chlorophyta (8 sps.) yields phospholipid signals for phosphatidylglycerol (PG, 0.50), phosphatidic acid (PA, 0.25), cardiolipin (CL, 0.18), phosphatidylethanolamine (PE, 0.03), sphyngomyelin (SPH, -0.09), phosphatidylinositol (PI, -0.37) and PC; the lysoderivatives for lyso PG (LPG, 1.09) and lyso PC (LPC, -0.28), and one uncharacterized signal at 0.32. Phosphatidylserine (PS -0.05) and plasmalogens were not detected. Division rhodophyta (10 sps.) shows signal from PG, PA, CL, PE, SPH, PI, and PC; the lysoderivatives of lyso PA (LPA, 0.83), lyso PE (LPE, 0.43) and LPC; the plasmalogens PC plasmalogen (PC plas, -0.77), LPC plas (-0.20), and l-0-alkyl-2-acetyl-sn-glyceryl-3-phosphorylcholine (PAF-acether, -0.70); and an uncharacterized signal at -40 δ chemical shift. PS was not detected. Division Phaeophytas (3 sps.) showed signals for PG, PA, CL, PE, SPH, PI, and PC and lysoderivatives of LPG, LPA, LPE plas (0.53), LPE, LPC plas, and LPC. PS, PAF-acether and the uncharacterized signals at 0.32 δ and -0.40 δ were not detected.     

高效液相色谱法测定防霉剂富马酸二甲酯

报道了用高效液相色谱法测定新型防霉剂富马酸二甲酯（ＤＭＦ）。固定相ＭｉｃｒｏｐａｋＭＧＨ,５μ,ｃａｐ４．００ｍｍ×３００．０ｍｍ,流动相：乙醇－水（９０∶１０,Ｖ／Ｖ）,紫外检测器,检测波长２１６ｎｍ。在进样量为０．０３６～２．９６０μｇ范围内,进样量与峰面积呈线性关系,回归方程Ｙ＝３．２１５×１０－６Ｘ－０．０４７９７,相关系数ｒ＝０．９９９６,标准偏差３．２×１０－４。     

薄层扫描法测定蔗糖脂肪酸酯中的各组成酯

 建立了蔗糖脂肪酸酯中一酯～三酯的薄层分离定性及薄层扫描定量方法。以氯仿 甲醇 醋酸 水 (体积比为 80∶1 0∶8∶1 )为展开剂 ,双波长反射法锯齿扫描 ,测定波长为 530nm ,参比波长为 70 0nm ,线性范围为 4μg～60 μg ,相关系数为0 9940～ 0 9980 ,平均回收率为 96 45%～ 98 73% (RSD为 2 8%～ 3 3% ,n =3)。方法可靠 ,数据准确 ,操作简便易行 ,线性范围宽。     

高效液相色谱法测定杜仲叶中的绿原酸

 采用高效液相色谱法测定杜仲叶中绿原酸的含量。所用色谱柱为Shim-packCLC-ODS柱,以巯嘌呤为内标,以甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾缓冲液(体积比为25∶75;pH3.9)为流动相,UV检测波长为328nm。在上述色谱条件下,当绿原酸质量浓度为25～300mg/L时,以绿原酸对照品溶液与内标液的峰面积比为纵坐标(Y),绿原酸的质量浓度为横坐标(X),二者呈良好的线性关系,线性方程为Y=8.0368X+1.275×10-3,r=0.9999;平均回收率为99.89%,RSD=1.45%(n=6)。