大孔吸附树脂对肿瘤坏死因子吸附性能的研究

选用NK-110、碳化树脂和MET-10043种大孔吸附树脂,通过对树脂吸附量的测定,吸附动力学曲线和吸附等温线的描述等方法,研究了3种大孔吸附树脂对血浆中TNFα的吸附性能,结果表明NK-110和MET-1004对TNFα的吸附量较高,其中又以MET-1004的吸附速率最快     

微流控芯片流体剪切力和肿瘤坏死因子-α共同作用对大鼠软骨细胞表型的影响

流体剪切力是生物体内普遍存在的一种生物力学形式,是细胞微环境的重要组成部分,对细胞多种生物学行为有重要调节作用。该研究以微流控芯片技术为基础,建立了一种基于流阻原理能同时产生4个不同大小流体剪切力的微流控芯片平台,用以研究低流速的流体剪切力对大鼠原代软骨细胞表型维持的影响。结果表明,流体剪切力可促进软骨细胞的表型维持。还加入了肿瘤坏死因子-α(TNF-α),考察流体剪切力和TNF-α共同作用对软骨细胞表型的影响。结果表明,在剪切力和TNF-α共同作用下,软骨细胞的Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达明显下调。该研究为软骨组织工程和骨性关节炎的疾病研究提供有力的研究平台,为骨关节疾病治疗和防治提供了理论依据。     

新型含硫肿瘤坏死因子类肽抑制剂的合成与活性

为了发展新型TNF类肽抑制剂, 考虑到酶活性中心含有Zn²⁺离子, 我们以通式1的骨架为基础, 设计并合成了一类含有硫原子的类肽化合物2, 其具有三肽的基本骨架, 羟胺的游离羟基和侧链上的硫原子均可与金属蛋白酶活性中心的Zn²⁺络合, 起抑制活性作用.     

肿瘤坏死因子与可溶性受体之间相互作用的动力学研究

采用表面等离子体共振(SPR)技术研究了肿瘤坏死因子(TNF)与其两种受体的胞外部分即可溶性受体(TNF sRI/Fc Chimera和TNF sRII/Fc Chimera)的相互作用的动力学性质。采用两种方式进行研究:在传感片上氨基偶联固定TNF,测定其与溶液中两种可溶性受体相互作用;在传感片上固定Protein A,通过其与嵌合蛋白TNF sRI/Fc Chimera和TNF sRII/Fc Chimera分子上Fc片段的特异性作用,将可溶性受体"捕获"固定在传感片上,再测定受体与溶液中TNF的相互作用。结果表明,两种固定方式测定的动力学参数相吻合,TNF与其可溶性受体的亲和常数KD大于10"9mol/L,远高于一般抗体-抗原间的亲和常数(KD=10"5～10"7mol/L)。     

肿瘤坏死因子α和γ-干扰素对白血病细胞作用的31PNMR分析

用^31P核磁共振观察了肿瘤坏死因子α（TNF－α）和γ－干扰素（IFN－γ）联合对人淋巴瘤白血病细胞系Molt-4作用后含磷化合物的变化；Molt-4细胞系的^31P谱主要由三磷酸腺苷（ATP）、无机磷（Pi)、磷酸单酯等的共振峰组成；^31P谱显示γ－干扰素、肿瘤坏死因子α及γ－干扰素和肿瘤坏死因子α联合对Molt-4细胞作用后，三磷酸腺式苷的β位磷的共振峰与无机磷的峰高比值（hATP/hPi)不同程度地降低；同时根据Pi的化学位移对Molt-4细胞胞内pH的变化进行了监测。     

核磁共振研究人肿瘤坏死因子α衍生物a（hTNFαDa）的变性过程

用Ｂｒｕｋｅｒ公司的ＡＭ－６００和ＭＳＬ－３００核磁共振波谱仪分别作了天然态和在不同浓度尿素作用下人肿瘤坏死因子α衍生物ａ（ｈＴＮＦαＤａ）的质子核磁共振实验发现在尿素的作用下，ｈＴＮＦαＤａ的结构发生了变化，当尿素浓度增加到４－６ｍｏｌ／Ｌ时，ｈＴＮＦαＤａ逐渐解聚为单体无规线团。     

