rCHO细胞无血清适应及悬浮培养

考察了血清对rCHO(C28)细胞生长与产物(HBsAg)表达的影响,发现φ血清<0.01时细胞出现明显的代谢转换;考察了微量元素、氢化可的松、混合脂类与短多肽混合物(TL混合物)对细胞的影响,建立了适于rCHO(C28株)生长的无血清培养基MT-SFM;在将细胞从有血清转到无血清状态时,阶段性降血清比直接降血清更有利于rCHO(C28)细胞的无血清适应;当细胞适应了MT-SFM无血清培养基后,批培养中细胞的最大平均比生长速率可达0.65d-1,产物HBsAg的滴度在32～64之间。     

果蝇胚胎细胞无血清培养

本文报告了以聚乙二醇(PEG)为添加物而进行的果蝇胚胎细胞无血清培养的研究,结果表明:PEG具有促进脂肪体细胞发育和细胞增殖的作用,并简单讨论了PEG的这种作用机理.     

杂交瘤细胞的无血清低蛋白培养

实现了杂交瘤细胞的体外无血清低蛋白培养。考察了血清浓度、基础培养基和接种密度对细胞生长的影响。在含5%血清培养基、1%血清培养基和无血清低蛋白培养基中适应生长的细胞,μ分别为0.68、0.45、0.44d-1,qGlc分别为13.4×10-9、13.1×10-9、19.2×10-9mmol/(cell·分别为39.4×10-9、44.1×10-9、37.7×10-9mg/(cell·d),YMAb/Xv分别为52.6×10-9、d),qMAb57.8×10-9、54.4×10-9mg/cell,YLac/Glc分别为2.0、1.95、2.0mmol/mmol。无血清培养中葡萄糖代谢途径不变,参与细胞维持代谢的葡萄糖比例增大。血清浓度降低,延迟期变长,最大活细胞密度下降。基础培养基影响细胞的最大活细胞密度,不影响生长速率。无血清培养基中细胞的接种密度选择在0.2×106～0.3×106cells/mL。     

昆虫细胞低血清和无血清培养基的研究

昆虫细胞低血清和无血清培养基均为ＴＣ－１００和ＴＣ－１９９－ＭＫ培养基混合液为基础液，补加微量元素，适量的维生素、甘油、肌苷等成份，研究结果表明：两种培养基均能支持小菜蛾细胞的生长和苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒在其中复制。     

表达vWF蛋白的重组BHK细胞的无血清培养

采用HADAMARD统计设计方法建立了适于重组BHK细胞培养和vWF蛋白表达的无血清培养基SFMA。用SFMA进行重组BHK细胞的批培养,细胞生长明显优于有血清培养(DMEM FBS(φPRS=0．05))和无血清培养基SFM-Ⅱ的培养,最大细胞密度可分别提高16．7％和40%。同时,在培养的96h,蛋白的表达水平比有血清培养提高了18．7%,SFMA维持培养48h的vWF蛋白的表达水平比SFM-Ⅱ提高了50％。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响 I.乳酸的作用

研究了无血清批培养中乳酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响，当乳酸浓度低于5．3mmol/L时，乳酸对细胞生长和代谢无明显影响，当乳酸浓度在10mmol/L-25mmol/L时，对杂交瘤细胞的生长代谢有弱抑制，当乳酸浓度高于34mmol/L时，对细胞生长代谢有较明显的抑制。     

人小肠癌腹水转移细胞的无血清建系培养

人小肠癌腹水转移细胞系ＨＩＣ的无血清培养亚系经过３ａ的传代培养建立成功，命名为ＨＩＣＳＦ。该细胞仍保留其母系ＨＩＣ一些属性：亚三倍体组型，众数５３条；增殖活跃，倍增时间１６ｈ；异体动物移植致瘤，具有活跃的血管生成行为和较高的转移行为。由于培养条件的变化，该细胞也获得了一些新的特征，ＨＩＣＳＦ细胞属弱贴附细胞，形态多变。贴附细胞主要靠树枝状突起贴附于培养介质，突起内微管、微丝相对较多，细胞骨架总体上呈无序排列。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明ＨＩＣＳＦ细胞分泌多种蛋白质进入培养上清中，培养上清的层析分离表明，至少存在分子质量分别为９０，７０，４５和１０ｋｕ４种促生长活性因子，同时也存在分子质量分别为６０和３０ｋｕ２种生长抑制活性因子。这些生长因子共同调控着ＨＩＣＳＦ细胞的自主生长。     

昆虫细胞(Sf 9)无血清培养的研究

昆虫细胞培养是近年来迅速发展起来的动物细胞培养工程中的一个新领域.本文简述了通过对Sf9昆虫细胞有血清培养和无血清培养进行比较,对Sf9昆虫细胞无血清培养的生长条件进行了探索性研究,并取得了成功.通过昆虫细胞的体外培养大量表达病毒携带的外源基因,从而为生产许多具有重要生物学价值的重组蛋白提供了相当有吸引力的新途径.     

