铈诱导悬浮培养的东北红豆杉细胞发生凋亡

以悬浮培养的东北红豆杉（Taxus cuspidata)细胞为材料,加入一定浓度的Ce^4 ,在不同培养时间取样,超薄切片透射电镜观察发现细胞核膜完整,染色质凝聚,趋边化,核酸电泳显示DNA发生特异性降解并形成阶梯状电泳条带（DNA ladder); 应用TUNEL检测方法发现DNA的3′－OH断端可被特异性标记。Ce^4 能诱导东北红豆杉细胞发生凋亡。     

铈对悬浮培养南方红豆杉细胞可溶性蛋白和紫杉醇合成动态的影响

研究Ce4 对悬浮培养南方红豆杉细胞可溶性蛋白和紫杉醇合成的动态影响,Ce4＋对可溶性蛋白合成和细胞活力的影响存在“分区和分叉现象,低浓度Ce4 (0.010mmol.L^-1)可显著提高可溶性蛋白的合成强度和细胞活力,高浓度Ce4 (5.00mmol.L^-1)对细胞表现为强伤害作用,适宜浓度Ce4 (1.00mmol.L^-1)在短期内可大幅度提高紫杉醇的合成速度,达到最高积累。     

镧、铈对红豆杉细胞生长及紫杉醇合成与释放的影响

研究镧、铈对东北红豆杉悬浮细胞生长及紫杉醇合成与释放的影响。结果表明，当发酵液中稀土浓度较高时，均能明显改变东北红豆杉细胞的生长模式，使细胞生长的延迟期与对数期缩短，平稳期消失，并于衰亡期出现生物量的周期性振荡；在细胞生长的对数期加入稀土化合物能显著提高东北红豆杉细胞合成与释放紫杉醇的量；在加入稀土化合物的同时，补加碳源，有利于细胞合成紫杉醇。     

蛋白质组的分离与分析及其应用进展

蛋白质组学正在成为分析化学研究的热点。本文综述了蛋白质组的高通量分离和分析技术，包括双向凝胶电泳、生物质谱、二维谱新技术和蛋白芯片的发展现状以及蛋白质组学的最新应用进展，并展望了分析化学在蛋白质组学领域今后的发展。     