用电喷雾质谱法监测重组人肿瘤坏死因子中二硫键的还原过程

应用电喷雾质谱方法动态监测了用巯基乙醇及二硫苏糖醇还原重组人肿瘤坏死因子中二硫键的全过程,表明使用巯基乙醇还原二硫键速度较二硫苏糖醇快,并且在还原过程中有质量加和产物生成,还原过程易于观察,可为进一步对蛋白质酶切进行结构鉴定提供监测方法;利用该法还可测定分子中二硫键的数目。     

α-乙酰基二硫缩烯酮的新合成方法

本文采用酸为催化剂，实施了具有代表性的各种烷硫基α,α-二乙酰基二硫缩烯酮的脱乙酰基反应，得到了一条简洁、通用的α-乙酰基二硫缩烯酮的合成路线.用浓硫酸作催化剂，以极高的产率(90%—100%)制得到相应的α-乙酰基二硫缩烯酮.同时，通过控制反应时间，还可以得到硫代乙酰乙酸酯类化合物.     

齐墩果酸的结构修饰和α-葡萄糖苷酶抑制活性

以天然五环三萜类化合物齐墩果酸为原料, 通过氧化、酯化、环合和曼尼希等反应, 对A环2, 3位和28位进行结构修饰, 设计合成了16个衍生物; 通过理化性质、质谱和核磁数据确定了化合物结构. 对合成的衍生物进行了体外α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选, 结果表明, 受试化合物在200 μg/mL浓度下显示出不同程度的酶抑制活性. 初步构效关系分析表明, 28位游离羧基是活性必需基团, 3位羟基或相应的氢键供体取代基有利于提高活性.     

聚乙二醇修饰重组人肿瘤坏死因子-α的合成和分离纯化

分别以重组人肿瘤坏死因子-α(TNFα-)和NHS-PEG-MAL的摩尔比为1∶5、1∶20、1∶40、1∶60,于不同时间下进行PEG化反应。反应混合物经SDS聚-丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定和Im age M aster图象分析系统定量凝胶中游离蛋白质,评价蛋白质PEG化程度;采用灌注色谱技术,通过阳离子交换柱分离纯化反应混合物。结果显示:SDS-PAGE法可使游离TNFα-与PEG-TNFα-达到完全分离;TNFα-的PEG化程度随PEG量和反应时间的增加而提高。反应混合物被阳离子交换柱分离成PEG、PEG-TNFα-混合物和游离TNFα-。     

人肿瘤坏死因子(TNF)cDNA的分离、鉴定及其表达

PMA诱导的HL-60细胞株mRNA经逆转录合成cDNA;经过第一链cDNA为模板的PCR扩增反应,分离到一特异的615bp DNA片段。Southern杂交和DNA序列分析证实这一615bp片段包含了编码人TNF成熟肽所需的全部cDNA顺序。将这一人TNF cDNA克隆到大肠杆菌表达载体pKK223-3,获得人TNF直接表达质粒pHT-1。IPTG诱导的表达产物具有L-929细胞毒活性;并经抗体中和实验确证为人TNF。在A_(600)=2时,大肠杆菌产生的重组人TNF含量约为8×10~7U/1培养液。     

α,α-二乙酰基二硫缩烯酮和芳醛的缩合反应研究

在碱性条件下,α,α-二乙酰基二硫缩烯酮和芳醛的缩合反应受烷硫基的影响.α,α-二乙酰基二苄硫缩烯酮1和芳醛3缩合生成单面缩合脱乙酰基产物α-肉桂酰基二苄硫缩烯酮4;α,α-二乙酰基环二硫缩烯酮2和芳醛3缩合生成双面缩合产物α,α-二肉桂酰基环二硫缩烯酮5.     

