荧光法研究苯胺蓝与人血清白蛋白的相互作用

用荧光光谱、同步荧光光谱研究了苯胺蓝和人血清白蛋白的相互作用。研究表明,苯胺蓝对人血清白蛋白的荧光发射有明显的猝灭作用,根据不同温度下的猝灭数据,由Stern-Volmer方程推断苯胺蓝对人血清白蛋白的猝灭属于静态猝灭。计算得到了结合常数KA、结合位点数n,同时计算得到的热力学常数表明苯胺蓝和人血清白蛋白作用力类型为静电作用和疏水作用结合。同时用同步荧光光谱探讨了苯胺蓝对人血清白蛋白构象的影响。     

洛美沙星与人血清白蛋白的相互作用机理

利用荧光及紫外光谱法研究了水溶液中洛美沙星(LMX)与人血清白蛋白(HSA)的相互作用机理. 结果表明洛美沙星对人血清白蛋白的荧光有较强的猝灭作用, 其猝灭类型主要为静态猝灭. 在不同温度下求得了洛美沙星与人血清白蛋白的结合常数K, 发现随反应温度上升K值下降. 由热力学参数确定了洛美沙星与人血清白蛋白的结合作用主要为色散力. 用同步荧光技术考察了洛美沙星对人血清白蛋白构象的影响, 又根据Fōrster理论, 测得了洛美沙星与人血清白蛋白之间的能量转移效率, 相互结合距离. 进一步证明了该反应是单一静态猝灭过程, 阐述了其猝灭机理是通过能量转移产生的.     

阿替洛尔的电化学行为及与牛血清白蛋白的相互作用

建立了石墨烯修饰玻碳电极测定阿替洛尔的电化学分析新方法。采用电化学方法结合紫外、荧光光谱分析,研究了阿替洛尔(ATN)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。实验发现,在pH 10.0的Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液中,ATN在0.78 V处有一灵敏的氧化峰,氧化峰电流Ip与ATN的浓度在4.8～30.0μmol/L范围内呈良好的线性关系(r=0.9926,n=11),方法检出限为3μmol/L。当BSA加入ATN溶液后,ATN氧化峰电流降低,氧化峰电流的降低值ΔIp与BSA的浓度在2.6～31.0μmol/L范围内呈良好线性关系。紫外光谱表明ATN的加入使BSA的吸收峰发生蓝移。荧光光谱表明,ATN对BSA的内源荧光有显著的猝灭作用,猝灭机制为静态猝灭。     

水杨酸与人血清白蛋白的相互作用研究

采用荧光光谱法,紫外光谱法及圆二色谱法研究了具抗凝血作用的水杨酸与人血清白蛋白(HSA)的相互作用.结果表明,水杨酸对人血清白蛋白荧光产生猝灭现象,猝灭方式为静态猝灭.通过同步荧光法和圆二色谱法发现水杨酸的存在明显改变人血清白蛋白的构象.     

用光谱法研究奥硝唑与人血清白蛋白的相互作用

采用荧光光谱法和紫外可见吸收光谱法研究了奥硝唑与人血清白蛋白之间的相互作用;求得了二者在不同温度下的结合常数KA和结合位点数n,以及对应温度下结合反应的热力学参数,同时采用同步荧光分析技术探讨了蛋白质与药物结合时构象的变化.结果表明,在生理条件下奥硝唑对人血清白蛋白的荧光猝灭主要为静态猝灭;奥硝唑与人血清白蛋白主要靠静电作用力结合.     

具抗凝血作用的铁、铜三元配合物与人血清白蛋白的相互作用

采用光度法研究了具抗凝血作用的过渡金属铁和铜的华法灵、水杨酸三元配合物与人血清白蛋白的相互作用, 观察到铁、铜三元配合物使人血清白蛋白荧光产生猝灭现象, 猝灭方式为静态猝灭, 并计算了配合物与人血清白蛋白的结合常数和结合位点数. 根据不同温度下的热力学函数, 确定了配合物与人血清白蛋白的作用力类型. 并且发现三元配合物的存在明显改变人血清白蛋白的构象. 并讨论了配合物使人血清白蛋白构象发生变化的可能原因.     

