桑树萎缩病病原体的研究 Ⅰ.桑树黄化型萎缩病病原体的电子显微镜研究

桑树黄化型萎缩病是一种严重的桑树病害,根据国际上当前流行的看法,它是由类菌质体而不是由病毒引起的病害。 我们从感染黄化型萎缩病的病桑组织中抽提出一种类似线状病毒的质粒,直径为110—130,具有典型的病毒空心和亚基显微结构,质粒长度约6,000—7,000,健康对照中则未见到,在抽提液中还有另外一种类似病毒的棒状质粒,直径约为200—240,在病桑组织的抽提液和超薄切片中,都观察到上述线状质粒的类晶状聚集物,也观察到有类菌质体存在。 我们初步认为,桑树黄化型萎缩病可能是病毒与类菌质体协同作用的复合病,这对桑树萎缩病的防治和病毒学理论都提出了新的问题。     

枣疯病病原体的电子显微镜研究

从枣疯树病叶中分离出一种类似棒状病毒的质粒,直径120(110—130),长度可达10,000,具有棒状植物病毒的典型空心与亚基结构,螺旋周期约40,在对照的健株叶中则未见到,这种质粒可能是枣疯病的病原体或病原体之一。 在枣疯树病叶和对照健树叶中,都还有一种细纤维状质粒,直径80左右,长度不一,最长可达20,000左右,无显著空心,但可见双股螺旋结构,这类质粒在感病组织中似有增加的趋势。 此外,对植物黄化病一类病害的病原体亦进行了讨论。     

柑桔黄龙病病原体的研究——Ⅰ.与柑桔黄龙病有关的一种线状病毒

从柑桔黄龙病病树叶中分离出一种线状质粒,直径120(110—130),长度可达25,000—30,000,具有线状病毒典型的空心与亚基结构,螺旋周期约40。利用指示植物皮接传毒和回接传毒试验证明,线状质粒可能是柑桔黄龙病的病原体或病原体之一。电子显微镜图片显示出的一些迹象,说明病毒质粒容易松散、断裂、并剥落产生环饼状颗粒。在柑桔类树叶中存在着另一种杆状质粒,直径60—80,不同长度,最长可达18,000,无显著空心,但具有螺旋结构。电子显微镜与抗血清普查结果说明,此类核酸蛋白体系质粒的存在与柑桔树发病之间,并无平行关系。此外,还观察到有串珠、螺旋、眉毛、铁轨等各种形态的质粒,文中对这些质粒在形态上的内在联系亦进行了讨论。     

水稻黑条矮缩病病原体的研究 Ⅰ.传毒灰稻虱体中类似病毒的质粒

水稻黑条矮缩病是一种由灰稻虱传播的严重病害,它是由病毒引起的A还是由其它原因引起的A探索病原体的本质,对掌握发病规律,采取有效防治措施具有重要意义。我们在水稻黑条矮缩病带毒灰稻虱的唾液腺、脂肪体和卵巢的超薄切片和唾液腺的抽提物中,利用电子显微镜观察到直径分别约710,480和340的质粒,它们都具有一般球状病毒的细微结构,并皆能呈晶形排列。对于这三种质粒与水稻黑条矮缩病的确切关系,以及其它可能性,进行了讨论。     

海带(LAMINARIA JAPONICA ARESCH.)叶卷病的研究——病原体的电子显微镜检查

感染了海带叶卷病的海带组织匀浆液经鲍鱼(Haliotis discus Hannai)酶处理后,提取到一种具原生质膜而无细胞壁的多形态类菌原体(MLO).病组织的超薄切片中也观察到这种原核微生物,但在健全海带的提取物和组织切片中,则从未检查到.同时考虑到四环素族抗菌素有明显抑制海带发病的作用,初步认为海带叶卷病是由这种类菌原体所引起的.这是在藻类中首次发现的MLO.     

λDNA限制片段上的基因在大肠杆菌中的表达

我们用EcoRI及BamHI两种限制性核酸内切酶来酶解质粒pBR322成为pBR322C(375bp)及pBR322B(3987bp),并同样酶解λc1857S₇ DNA的EcoRI限制片段λF₂(λDNA的65.5—81％片段)成为λF₂A(DNA的65.6—71.3％片段,2679bp)及λF₂B(λDNA的71.3—81％片段,4559bp).再用T₄-DNA连接酶将pBR322B及λF₂B重组成为一个新质粒,叫做pCB₂,其上具有cI基因,cro基因及启动基因.这是从随机挑取的338个菌落中筛选出来的第48号菌.pCB₂赋予转化子以单抗药性(Ap^r)及对λcI₈₅₇S₇感染的免疫性.用电子显微镜及凝胶电泳测定,pCB₂ DNA分子长度为2.66±0.33微米,分子量为5.51±0.68×10⁶d.用λF₂与Eco RI切割成线状的pCB₂在一起形成的异源双链图形和以上数据.都说明这一新质粒与建造时的设计相符.其中的_cI基因及/或cro基因在大肠杆菌中得到表达.