柠檬酸镧诱导HeLa细胞凋亡差异蛋白组学研究

稀土具有多种多样的生物效应,研究表明稀土具有促细胞增殖和诱导细胞凋亡的双重作用．作用效应与稀土的种类,物种、浓度以及细胞的种类有关,表现出类似Hormesis效应的“低促高抑”现象．如陈兴安等学者曾报道稀土化合物既能促进正常细胞的生长又能抑制癌细胞．最近,一种化合物（Gd（III）-texaphyrinl已经进入三期临床实验,用于非小细胞肺癌脑转移的治疗．稀土促进细胞凋亡可能与以下机制有关：通过与肿瘤细胞DNA特异性结合,影响DNA的合成或复制、影响细胞周期促进凋亡、增加细胞内活性氧（ROS）水平,通过线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡,调节机体免疫机能等．我们前期研究表明,柠檬酸镧对各种癌细胞生长的影响存在浓度依赖性,低浓度无明显作用特征,高浓度抑制癌细胞生长,诱导细胞凋亡;不同肿瘤细胞对稀土的响应不同,宫颈癌HeLa细胞株相对敏感．本文进一步利用差异蛋白质组学方法探讨柠檬酸镧诱导HeLa细胞凋亡的作用机制．双向凝胶电泳（2DE）与基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱（MALDI—TOF／TOF—MS）检测结果显示有14种表达差异明显的蛋白．包括与凋亡和细胞增殖相关蛋白：核仁磷酸化蛋白（NMP）和S100钙结合蛋白（S100－A11）表达上调,线粒体prohibitin蛋白下调;应激和氧化应激相关蛋白：包括热休克蛋白（heat shock 70－kDa protein 9 precursor,HspB8）和超氧化物歧化酶1（SOD1）下调,而NAD依耐的亚甲基四氢叶酸脱氢酶（MTHFD2L）上调;翻译和蛋白降解相关蛋白：包括真核翻译延伸因子2（eFF2）、核糖体蛋白（RPLPO）和钙网蛋白前体变体（calreticulin precursor variant and far upstream element（FUSE）binding protein 1,isoform CRA_b）下调,蛋白酶体proteasome beta 3 subunit上调．蛋白组学的结果提示,[La（cit）2]^3-可能通过线粒体凋亡通路以及调节细胞内氧化应激水平诱导Hela细胞凋亡．进一步用免疫印迹（western blotting）进行验证和检测相关凋亡蛋白,结果显示SOD1、eFF2和Nm23蛋白下调,凋亡相关蛋白caspase-9和PARP激活,促凋亡蛋白Bax表达上升和抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降．另外,柠檬酸镧作用细胞后,细胞线粒体膜电位（△ψM）下降,细胞色素c（cyt-c）释放和H2O2产生增加．线粒体膜通透性改变、膜电位的变化、ROS的生成和促凋亡蛋白的释放是细胞凋亡过程的关键事件．这些结果表明柠檬酸镧通过线粒体凋亡途径诱导HeLa细胞凋亡,这一结论与既往研究相一致,为柠檬酸稀土配合物的抗癌作用机制提供了基础信息．Ca^2＋超载是引起线粒体损伤的重要因素之一,Ca^2＋也能调节电压依赖阴离子通道活性（VDAC）从而调节线粒体通透性转变孔的开放与关闭．柠檬酸镧能解离出镧离子（La^3＋）,La^3＋具有类钙的性质,这可能是镧作用于线粒体引起凋亡的原因之一．当然,有研究表明这种作用具有两面性,低剂量能促进线粒体PTP孔的开放,高浓度表现为拮抗作用或没有影响．另外,VDAC位于线粒体外膜,对线粒体及细胞功能调节非常重要．本研究结果显示,与对照相比,VADC1的表达没有变化,而VADC2没有检测到,说明VADC的表达在柠檬酸镧诱导的细胞凋亡中可能不是一个关键因素．     

Ce4+对不同培养时期红豆杉细胞p-ERK-like的影响

为了探究培养生长不同时期的红豆杉细胞对Ce4 应答差异的机制,采用West-Blot免疫印迹法考察了1 mmol.L-1Ce4 对培养不同时期的红豆杉细胞的细胞外信号调节蛋白激酶磷酸化(p-ERK-like)的表达变化。结果发现,悬浮培养的红豆杉细胞基础p-ERK-like的表达在整个培养周期中呈"M"型变化,分别在培养第五天和第二十一天出现两个高峰,而培养第十一天达到低谷,仅为参比值的77%。在培养的不同时间点应用Ce4 诱导后,细胞的最大p-ERK-like表达量以及到达最大量所需的时间表现出显著的差异,培养第十一天的细胞经Ce4 诱导后其p-ERK-like表达速率达高峰。结果表明,处于不同培养时期的红豆杉细胞其p-ERK-like表达存在显著差异,这可能是导致不同培养时期细胞对Ce4 产生不同应答效应的一个因素。     

镧对肝细胞株7701的增殖和对蛋白质表达的影响

采用MTT法考察了La3 在2×10-4～4×10-7 mol·L-1浓度范围内对体外培养的人正常肝细胞株7701的生长和增殖的影响及其对浓度的依赖关系.结果表明,低浓度的La3 对细胞有明显的促增殖作用,而高浓度的La3 对细胞的生长表现抑制作用.为探讨促增殖的细胞是否正常,利用双向凝胶电泳技术,对La3 诱导增殖的细胞和对照组正常细胞进行蛋白质分离和分析,发现两组细胞蛋白质的表达存在着明显的差异,表示在稀土促进增殖下的细胞可能并非正常,并讨论了La3 促进细胞增殖的可能机制及其过程.     