布南色林与人血清白蛋白相互作用的光谱学研究

采用荧光光谱研究了模拟生理务件下抗精神病药布南色林与人血清白蛋白的相互作用,结果表明,布南色林对人血清白蛋白的内源性荧光具有猝灭作用且猝灭方式为静态猝灭.布南色林与人血清白蛋白形成了1∶1的复合物,结合常数K=1.80×104L/mol,且金属离子对结合反应具有较显著的影响.根据不同温度下的热力学函数确定了布南色林与人...     

光谱及电化学方法研究头孢哌酮钠和盐酸环丙沙星与人血清白蛋白的拮抗作用

在模拟生理条件下,用荧光光谱、紫外吸收光谱并结合电化学方法,研究了头孢哌酮钠(CPZ)和盐酸环丙沙星(CPFX)单独存在与同时存在时与人血清白蛋白(HSA)的相互作用。结果表明:药物与HSA的作用力主要为静电力,HSA的荧光猝灭为静态猝灭;药物与HSA结合位点数约为1;CPZ与CPFX间存在拮抗作用;拮抗作用使药物与HSA间的结合距离r值降低。电化学方法研究表明药物与蛋白相互作用形成了非电活性的的超分子化合物,使得溶液中游离的药物浓度降低。     

羧甲基壳聚糖-Cu(Ⅱ)配合物与牛血清白蛋白作用机理研究

用光谱学和电化学方法,研究了含不同Cu2+含量的羧甲基壳聚糖铜配合物(CMC-Cu)与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互结合机理。通过荧光法确定了CMC-Cu对血清白蛋白的荧光猝灭机制为静态猝灭,计算出在室温下该结合反应的结合常数和结合位点数与配合物中Cu2+含量有关。紫外光谱显示,CMC-Cu的紫外光谱在加入BSA后表现减色效应和明显的蓝移,而BSA的紫外光谱在加入CMC-Cu后表现减色效应和明显的红移。电化学研究发现:CMC-Cu的氧化还原电流随着BSA的加入而明显降低,氧化还原峰电位差增大,表明BSA与血清白蛋白发生反应,生成比较稳定的复合物。以上结论证明CMC-Cu在体内能够被BSA存储和转运。     

喹诺酮类药物对人血清白蛋白的荧光猝灭研究

观察了喹诺酮药物萘啶酸及氟哌酸对人血清白蛋白荧光的猝灭现象。根据药物对天然白蛋白及变性白蛋白荧光猝灭的不同表现,研究了萘啶酸和氟哌酸对人血清白蛋白荧光的猝灭机理,并探讨了药物与血清白蛋白的结合情况。     

甲基橙皮苷和人血清白蛋白相互作用的光谱研究

利用荧光光谱法和红外光谱法研究了甲基橙皮苷(MH)与人血清白蛋白(HSA)的相互作用.结果表明,MH对HSA的荧光有较强的猝灭作用.在296、303、310K温度下,MH与HSA相互作用的结合常数分别为1.77×104,2.65×104,3.53×104 L·mol-1.热力学分析结果表明,MH与HSA之间的结合过程是吸热的并且是自发的;作用力以疏水作用为主,并伴随氢键作用.     