无血清细胞培养基添加蛋白—白蛋白和转铁蛋白的制备和纯化

建立了一个从成年牛血清同时制备纯化白蛋白和转铁蛋白的方法。从无血清培养基添加蛋白的角度作了纯度检测，内毒素和脂肪酸含量测定，并通过了无血清细胞培养检测。结果表明，用此方法生产的白蛋白和转铁蛋白可以用作无血清培养基添加蛋白。     

哺乳动物细胞的遗传筛选(Ⅰ)

遗传筛选在模式生物系统(如酵母、线虫、果蝇和拟南芥)中一直是一种非常有效的研究手段。由于技术上的难度,遗传筛选在哺乳动物系统中的运用并不广泛。本文主要综述最近在哺乳动物细胞遗传筛选方法的进展,尤其是新型诱变手段在基因改良细胞系方面的应用。     

哺乳动物细胞的遗传筛选(Ⅰ)

遗传筛选在模式生物系统（如酵母、线虫、呆蝇和拟南芥）中一直是一种非常有效的研究手段。由于技术上的难度，遗传筛选在哺乳动物系统中的运用并不广泛。本文主要综述最近在哺乳动物细胞遗传筛选方法的进展，尤其是新型诱变手段在基因改良细胞系方面的应用。     

哺乳动物细胞高效表达系统研究进展

哺乳动物细胞高效表达系统是生物制药工业中十分关键的环节,而表达载体和宿主细胞又是哺乳动物细胞表达系统的两个重要组成部分.文章较详细综述了通过目的基因整合位点的优化、增加目的基因拷贝数、提高目的基因的转录和翻译水平等构建哺乳动物细胞高效表达载体的研究进展.同时,为使宿主细胞更好地适应工业化大规模培养要求,对通过抗凋亡、细胞周期调控、糖基化、细胞增殖控制技术和多基因代谢等细胞代谢工程对其进行改造的研究进展也作了介绍.     

电穿孔法基因转染哺乳动物细胞的应用

应用电穿孔技术转染pEGFP于哺乳动物细胞，讨论了电穿孔技术的应用条件，影响因素，初步确定了COS7、Hela、HepG2、K562、Jurkat等细胞系的转染条件，为今后的分子生物学研究打下了良好的基础。     

哺乳动物细胞表达外源基因常用病毒载体的研究进展

文章概述了逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、慢病毒载体等四种常用哺乳动物细胞表达外源基因的病毒载体系统的来源、组成、特点及应用方面研究的进展.     

无血清培养细胞HICSF的自分泌生长因子的检测

为了探讨无血清培养细胞ＨＩＣＳＦ的自分泌调控机制，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测生长因子ｂＦＧＦ，ＴＧＦβ１和细胞因子ＩＬ－６，ＩＬ－８，Ｇ－ＣＳＦ以及细胞因子受体ＩＬ－６Ｒ和ＩＬ－８Ｒ在ＨＩＣＳＦ细胞及其同基因来源的血清培养细胞ＨＩＣ中的表达状况，同时用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法观察重组ＩＬ－６和ＴＧＦβ１对这２种细胞生长的影响，以观察癌细胞在有血清和无血清培养条件下部分生长因子和细胞因子的表达及反应性差异     

外源脑啡肽基因在哺乳动物体细胞的表达

评价转染脑啡肽基因体细胞用于爱滋病和晚期癌症患者生物镇痛的可行性。方法：采用磷酸钙共沉淀法和脂质体包裹法，分别将ｈｅｎｋ基因或ｈｅｎｋ与ｎｅｏ基因导入三种哺乳动物体细胞，观察转染效率并用放射免疫法测定转染后ｈｅｎｋ基因的瞬时表达及稳定表达水平。结果：双基因共转染加Ｇ４１８筛选组的ｈｅｎｋ基因稳定表达水平（１００～２００ｐｇ／ｍＬ）明显高于单基因转染未经筛选组（６０～１００ｐｇ／ｍＬ）；脂质体包裹法在基因转染率（１３３％～１６１％）及表达水平（１５０～２４０ｐｇ／ｍＬ）方面均优于磷酸钙共沉淀法（２０％～２６％和１００～２００ｐｇ／ｍＬ），两者的稳定表达水平与ＰＣ－１２细胞的分泌水平（１６０ｐｇ／ｍｌ）相当，均能满足细胞镇痛的要求。结论：转脑啡肽基因体细胞的脑啡肽分泌量（１０７个细胞）可以满足镇痛的要求。若用于ＡＩＤＳ患者，可望长时间地缓解全身疼痛，并增强机体免疫功能和改善神经退行性痴呆症状     

ICR小鼠胚胎NSCs体外培养和诱导分化

利用表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）的联合促进作用使原代胚胎皮层神经干细胞（Neural Stem Cells,NSCs）稳定增殖,以此来分离培养ICR小鼠胚胎NSCs,并在体外高效诱导成神经元。通过诱导分化的对照实验获得神经元分化比例最高的方法。免疫细胞化学不仅证实了培养的NSCs可表达Nest...     

QS450型清筛机适应桥梁道床清筛的挖掘系统改造研究

通过对太原铁路局管内线路的桥梁情况、大型养路机械配置情况以及QS450型清筛机机械情况的分析,确定了对QS450型清筛机挖掘系统适应桥梁道床清筛改造的尺寸限度,制定了在不改变整车机构的情况下对挖掘系统的提升、下降导槽进行瘦身改造,以及对弯角导槽、挖掘底梁、挖掘链的重新设计方案,并介绍了改造方法及改造后的试验情况。