同时分离和培养兔外周血平滑肌祖细胞和内皮祖细胞

同时分离和培养兔外周血平滑肌祖细胞(SPC)和内皮祖细胞(EPC),为组织工程膀胱的构建和血管化提供种子细胞.分离新西兰兔外周血中的单个核细胞,分别进行SPC和EPC的分离和培养;同时,培养兔膀胱平滑肌细胞(BSMC)作为对照.细胞爬片,观察细胞摄取Dil-AcLDL和结合FITC-UEA-1的能力;间接免疫荧光染色观察平滑肌肌动蛋白(SMA)、结蛋白(Desmin)、KDR、eNOS和vWF的表达情况;进行细胞增殖实验,观察PDGF-BB,VEGF对SPC和EPC的增殖作用.结果发现,培养1周后出现SPC克隆和EPC克隆,SPC呈梭形,长短不一;EPC形态均一,呈典型的鹅卵石形;培养的BSMC形态均一,为长梭形,呈峰谷样形态.利用克隆环分离SPC和EPC克隆,继续培养可得到高纯度的SPC和EPC.SPC不摄取Dil-AcLDL,不结合FITC-UEA-1;SPC表达SMA、Desmin和KDR,不表达eNOS和vWF.EPC同时摄取Dil-AcLDL和结合FITC-UEA-1;EPC表达eNOS、vWF和KDR,不表达SMA和Desmin.BSMC仅表达SMA和Desmin.PDGF-BB仅能促进SPC增殖...     

外周血内皮祖细胞在去细胞猪主动脉瓣膜上种植的体外观察

为在体外观察外周血内皮祖细胞种植到去细胞猪主动脉瓣上的生长情况.采用TritonX-100联合胰蛋白酶、核酸酶去除猪主动脉瓣膜细胞.从志愿者外周血中分离培养内皮祖细胞,免疫荧光鉴定细胞后.将从外周血培养的EPC种植到去细胞猪主动脉瓣膜上,用HE、免疫组化染色和免疫荧光染色观察种植效果.结果显示猪主动脉瓣内的细胞去除彻底,但纤维支架保存良好.人外周血培养出的细胞,免疫荧光染色示ac-LDL和UEA-1阳性,提示为内皮祖细胞,种植后行HE染色可见到去细胞猪主动脉瓣膜表面单层内皮细胞生长,并且表达von Willebrand因子和CD31.     

兔血管平滑肌细胞和聚羟基丁酯（PHB）的细胞相容性实验研究

探索血管平滑肌细胞和新型可降解材料聚羟基西酯（PHB）的细胞相容性,为组织人工血管的构建寻找理想的支架材料。将组织法体外培养的兔血管平滑肌细胞种植在PHB膜片和PHB三维微孔支架上,在相差显微镜下观察细胞的粘附和生长情况,用MTT法测定细胞粘附率和细胞增殖指数,复合培养7d后进行扫描电镜观察并用流式细胞仪（FCM）测定细胞周期、DNA指数。结果兔血管平滑肌细胞在PHB膜片上粘附率为77％,细胞增殖符合细胞的生长曲线,在PHB三维微孔支架上生长情况良好,并被证实为二倍体细胞。结论是兔血管平滑肌细胞和聚羟基西酯（PHB）的细胞相容性较好,但细胞与材料间的粘附有待进一步改善。     

DiI荧光标记的软骨细胞与支架材料复合后的观察

目的:通过Dil荧光染料标记观察软骨细胞在聚乳酸/乙醇酸共聚物支架(PLGA)体外和体内培养环境中的生长状态,为研究组织工程化软骨探索一种理想的软骨细胞示踪方法.方法:体外分离培养大鼠剑突软骨细胞,应用DiI标记软骨细胞,通过MTT法测定细胞的增殖活性.DiI荧光标记的软骨细胞种植于PLGA支架上分两组:一组体外培养1周,另一组体外培养1周后,再植入同系大鼠大网膜体内培养1周.分别取出细胞一支架复合物,在荧光显微镜下观察体外和体内条件下软骨细胞的荧光表达情况.结果:应用DiI标记不影响软骨细胞的增殖,MTT测定结果显示标记组和对照组的A值未见显著性差异(P>0.05).标记后的软骨细胞显示环状红色荧光,胞核未着色.体外培养和体内培养的软骨细胞一支架复合物,均可在荧光显微镜下观察到红色荧光表达.结论:DiI荧光染料能够有效标记软骨细胞,标记的细胞一支架复合物可直接在荧光显微镜下进行观察,可作为体外和体内构建组织工程软骨的较好的示踪方法.     

