氨基酰化酶在脲溶液中变性时构象变化速度与失活速度的比较

应用了邹氏不可逆抑制动力学的方法,在变性剂存在的条件下,连续监测酶催化的底物反应过程,测定了氨基酰化酶在不同浓度脲溶液中失活的速度常数,并考察了底物的存在对酶失活的保护作用。同时,还比较了氨基酰化酶在不同浓度脲溶液中变性时失活和构象变化的速度。1mol/L,2mol/L脲变性时失活速度常数为为1.62×10~(-2)S~(-1)和2.05×10~(-2)S~(-1),但是酶分子的整体构象尚未发生明显变化。3mol/L脲变性时,失活速度常数为2.56×10~(-2)S~(-1),而变性速度常数为3.72×10~(-3)S~(-1)。失活速度比构象变化速度快大约一个数量级。在4mol/L,5mol/L,6mol/L脲溶液中变性时,酶分子快速失活,而其构象变化速度常数分别为5.27×10~(-3)S~(-1)。5.47×10~(-3)S~(-1),5.56×10~(-3)S~(-1)。可见,在相同浓度的脲溶液中,氨基酰化酶的失活速度明显快于酶分子整体构象变化的速度。上述结果表明,含有辅基金属离子Zn~(2+)的氨基酰化酶的活性部位较酶分子的整体结构也具有一定的柔性。     

利用色谱法研究α－淀粉酶变性动力学

提出用尺寸排阻色谱法研究酶的变性动力学。此法将高效色谱分离同灵敏的紫外检测结合起来,消除了紫外法测定蛋白质变性速度时变性体的影响。确定了个淀粉酶在盐酸胍溶液中变性时的反应级数,测定了不同浓度变性剂中酶的变性速度常数,并和失活速度常数进行了比较,讨论了影响酶变性速度的因素。     

不同底物体系下漆酶的失活动力学研究

本文对三种体系的漆酶热失活动力学进行了研究,并对动力学参数进行了相应的分析。结果显示,漆酶在纯水溶液中的失活符合一级动力学模型,其失活方程为lnA=-0. 1353t-2. 2522。在有毒有机物体系(2,4-二氯酚和吲哚溶液)中漆酶的失活仍符合一级失活动力学模型,失活速率常数减小,但半衰期增大。在极性溶液(乙醇)中,漆酶的反应速率常数最小,可能是因为漆酶分子内部作用力的变化导致了漆酶反应变缓;在非极性体系(异辛烷溶液)中,水-疏水体系减少了对酶的伤害,利于酶的稳定,延长了漆酶半衰期;极性或非极性体系中的漆酶失活均符合一级动力学失活模型。     

利用色谱法研究α—淀粉酶变性动力学

提出用尺寸排阻色谱法研究酶的变性动力学。此法将高效色谱分离同灵敏的紫外检测结合起来，消除了紫外法测定蛋白质变性速度时变性体的影响。确定了α－淀粉酶在盐酸胍溶液中变性时的反应级数。测定了不同浓度变性剂中酶的变性速度常数，并和答活速度常数进行了比较，讨论了影响酶变性速度的因素。     

果糖-6-磷酸-2-激酶的色氨酸残基的研究

NBS滴定PFK-2的紫外光谱的结果表明,该酶可滴定Trp残基数为4个其中2个是活性必需的。 用295nm的紫外光激发果糖-6-磷酸-2-激酶(PFK-2),在335nm附近有较强的发射荧光。该荧光能较专一反映PFK-2的Trp基团的状态。底物果糖-6-磷酸对该荧光不影响,ATP引起荧光吸灭。最大吸灭幅度为30％左右。 采用荧光滴定方法测定ATP与酶的结合,得出解离常数(K_i)在低浓度ATP时为0.033mmol/L,高度时为0.23mmol/L。表明该结合具有负协同性。Mg~(2+)、无机磷均降低ATP与酶的K_i值而表现为激活因子;果糖-6-磷酸和果糖-2,6-二磷酸酸对K_i值不影响。ATP结合后引起了该酶构象上的较大的变化。 在ATP保护下,PFK-2对NBS的失活速度稍有增加。丙烯酰胺荧光滴定的结果是,在有无ATP时的Stern-Volmer常数(K_(SV))皆为4.0。     

铜离子对烟草多酚氧化酶变性和复性影响的热力学研究(英)