噻螨酮与人血清白蛋白的作用机制

用分子对接方法及紫外-可见吸收光谱、同步荧光光谱、三维荧光光谱等实验手段研究了噻螨酮(HEX)与人血清白蛋白(HSA)的相互作用及对HSA构象的影响.预测结果表明,HEX能与HSA发生相互作用,且作用位点site II比site I的打分小约4.5.实验结果表明,HEX猝灭HSA的内源荧光且作用机制为静态猝灭;HEX使HSA周围的微环境发生变化,导致蛋白质的肽链结构改变;298和291 K时HEX与HSA相互作用的结合常数(KA)和结合位点数分别为7.35×103 mol/L、0.82和1.02×104 mol/L、0.86,证实HEX仅在site II存在作用位点;HEX与Trp214的结合距离为3.01 nm,作用力主要为氢键、范德华力和疏水作用力.这些研究所获得的多种信息有助于在分子水平上理解农药对人体造成的毒性及可能的生物累积性.     

芘与人血清白蛋白和牛血清白蛋白结合位点微环境极性的差异

利用芘(Pyr)的微环境极性探针性质, 采用稳态荧光光谱、 荧光共振能量转移技术结合分子对接法, 对比分析了Pyr分别与人血清白蛋白(HSA)和牛血清白蛋白(BSA)作用机制的差异. 结果表明, HSA和BSA中Pyr的I₁/I₃平均值分别为1.36和0.92; Pyr与HSA和BSA的结合常数分别为1.86×10⁷和1.71×10⁵ L/mol; Pyr与HSA和BSA中色氨酸残基表观距离分别为2.37和2.34 nm. Pyr在HSA和BSA中不同的结合位点位于ⅠB子域和ⅠA子域, 其结合位点周围氨基酸残基的极性是影响Pyr I₁/I₃值的主要原因之一. 实验证实Pyr与HSA和BSA结合作用位点处的微环境极性存在差异.     

二茂铁基双酰肼化合物的制备及电化学性质

以二茂铁衍生物为原料合成了3个二茂铁基双酰肼类化合物(1,2,3);利用元素分析、红外光谱、核磁共振谱等分析了标题化合物的组成和结构,采用分光光度计测定了其紫外吸收光谱,利用循环伏安法测定了其电化学性质;并利用量子化学计算得到了1的稳定结构.结果表明,化合物1因酰基活性基团被氧化而在高电位区出现一个不可逆氧化峰;与此同时,其在低电位区出现一个不可逆的还原峰.     

秋水仙碱与牛血清白蛋白相互作用的电化学研究

以电化学方法对秋水仙碱与牛血清白蛋白的相互作用进行了研究。在0.3 mol/L H2SO4底液中,秋水仙碱在玻碳电极上产生一不可逆的氧化峰,峰电位为1.18 V(vs.SCE),加入表面活性剂四丁基氯化铵后,秋水仙碱的峰信号得到明显提高。在上述条件下,加入BSA后秋水仙碱的氧化峰电位正移,峰电流下降,峰电流下降值与BSA加入的浓度在1.5×10-7～2×10-6mol/L(r=0.9978)范围内有良好的线性关系,检出限达4.0×10-8mol/L。进一步探讨了秋水仙碱与BSA的结合数和结合常数,得到结合数为1,结合常数为2.40×105L/mol。     

Native and denatured forms of proteins can be discriminated at edge plane carbon electrodes

In an attempt to develop a label-free electrochemical method for detection of changes in protein structures based on oxidizability of tyrosine and tryptophan residues we tested different types of carbon electrodes. We found that using edge plane pyrolytic graphite electrode (EPGE) we can discriminate between native and denatured forms of human serum albumin (HSA) and of other proteins, such as bovine and chicken serum albumin, aldolase and concanavalin. Treatment of natively unfolded α-synuclein with 8 M urea resulted only in a small change in the tyrosine oxidation peak, in a good agreement with absence of highly ordered structure in this protein. Using square wave voltammetry with EPGE we were able to follow the course of HSA denaturation at different urea concentrations. The electrochemical denaturation curve agreed reasonably well with that based on intrinsic fluorescence of tyrosine and tryptophan. It can be expected that the electrochemical method will be applicable to a large number of proteins and may become useful in biomedicine and proteomics.     