十六烷基三甲基溴化铵插层α-磷酸锆复合物的合成、表征及其对酚的吸附机理

利用甲胺消弱α-磷酸锆(α-ZrP)层间作用力, 合成了不同十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB)含量插层α-ZrP的复合物CTMAB-ZrP. 通过X射线粉末衍射(XRD), 傅里叶变换红外(FTIR)光谱, 透射电子显微镜(TEM), 扫描电子显微镜(SEM)及氮气等温吸附对CTMAB-ZrP进行了表征, 推测了CTMAB在磷酸锆层间的排列形式. CTMAB-ZrP吸附水中苯酚的实验结果表明, CTMAB-ZrP对苯酚的吸附量不仅与CTMAB的插入量和层内空间位阻有关, 还与溶液的pH值密切相关. 对苯酚、2-氯苯酚、2,4-二氯苯酚、对甲基苯酚及3,5-二甲基苯酚的吸附实验结果表明, CTMAB-ZrP对酚类化合物的吸附量与酚的疏水性成正相关, 而与酚类化合物的酸性无关. Henry型和Freundlich型吸附等温方程都能很好地拟合CTMAB-ZrP对苯酚、2-氯苯酚和2,4-二氯苯酚的吸附过程, 表明吸附主要是酚在插层复合物层间有机相中的分配作用所致.     

α,α-二乙酰基二苄硫缩烯酮的碱催化脱乙酰基反应及缩合反应机理研究

α-羰基二硫缩烯酮是一类极其重要的有机合成中间体，烷硫基对该类具有推-拉电子效应的共轭体系的性质影响很大。据此，我们率先提出了烷硫基对α-羰基二硫缩烯酮类化合物的化学行为具有调控作用的观点，并将其归因于空间电子因素的作用，α-乙酰基-α′-羰基二苄硫缩烯酮(1)具有多反应性特征。近来，我们利用该特征在氢氧化钠催化下通过化合物1的环合合成了多取代噻吩类化合物；在乙醇钠-醋酸铅作用下经乙氧基对化合物1的苄硫基的取代实现了α-羰基-O，O-缩烯酮的合成。     

CO2在α-U(001)表面的吸附和解离

采用广义梯度密度泛函理论研究了0.25ML覆盖度下CO₂在α-U（001）表面上的吸附和解离,得到了CO₂的稳定吸附构型和吸附能,确定了CO₂的解离过渡态和解离能垒,探讨了CO₂与表面U原子的相互作用本质.结果表明CO₂趋向以C（O）-U多键结合方式在α-U（001）面发生强化学吸附,吸附能为1.24-1.67 eV;C-O键的活化程度依赖于表面电子向CO₂发生转移的程度.CO₂与表面U原子的相互作用主要来自于U原子电子向CO₂最低空轨道（LUMO）2π_u转移,以及CO₂π_u/1π_g/3σ_u-U 6d轨道间杂化而生成新的化学键.以形成3个C-U键和6个O-U键模式在穴位1和穴位2上发生吸附的CO₂（H1-C₃O₆和H2-C₃O₆）的解离吸附能分别为3.15和3.13 eV,解离能垒分别为0.26和0.36 eV,预示着吸附CO₂分于易于解离形成CO分子和O原子.     

半合成人肿瘤坏死因子cDNA的构建及其在大肠杆菌中的高表达

本文报道从人基因文库中分离淋巴毒素(LT)基因的同时,克隆了肿瘤坏死因子(TNF)基因,这两个基因相距1.2kb.TNF基因有4个外显子,第4外显子编码TNF成熟蛋白157个氨基酸中的140个.将第4外显子切出一部分,再人工合成编码其余氨基酸的DNA片段,两者连接构成重组的人TNF(rhTNF)cDNA,并克隆在大肠杆菌表达载体中成功地得到表达.5 l罐发酵得菌体约20g/l,以L929为靶细胞测定细胞毒活性为10~6-10~7单位/ml.高压液相色谱仪分离纯化rhTNF,冻干后得白色粉剂.测定了这种rhTNF的氨基端的10个氨基酸序列,证明与天然的人TNF完全相同.纯度约为95％.     