在有无5 mmol·L^-1 CuSO₄存在的两种情况下，运用荧光光谱研究了烟草多酚氧化酶在盐酸胍诱导下的变性和复性平衡。烟草多酚氧化酶在6.0 mol·L^-1盐酸胍变性30 min(25 ℃)即完全失活。荧光光谱结果表明：铜离子能够提高烟草多酚氧化酶的结构稳定性和抗盐酸胍变性的能力，进而影响烟草多酚氧化酶在盐酸胍诱导下的变性和复性过程。没有外源铜存在的情况下，盐酸胍诱导的烟草多酚氧化酶变性和复性是一个可逆的二态过程；在5 mmol·L^-1 CuSO₄存在的条件下，由于结合了Cu²⁺的酶的中间态稳定性增加，显示特征荧光，结果显示，外源铜存在时，盐酸胍诱导的烟草多酚氧化酶变性和复性是一个可逆的三态过程。根据相应模型，进行了热力学计算。上述实验结果得到酶活性测定的进一步证实，在6 mol·L^-1盐酸胍中放置5，10，15，20，25，30 min，烟草多酚氧化酶的剩余活性分别为18.7%，11.7%，8.9%，6.6%，3.6%，0.06%，但在5 mmol·L^-1 CuSO₄存在的条件下，剩余活性则分别为60.3%，44.6%，42.5%，40.2%，25.6%，25.3%。     

钒极谱催化波的研究 Ⅱ、钒在苦杏仁酸底液中氯酸盐极谱催化波的研究

据前人钼催化波启发,我们以钒在苦杏仁酸底液中得氯酸盐催化波(图1)。催化波与pH、苦杏仁酸浓度、氯酸盐浓度的关系分别列于图2、3、4。钒浓度在3×10~(-7)M-1×1M~(-5)M范围内与电流呈线性关系。形成催化波的最宜条件为:0.0025M苦杏仁酸,0.4MNaClo_3,pH=2.7。催化波峰电流与汞柱高度(30—80厘米)无关,温度系数为5.8％(19—31℃),i—t曲线得i∝t~(0.6—0.7)。三角波扫描i-E曲线不呈峰状,均反映了动力波特性。可用Koutecky准一级平行催化反应速率常数公式进行计算。式中催化电流扩散电流。为直线且通过原点,在0.0025M苦杏仁酸0.4MNaClO_3底液中r=4秒时求得速度常数k=2.3×10~4升/克分子·秒。由电毛细管曲线和交流极谱曲线(图5、6)     

3′-末端氧化的tRNA~(Leu)对大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶的亲和标记

本文用3′-末端氧化的tRNA~(Leu)(tRNA_(ox)~(Leu))专一地标记了大肠杆菌亮氨酰-tRNA合成酶(LeuRS)。合成酶标记上等摩尔tRNA_(ox)~(Leu)后,氨酰化活力完全丧失,同时氨基酸活化活力也失去80％。这样失活反应是通过tRNA_(ox)~(Leu)的3′-末端羰基与亮氨酰-tRNA合成酶活性中心或其附近的赖氨酸残基的ε-氨基形成Schiff碱实现的。Schiff碱经硼氢氰化钠还原后稳定。酶与tRNA_(ox)~(Leu)的共价复合物经牛胰核糖核酸酶充分水解后,其活化氨基酸的活力及动力学常数基本恢复到原来水平,而氨基酰化活力未恢复。表明了该合成酶的两种活性中心相互关联又有区别。     

肌酸激酶胍变性时的构象变化

文本应用紫外差光谱及荧光光谱的方法测定了肌酸激酶在不同浓度胍中变性时的构象变化: 1.低浓度胍(小于1M)变性时,差光谱中只表现出281毫微米,287毫微米的负差吸收峰,未见292毫微米的差吸收峰。荧光强度明显升高,最大峰值位置自337毫微米红移至345毫微米。 2.高浓度胍变性时,差光谱中287毫微米的负差吸收峰明显加大,至3M胍变性时达最大值,此时于292毫微米处出现一较小的负差吸收峰。荧光强度随胍浓度升高而降低,3M胍变性时,最大峰值位置红移至355毫微米,并且不再随胍浓度增大而改变,同时于310毫微米处出现一新的发射肩。 3.模型化合物对照实验表明胍对于解离酪氨酸在345毫微米的荧光发射强度有明显的增强效应。 这些现象表明,肌酸激酶分子中部分色氨酸处于分子表面,部分隐蔽于疏水内核。有相当部分的酪氨酸是处于解离状态。3M胍变性时,肽链可能已充分伸展。     