木香烃内酯诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用机制的研究

研究了木香烃内酯诱导人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡的作用机制.采用流式细胞仪测定不同浓度木香烃内酯(0,2,4,8 μg/mL)作用于MCF-7细胞后细胞凋亡、活性氧(Reactive oxygen species,ROS)含量及线粒体跨膜电位(Mitochondrial transmembrane potential,MTP)的变化,气相色谱-质谱联用(GC-TOF/MS)技术分析加药组与未加药组的代谢差异物.结果表明,木香烃内酯能诱导MCF-7细胞凋亡,并具有浓度依赖性,能够促使ROS含量升高;MTP在2μg/mL木香烃内酯作用时升高,在4和8μg/mL时显著下降;基于GC-TOF/MS的细胞代谢组学研究,最终发现15种代谢差异物.基于上述结果,推测木香烃内酯通过引起ROS含量升高、MTP降低,扰乱线粒体的正常功能,进一步阻碍TCA循环,抑制ATP合成,扰乱了细胞内代谢物的平衡,并引起位于膜间隙的凋亡相关蛋白释放,最终导致MCF-7细胞的凋亡.     

钬离子溶液诱导蚕豆根细胞凋亡的初步研究

运用硝酸钬溶液对蚕豆根尖染毒, 提取根尖细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳; 取根尖压片观察细胞核异常情况; 同时取根尖细胞进行单细胞凝胶电泳. 结果表明, 钬离子诱导了根尖细胞核异常; 在8 mg·L-1剂量下, 彗星细胞尾长和拖尾细胞数量在24 h内随着根尖处理时间的延长而增加, 处理24 h时, 琼脂糖凝胶电泳中出现明显的连续拖尾带型; 处理48 h后彗星拖尾缩短, 琼脂糖凝胶电泳中拖尾带型缩短, 推测可能发生了DNA修复作用或者交联作用. 64 mg·L-1剂量处理24 h, 彗尾缩短且出现核碎裂, 琼脂糖凝胶电泳中未出现拖尾带型. 实验中未观察到细胞凋亡的典型 DNA"梯状带型"和特征性彗星拖尾现象.     

钆对费氏中华根瘤菌抑制效应的蛋白质组分析

运用双向凝胶电泳和MALDI-TOF质谱技术,分析了Gd3+对费氏中华根瘤菌USDA 205的抑制效应。结果表明,经1 mmol.L-1Gd3+处理12 h后,22个蛋白质表达量有显著变化,其中13个蛋白质表达量增加,9个蛋白质表达量下降。这些蛋白质可根据功能分为8类,包括转运蛋白、胁迫相关蛋白、代谢相关蛋白等。     

Effective Solubilization Procedure for Analysis of Silkworm Hemolymph Proteins by Two-Dimensional Gel Electrophoresis

The outstanding capability of two-dimensional gel electrophoresis in separating all types of proteins basically depends on the efficiency of sample preparation. Sample preparation is one of the most critical steps in two-dimensional gel electrophoresis. Unfortunately, due to severe solubility, resolution of protein on gel is usually hampered, and thus, analysis remains a difficult task. However, technically several problems are generally encountered during protein extraction and isoelectric focusing. In the present investigation, we emphasized on evaluation and comparison of six different protein solubilization methods intended for resolving and analyzing silkworm hemolymph proteins by two-dimensional gel electrophoresis. Our findings revealed that the buffer composition of 8 M urea, 4 % 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate, 40 mM Tris base, 65 mM dithiothreitol, and 0.2 % ampholyte can effectively solubilize and yields maximum protein spots.     

