共查询到20条相似文献,搜索用时 9 毫秒
1.
[目的]山新杨(Poputlus davidiana ×P.bolleana)是林木基因工程育种基础和应用研究的良好材料;以山新杨蔗糖合酶基因(PdbSUS)为例研究聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)过程介导的重组现象,在此基础上区分每一个PdbSUS基因的两种单倍型,为后续研... 相似文献
2.
利用E .coli和酿酒酵母的穿梭质粒pYES2为载体 ,将地衣芽孢杆菌α 乙酰乳酸脱羧酶基因导入酿酒酵母中 ,构建了重组质粒pYEA ,实现了α 乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达 .α 乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达与菌体生长有关 .pYEA质粒在无选择压力的发酵条件下 ,仅能保持一定的稳定性 ,并具有降解α 乙酰乳酸的能力 ,但丢失率比较高 . 相似文献
3.
壳聚糖固定化α-乙酰乳酸脱羧酶的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用壳聚糖作为载体,戊二醛作交联剂制备固定化α-乙酰乳酸脱羧酶(ALDC),优化了固定化条件。实验结果:活力1380U/g,蛋白载量98.30mg/g,比活力14.04U/mg,活性回收率37,l%,固定化α-乙酰乳酸脱羧酶最适温度30℃,最适pH5.5。 相似文献
4.
根据NCBI上的DNA拓扑异构酶Ⅱ基因序列设计兼并引物,采用常规PCR、降落PCR、巢式PCR三种方法扩增糙皮侧耳和阿魏侧耳的拓扑异构酶Ⅱ部分基因序列,比较三种方法扩增效果的特异性、灵敏度.结果表明,巢式PCR的灵敏度和特异性都优于常规PCR和降落PCR,并且巢式PCR的灵敏度是常规PCR灵敏度的100倍以上,更加适合兼并引物扩增.这对利用兼并引物获取特异基因具有指导意义. 相似文献
5.
利用有机反应合成α-乙酰氧基-α-甲基-乙酰乙酸乙酯,后者经NaOH水解生成的α-乙酰乳酸,可以用作测定α-乙酰乳酸脱羧酶(简称ALDC)活力的底物.通过富集,从土壤和水体中分离出100株产芽孢的菌株,其中获得VP反应为阳性的37株芽孢杆菌,通过对ALDC活力的反复测定,得到7株有较高酶活性的菌株,并根据其生理生化的特征进行了初步的鉴定,为进一步开发和利用α-乙酰乳酸脱羧酶奠定了基础. 相似文献
6.
半随机单引物PCR扩增产物的特异性研究 总被引:1,自引:1,他引:0
以M13mp19为模板,寡核苷酸“1224”为引物,进行半随机单引物PCR扩增;分析其扩增产物的限制性内切酶酶切图谱,推定它们分别在M13mp19序列中的确切位置;证实引物“1224”的3端与模板M13mp19负链的互补结合,至少需有连续的4上个核苷酸,才能产生单引物PCR扩增的模板分子,进行有效的PCR扩增,并由此决定了扩增产物中各DNA片段的大小及其在模板DNA序列中的特定位置。 相似文献
7.
日本沼虾基因片段PCR扩增的条件优化 总被引:2,自引:0,他引:2
以日本沼虾肌肉组织为材料,提取其基因组DNA,研究了该虾16S rRNA基因片段扩增的PCR反应条件.经对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验,确定优化反应条件为: 在25μL反应体系中,10×Buffer 2.5 μL,DNA模板200~300 ng,4×dNTP 0.2 mmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,引物0.4μmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,95 ℃预变性5 min;接着35个循环包括95 ℃变性1 min,56 ℃复性50 s,72 ℃延伸1 min;最后72 ℃延伸10 min.应用此优化体系扩增日本沼虾18S rRNA,细胞色素氧化酶亚基I (cytochrome oxidase subunit I, COI),NADH脱氢酶亚基V (NADH dehydrogenase subunit 5, ND5)等基因片段均获得了稳定而理想的效果.研究结果为深入探讨日本沼虾种群的遗传和变异,以及开展其种质鉴定和分子标记等研究提供了参考. 相似文献
9.
10.
单引物PCR扩增DNA指纹图谱的稳定性研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以人胶原蛋白基因下游一段DNA的互补序列设计引物,对人染色体DNA进行单引物PCR扩增,在低温退火的条件下,这种引物与DNA模板的一处完全配对,并且可以随机地结合在其他一些位置上。由此进行单引物PCR扩增,它们的扩增产物形成了稳定的引物-模板特异的DNA指纹图谱。本文所建立的单引物PCR扩增技术在类似的研究中均可获得稳定的实验结果,具有一定的应用价值。 相似文献
11.
固定化乳酸酶膜圈的研究 总被引:6,自引:3,他引:6
本文研究了固定化L-乳酸氧化酶膜圈的制作技术及其生化特性,并与美国YSI酶膜圈进行了比较,认为二者具有等值性,可与YSI-23L型乳酸分析仪配套使用。 相似文献
12.