用自旋-晶格弛豫时间T_1研究吗啡的不对称旋转和甲基内旋转速度

在~(13)C 90.1和62.9MHz观察频率下测定了吗啡(morphine)分子在溶液中的核弛豫参数。用分子不对称旋转模型算得吗啡分子绕X轴的旋转速度为8.6×10~9周秒~(-1),绕Y轴的旋转速度为6.1×10~9周秒~(-1)。NCH_3中甲基的内旋转速度为5.7×10~9周秒~(-1),内旋转位垒为4.59 kcal mol~(-1)。     

离子型手性金属有机框架材料的构筑及其对Fe3+和硝基化合物的荧光识别

合成了一例具有两重互穿qtz(quartz,石英)拓扑结构的离子型手性金属有机框架材料[CdL_2·2(Me_2NH_2)~+·6H_2O]_n(1),其中L为去质子化的H_2L配体(2-羟基对苯二甲酸)。荧光识别实验表明,配合物1可选择性的检测Fe~(3+)和硝基化合物(其中2,4,6–三硝基苯酚的猝灭常数为1.86×10~4/M,4-硝基甲苯的猝灭常数为8.61×10~3/M,Fe~(3+)的猝灭常数为2.52×10~4/M)。此外,使用密度泛函理论、紫外可见吸收光谱等手段讨论了硝基化合物的传感机制。     

用自旋-晶格弛豫时间T1研究吗啡的不对称旋转和甲基内旋转速度

在~(13)C 90.1和62.9MHz观察频率下测定了吗啡(morphine)分子在溶液中的核弛豫参数。用分子不对称旋转模型算得吗啡分子绕X轴的旋转速度为8.6×10~9周秒~(-1),绕Y轴的旋转速度为6.1×10~9周秒~(-1)。NCH_3中甲基的内旋转速度为5.7×10~9周秒~(-1),内旋转位垒为4.59 kcal mol~(-1)。     

荧光素卟啉分子间分子内能量及电子转移反应

合成了以共价键相连的荧光素-卟啉二元分子.研究了荧光素酯与卟啉分子间和分子内的能量及电子转移过程.分子间的荧光猝灭实验表明,当激发荧光素时,荧光素的单重态能量有效地传给卟啉,动态荧光猝灭速度常数(k_d)为1.3×10~(12)s~(-1)·mol~(-1)L.吸收光谱和NMR谱结果表明荧光素与卟啉间有基态相互作用,其静态荧光猝灭速度常数(k_s)为3.6×10~(12)s~(-1)·mol~(-1)·L.在二元分子中,当激发荧光素时,从荧光素到卟啉的单重态能量传递效率在0.90以上,速度常数为 1.2×10~(10)S~(-1)·mol~(-1)·L,溶剂极性对其影响不大.当激发卟啉时,在极性溶剂中发生了电子转移,其转移效率为0.51,速度常数为2.3×10~8s~(-1)·mol~(-1)·L.     

长链烷烃脱氢主反应及其失活过程表观动力学研究

本文提出了在绝热固定床上求取催化反应及其失活过程总表观动力学方程和参数的方法,并用此法处理长链烷烃催化脱氢的中试数据,得列在DH-140催化剂上脱氢主反应的表观动力学方程为:-r=k(p_P-p_(MO)·p_(H_2)/K_(P_I))~(1/2)主反应失活过程的表观动力学方程为:-(dk)/(dt)=k_dt 或k=k_0e~(-k)d~t主反应表观速度常数的总表达式为:k=e~8·~(53)R~(-26.7)/RT_(·e~(-te))~(0.64R-12.7/RT     

金属置换碳酸酐酶及其生成动力学

本文报道了金属置换碳酸酐酶的活性研究。指出了离子半径的大小,配位构型的要求,热力学稳定性和配位体交换动力学是决定各种金属置换碳酸酐酶活性的重要因素。并用金属置换法测定了Ni(Ⅱ)与apo-CA形成金属酶的反应动力学速率常数。在25℃、pH7.47时,K_(fNi(Ⅱ)-CA)为14.01·mol~(-1)sec~(-1),较之于Zn(Ⅱ)-CA的速率常数小10~3倍。Cd(Ⅱ)-CA的生成动力学为一快反应,采用配位竞争法,在邻菲罗啉配位剂存在下,测得了Cd(Ⅱ)-CA生成动力学的条件速率常数在o-phen浓度为1.96和2.92×10~(-4)mol·1~(-1)时分别为137.1和114.61·mol~(-1)sec~(-1)。这一研究提示了镉对生物体的毒性作用的一个重要方面是使锌酶失活。而配位剂的存在大大降低了镉与脱辅基锌酶的反应动力学,这也是它们显示解毒功能所在。     