分子内电荷转移荧光探针1-酮-2-（对二甲氨基苯亚甲基）四氢萘与人血清白蛋白作用

采用荧光及紫外光谱研究了1-酮-2-（对二甲氨基苯亚甲基）-四氢萘（KDTN）与人血清白蛋白（HSA）相互作用的光谱特性。 结果表明,静态猝灭和非辐射能量转移是导致KDTN对HSA荧光猝灭的主要原因。 测得17、27和37 ℃ 3个温度下的结合常数K_A分别为1.633×10⁸、0.7998×10⁸和0.347×10⁸ L/mol,结合位点数n分别为1.7、1.6和1.7;据Forster偶极 偶极非辐射能量转移理论,计算得到KDTN与HSA在3个温度下的作用距离r分别为2.64、2.59和2.64 nm;能量转移效率E分别为0.5100、0.4797和0.4210。 热力学参数表明,二者主要以范德华力或氢键结合;用同步荧光技术研究了KDTN对HSA构象的影响,结果表明,KDTN的加入对HSA构象影响不大。     

Characterization of subdomain IIA binding site of human serum albumin in its native, unfolded, and refolded states using small molecular probes

Subdomain IIA binding site of human serum albumin (HSA) was characterized by examining the change in HSA fluorescence in the native, unfolded, and refolded states. The study was carried out in the absence and presence of small molecular probes using steady-state and time-resolved fluorescence measurements. 2-Pyridone, 3-pyridone, and 4-pyridone bear similar molecular structures to those found in many drugs and are used here as probes. They are found to specifically bind in subdomain IIA and cause a reduction in the fluorescence intensity and lifetime of the Trp-214 residue in native HSA which is located in the same subdomain. The efficiency of energy transfer from Trp-214 fluorescence to the probes was found to depend on the degree of the spectral overlap between the donor's fluorescence and the acceptor's absorption. After probe binding in subdomain IIA, the distance between the donor and acceptor was calculated using Forster theory. The calculated quenching rate constants and binding constants were also shown to depend on the degree of spectral overlap. The results point to a static quenching mechanism operating in the complexes. Denaturation of HSA in the presence of guanidine hydrochloride (GdnHCl) starts at [GdnHCl] > 1.0 M and is complete at [GdnHCl] > or = 6.0 M. Upon unfolding, two fluorescence peaks were observed. One peak was assigned to the fluorescence of Trp-214 in a polar environment, and the other peak was assigned to tyrosine fluorescence. A reduction of the fluorescence intensity of the two peaks upon binding of the probes to the denatured HSA indicates that Tyr-263 in subdomain IIA is one of the tyrosine residues responsible for the second fluorescence peak. The results were confirmed by measuring the fluorescence spectra and lifetimes of denatured HSA at different excitation wavelengths, and of L-tryptophan and L-tyrosine free in buffer. The measured lifetimes of denatured HSA are typical of tryptophan in a polar environment and are slightly reduced upon probe binding. Dilution of the denatured HSA by buffer results in a partial refolding of subdomain IIA. This partial refolding is attributed to some swelling of the binding site caused by water. The swelling prevents a full recovery from the denatured state.     

季铵盐联吡啶-钌(Ⅱ)配合物的合成及其与小牛胸腺DNA的相互作用

利用紫外-可见吸收光谱、荧光光谱、圆二色谱等光谱手段,以及黏度测定等流体力学方法在三羟甲基氨基甲烷(tris)缓冲溶液和磷酸缓冲溶液中研究了含季铵盐联吡啶配体的钌(Ⅱ)配合物[Ru(L)(phen)2](PF6)4(L=5,5′-二(三甲铵基甲基)-2,2′-联吡啶离子,phen=邻菲咯啉)与小牛胸腺DNA(CT-DNA)的相互作用.结果表明,合成的配合物与CT-DNA之间存在一定的亲和作用,拟合得到的结合常数可达105;与此同时,该配合物能够稳定CT-DNA的结构,并对CT-DNA有较好的立体选择性(右旋异构体优先与DNA结合).