含α—乙酰乳酸脱羧酶基因重组酿酒酵母的啤酒发酵 总被引:7,自引:0,他引:7
利用E.coli和酿酒酵母的穿梭质粒pYES2为载体,将寻衣芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因导入酿酒醇母中,构建了重组质粒pYEA,实现了α-乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达。 相似文献
13.
14.
地衣芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶的纯化及酶学性质 总被引:3,自引:0,他引:3
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheni formis)AS10106α-乙酰乳酸脱酸酶经硫酸沉淀,聚乙二醇沉淀,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换,Gigapite K-100S柱层及SephadexG-100分子凝胶过滤柱等分离纯化步骤,得到SDS-PAGE电泳纯,α-乙酰乳酸脱羧酶的比活提高了53.5倍。对该酶性质的研究表明,酶单亚基分子量为32Kda,等电点为4.5;该酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH为6.0,对热(40℃以上)敏感。在pH5.0-6.5之间稳定。酶活不需要金属阳离子,Cu^2 、Co^2 强烈抑制酶的活性。摇瓶实验表明,纯化的地衣芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶能明显降低双乙酰的形成并缩短其还原时间。 相似文献
15.
根据已知的α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactatedecarboxylase,ALDC,EC.4.1.1.5)基因序列,利用PCR方法从产气大肠杆菌(Enterobacter aerogenes)中克隆到0.8kb的DNA片段,经DNA序列分析表明该DNA片段为ALDC基因.将该片段插入到原核表达载体pBV220中,获得表达质粒pBVEDAD,转化大肠杆菌DH5α(Escherichia coli),经热诱导后,通过SDS-PAGE分析和酶活测定,结果表明ALDC获得了高效表达.重组细胞表达的ALDC酶活是出发菌产气肠杆菌(Eaerogenes)的1100倍.DH5α(pBVEDAD)在无选择压力下37℃连续培养60代,在42℃下热诱导5h未见质粒丢失. 相似文献
16.
17.
以原癌基因K—ras基因12位密码子的4种基因型(野生型为GGT,突变型为AGT、TGT、CGT)质粒DNA为研究模型.采用SYBR Green I为实时PCR指示剂,进行ARMS实时PCR基因分型特异性的研究.结果表明:在和模板匹配的ARMS引物3′端附近引人故意错配碱基.将ARMS引物浓度稀释10倍,并对传统三步PCR循环进行改良.即根据目的产物和引物二聚体的熔点差异.在传统延伸步骤之后增加一步恒温80℃检测荧光步骤。可消除引物二聚体的影响.使ARMS引物的特异性增强.得到清晰的基因分型结果.实验表明这种基于SYBR Green I的ARMS实时PCR基因分型方法,无需合成探针,实验设计简单.是一种快速、简便、经济、特异性好的基因分型方法,可推广用于其他基因的分型。并可望成为应用于临床的基因诊断技术之一. 相似文献
18.
α-乙酰乳酸脱羧酶的提取条件与应用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
从BD-5菌株中提取α-乙酰乳酸脱羧酶,为提高酶的得率,探讨了破壁方法、除杂蛋白、硫酸铵沉淀提取粗酶等的条件,以及提取过程中酶的损失情况和菌体存放时间对酶活力的影响等。结果表明:该菌株的菌体用超声波破壁、50%饱和度硫酸铵除杂蛋白,80%饱和度硫酸铵提取粗酶效果较好,菌体存放时间过长,酶活力明显降低。将用该菌株提取的酶应用于啤酒发酵中,证明有明显的降低双乙酰的效果。 相似文献
19.
蝴蝶兰查尔酮合酶基因cDNA的克隆、鉴定及其原核表达 总被引:5,自引:0,他引:5
利用逆转录.聚合酶链式反应(RT-PCR)得到在蝴蝶兰花瓣中特异性表达的查尔酮合酶cDNA(pchs-1).DNA序列分析表明,该序列与已发表的查尔酮合酶基因有很高的同源性.将此cDNA序列不改变阅读框架克隆到pET-24α( )原核表达载体上,经IPTG诱导后,SDS-PAGE的结果表明有预测大小的蛋白受诱导表达,该基因在植物中的功能验证工作正在进行中. 相似文献
20.
PCR反应的动力学模拟和相关因素对扩增结果的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
PCR技术建立二十年以来,它已经成为生物学实验室不可缺少的一部分。但因为其影响因素多、反应过程比较复杂,到今天为止它还是一个具有某种程度经验性的方法。我们从PCR反应的基本动力学过程分析出发,通过每一轮扩增循环的分析描述了产物的积累过程,在此基础上建立了反应的迭代动力学模型。通过该模型我们模拟了反应使用的模板量、扩增循环数、酶的使用量、酶的半衰期、以及每一轮扩增中变性时间对扩增结果的影响。进一步,我们对模板使用量、扩增循环数、酶的使用量对扩增结果的影响进行了实验验证和探讨;混合模板对扩增结果的影响也同时做了探讨。模拟和实验的结果表明:常规的PCR实验中使用中等偏低的模板量,选择较好的聚合酶同时使用合适的酶量,通过较低循环数的扩增就能得到较为满意的结果。PCR实验的成败最大的限制因素是实验准备过程中引物的设计,而实验过程中的调整优化只能起辅助作用。 相似文献