树枝形聚合物修饰的双8-羟基喹啉光物理研究

研究了树枝形聚合物修饰的双8-羟基喹啉衍生物(Gn-QMQ, n=1~3)在二氯甲烷和乙腈中的荧光猝灭过程和荧光衰减过程. 随着代数n的增加, 猝灭速率常数减小, 核心双8-羟基喹啉基团荧光寿命增长, 非辐射失活速率常数减小. 研究结果表明, 随着代数的增加, 树枝形骨架对核心基团的位点分离作用增大, 在乙腈中树枝形骨架趋于紧密构象, 具有更强的位点分离作用.     

脲和盐酸胍诱导过氧化氢酶去折叠的研究

用荧光相图法分别研究了脲和盐酸胍诱导牛肝过氧化氢酶去折叠的过程。当脲 浓度从0依次增大至0.50,4.5和8.0 mol/L时,过氧化氢酶从天然四聚体依次转变 为蓬松的四聚体、部分折叠的无活性二聚体和去折叠态,而当盐酸胍浓度从0依次 变化至0.65,2.5和6.0 mol/L时,过氧化氢酶则从天然四聚体集资转变为部分折叠 的激活二聚体、部分折叠的单体和去折叠态,这表明无论是用脲还是用盐酸胍作为 变性剂,该蛋白的变性过程都符合“四态模型”,但这两种变性剂诱导该蛋白去折 叠的途径和机制有较大差异。实验结果表明荧光相图法可以检测蛋白质去折叠的中 间态。用等温滴定量去热法研究了盐酸胍诱导过氧化氢酶去折叠过程的热力学, 25.0 ℃时低浓度盐酸胍诱导该蛋白从天然四聚体转变为部分折叠的激活二聚体的 本征摩尔构象变化焓、Gibbs自由能和熵分别为-69.2 kJ·mol~(-1),6.43 kJ· mol~(-1)和-254 J·K~(-1)·mol~(-1),据此推断盐酸胍通过熵效应和静电效应来 稳定和激活该二聚体。     

四氢呋喃开环聚合的研究——Ⅲ.本体聚合的总生长反应速度常数

用溴丙烯-高氯酸银或癸二酰氯-高氯酸银引发四氢呋喃在0℃进行本体聚合,测得总生长反应速度常数(k_p)分别为0.32×10~(-3)及0.38×10~(-3)升·克分子~(-1)·秒~(-1)。这样低的k_p值认为是由于ClO_4~-抗衡负离子具有强的亲核性所致。在溴丙烯-高氯酸银催化体系配此中加大银盐用量(到过量51％),引发诱导时间缩短,聚合速度加快,而k_p值的增大不明显。     

嗪草酮与脱氧核糖核酸相互作用的研究

采用电化学方法,结合紫外-可见分光光度法、荧光光度法、粘度法和与变性脱氧核糖核酸(DNA)的作用研究了嗪草酮(M)与DNA的作用机制,并通过研究嗪草酮对溴化乙锭-天然DNA体系的影响,以及天然DNA和变性DNA与嗪草酮的作用的不同,得出嗪草酮与DNA分子发生类似溴化乙锭(EB)嵌插作用的结论,形成DNA-M 1∶1型的超分子化合物DNA-M。求得结合常数β=1.8×105L/mol。DNA加入量在1×10-5~1.5×10-4mol/L范围内,DNA浓度与峰电流降低值之间存在线性关系。     

硫代草酸铁(Ⅲ)配合物的酸性水解动力学

本文研究了配合物KCaFe(SC_2O_3)_3·3H_2O在30、40、50℃的Clark-Lubs缓冲溶液中的酸性水解动力学。测定了不同温度和酸度的准一级速度常数K_(th),K_(th)。与[H~( 1)呈直线关系,K_(th)=K_1[H~ ] k_2,K_1是与平衡常数和速度常数k_1有关的常数,k_2为速度常数。提出的反应机制认为是通过不对称配位原子形成共轭酸,再发生铁-硫键破裂,酸性水解的活化参数△H~(?)=78.81±1.18kJ.mol~(-1),△S~(?)=-46.67±0.68J·K~(-1)·mol~(-1),与文献报导的具有不对称配位原子螯合物的酸性催化离解的数值相近。