聚合物功能化纳米探针用于肿瘤坏死因子(TNF-α)的超灵敏检测

肿瘤坏死因子(TNF-α)是免疫系统中细胞所产生的一种重要炎症因子,广泛参与到一些自身免疫疾病的病理损伤过程中。在健康人体内,TNF-α浓度非常低,而在病患者体内则会发生成倍的增长。TNF-α的过度表达会导致一些慢性炎症的病发,如风湿性关节炎、牛皮癣等,同时它还与败血性休克综合症、糖尿病等疾病的发生存在关联,因而是癌症和感染疾病在发病初期的     

HF在α-AlF3(0001)表面吸附的密度泛函理论研究

利用密度泛函理论系统研究了不同覆盖度下HF在3F、2F、1F与Al 终端的α-AlF₃(0001)表面的吸附行为, 分析了HF与不同终端表面相互作用的电子机制. 计算结果表明: HF在3F终端的α-AlF₃(0001)表面物理吸附; 在2F及1F终端表面化学吸附, 形成Al-F键和FHF结构, 使HF分子活化, 可以参加下一步的氟化反应; 在Al 终端表面解离吸附形成Al-F与Al-H键. 3F、2F、1F及Al 终端表面配位不饱和数目分别为0、1、2与3配位.不同覆盖度研究表明, 在2F终端表面上, 吸附一个HF分子使表面Al 配位达到饱和, 后续吸附的HF为物理吸附; 而在1F与Al 终端表面仍可化学吸附. 因此, 推测α-AlF₃暴露不同终端表面中Al 原子配位不饱和数越高, 其对HF吸附与活化能力越强, 可能的氟化催化反应活性越高. 差分电荷密度与电子态密度分析表明, HF与3F终端α-AlF₃(0001)表面发生弱相互作用, 而与2F、1F与Al 终端表面形成较强的电子相互作用.     

230例广东汉族人肿瘤坏死因子A-308基因多态性的检测

为建立一种简便、准确、实用的人肿瘤坏死因子A-308基因突变频率的检测方法,了解广东汉族人肿瘤坏死因子A-308基因的分布特点,应用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增正常人肿瘤坏死因子A-308基因序列,扩增产物用限制性内切酶NcoⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳后,观察酶切位点的限制性片段长度多态性(RFLP)图谱,并结合文献进行了不同种族间的分析比较。结果表明,230例广东籍汉族人中,TNF-α1/1、TNF-α1/2、TNF-α2/2表型频率分别为:0.886 9、0.108 7、0.004 4,TNF-α1、TNF-α2基因频率分别为:0.941 3、0.058 7。该法简便、快速、准确,适合于一般实验室检测及大规模的人群调查,肿瘤坏死因子A-308基因多态性在不同种族间分布存在着明显的差异。     

NMR自扩散研究脂肪酸与α-环糊精的相互作用

用脉冲梯度场NMR测量自扩散系数的方法研究了乙酸、丙酸和丁酸与α-环糊精在低于临界浓度条件下的相互作用.研究发现,3种脂肪酸的扩散系数均随着环糊精含量增加而减小,其减小趋势与烷基的大小有关,烷基越大,其扩散系数减小越快.利用测得的扩散系数计算出3种脂肪酸和环糊精形成复合物的平衡常数,发现平衡常数随烷基链增长而增大,该结果与2D-ROESY(RotatingFrameOverhauserEffectSpec-troscopy)谱均表明,在脂肪酸与α-环糊精相互作用过程中,烷基与环糊精内腔的疏水相互作用起主导作用,不同脂肪酸和α-环糊精的结合比均为1:1.