基于二维凝胶电泳的蛋白质定量分析技术

基于2DE的蛋白质定量分析技术通过对不同样品蛋白质表达差异的比较,定量地解析了蛋白质的动态变化,为了解和阐明细胞蛋白质功能及活动机制等提供了重要信息。本文简单介绍了传统2DE 的“一个样品一块胶”模式的定量分析技术,指出其因为耗时、繁琐及重复性较差等,在常规2DE定量分析应用中受到了制约;阐述了近年来发展的“多样品共分离”模式的定量技术,包括荧光胶内差示电泳(DIGE)、“不同胶曝光”以及稳定同位素标记技术,这类技术因有效克服了传统技术的局限性,由此提高了定量分析的能力;分别对每种蛋白质定量技术及其优缺点作了比较和评述,并对2DE定量分析技术的未来发展方向做出了展望。     

毛细管区带电泳分析稻瘟病菌诱导水稻叶片蛋白

用毛细管区带电泳分析了受稻瘟病菌侵染的水稻幼苗的叶片细胞蛋白提取物和胞间流液蛋白提取物,用线性聚丙烯酰胺涂渍的毛细管柱来抑制蛋白的吸附。采用数理统计中检验异常值的Ｇｒｕｂｂｓ方法分析结果,与对照实验相比,在叶片细胞蛋白提取物中发现了一种被稻瘟病菌诱导表达的蛋白。     

聚丙烯酰胺双向凝胶电泳法分析变色人发角蛋白组成

报道了一种用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析经Ｓ－羧甲基化修饰的变色人发角蛋白样品的方法，以含８ｍｏ１／Ｌ脲变性凝胶电泳做第一向，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ做第二向。不同处理的变色人发得到有差别的双向电泳图谱，即不同处理方法得到的人发蛋白质组成有差异。以此可做为人发变色处理的一个定性方法。     

正相色谱和反相色谱法分离提纯东北红豆杉中紫杉醇和三尖杉宁碱

以东北红豆杉树叶为原料,采用正相色谱和反相色谱法分离提纯了紫杉醇和三尖杉宁碱。反相色谱中使用了一种新颖的高分子填料。东北红豆杉枝叶经过一次正相色谱分离后,再经两次反相色谱分离,分离得到两种白色针状固体。经1H NMR和13C NMR测试表明,两种物质分别为紫杉醇和三尖杉宁碱,纯度达到98%以上,产率分别为树叶干重的0.0022%和0.0018%,回收率大于70%。     

单细胞的毛细管电泳分析

对单细胞分析化学中毛细管电泳分离技术的进样方式、检测器、应用和前景予以综述,４６篇。     

石英芯片电泳分离检测尿中蛋白的研究

通过对缓冲体系、缓冲液浓度、酸度、乳酸钙浓度、乙胺浓度、电泳电压和进样时间的优化选择，用石英芯片电泳一紫外检测法分离了纯人白蛋白和人运铁蛋白；在75mmol／L硼酸盐（pH10．55）（含0．8mmol／L乳酸钙、1％（φ）乙胺）运行缓冲液中，上述两组分在3min内完全分离；纯人白蛋白和人运铁蛋白的线性范围分别为1．0～15．0g/L和1．0～10．0g／L；检出限（S／N=3）均为0．5g／L，应用于临床尿蛋白分离测定，并与Helena琼脂糖凝胶电泳仪电泳结果进行比较，获得一致结果。     

毛细管凝胶电泳法测定血浆中的癌泰得

为了进行硫代反义寡核苷酸药物癌泰得的药代动力学研究,建立了毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得含量的方法。样品经强阴离子交换柱除去血浆中的蛋白和油脂,通过反相C18柱脱盐,再通过渗滤膜除去残留盐分后,以长度为24个碱基的寡核苷酸作为内标,采用毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得的含量。结果表明,毛细管凝胶电泳测定血浆中癌泰得含量的线性范围为12.5～400 mg/L(r=0.9998),日内、日间的相对标准偏差分别为0.398%～2.46%、2.75%～6.07%,回收率为99.53%～102.1%。毛细管凝胶电泳法用于血浆中反义硫代寡核苷酸的含量测定具有良好的准确性、稳定性和重现性。