DiI荧光标记示踪兔皮肤成纤维细胞修复前交叉韧带损伤的研究

体内采用组织工程方法构建前交叉韧带种子细胞筛选研究,提供了一种理想的细胞标记的方法.体外分离培养兔皮肤成纤维细胞(SF),比较皮肤成纤维细胞使用荧光染料CM-DiI体外标记前后细胞的生长状态、增殖活性以及检测SF复合纤维生物蛋白胶植入前交叉韧带上12周后的荧光表达情况.结果表明CM-Dil标记SF效果良好,标记阳性率高于95%.而标记前后SF增殖活性无明显变化,荧光标记在体内实验12周后仍有表达.从而证实CM-DiI是筛选前交叉韧带组织工程种子细胞筛选研究中细胞标记、示踪的良好标记物.     

兔尿道海绵体平滑肌细胞的原代培养及鉴定

目的为构建组织工程化尿道提供种子细胞。方法切取新西兰兔阴茎头．采用组织块贴壁培养法体外原代培养，光镜、HE染色等观察细胞形态，MTT法作生长曲线间接反应细胞增殖能力，以及免疫组化法鉴定细胞本质。结果经10～14d养后，培养瓶底铺满梭状细胞，呈明显的“峰一谷”样生长。免疫组化法鉴定确认为尿道海绵体平滑肌细胞。结论兔阴茎头平滑肌细胞组织块贴壁法培养简便可靠，细胞可大量扩增，可为于组织工程尿道构建的研究提供种子细胞。     

绿色荧光蛋白在细胞标记及活体示踪领域的应用

随着生命医学研究的不断深入,在微观世界探讨个体细胞的生理功能以及在人体内环境中观察和研究目的细胞与其他细胞间的相互作用时,就离不开细胞标记和活体示踪技术。而在众多细胞标记方法中,绿色荧光蛋白（GFP）凭借其标记细胞效率高,标记强度野强、示踪灵敏度高等优点近年来已经成为越来越多的科研工作者的首选细胞标记和示踪方法。现就绿色荧光蛋白在细胞标记及活体示踪领域的应用作一综述。     

As2O3对脐血红系祖细胞HOXB6基因表达的调控作用

目的：探讨脐血造血干祖细胞向红系祖细胞增殖过程中HOXB6mRNA表达及As2O3对HOXB6mRNA表达的影响．方法：①采用外培养技术,以As2O3干扰造血干祖细胞,观察HSPC经促红素诱导后,CFU-E集落生成情况．②采用实时荧光定量HR技术检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达．结果：①造血于祖细胞红系祖细胞增殖过程中,各组细胞HOXB6基因均表达,②与正常对照组比较,As2O3可下调HOXB6基因的表达．结论：①HOXB6可能是造血干祖细胞向红系祖细胞增殖分化中的调控基因之一．②As2O3能下调HOXB6基因的表达．     

子宫平滑肌肿瘤502例临床病理分析

探讨子宫平滑肌瘤的发病年龄、发病部位、组织学分型、合并症、病因;复习502例子宫平滑肌肿瘤石蜡切片,根据WHO子宫平滑肌肿瘤新分类进行组织学分型;502例子宫活检,病变部位有三种:肌壁间多见,浆膜下,粘膜下少见。发病年龄多在40~50岁。组织学有三种分型:平滑肌瘤500例(99.6%),其中普通平滑肌瘤488例,特殊组织类型平滑肌瘤12例,(富于细胞型11例,奇异型1例),平滑肌肉瘤1例(%),恶性潜能未定1例。合并症有子宫内膜增生、腺肌瘤或腺肌症、卵巢囊肿、子宫内膜息肉、畸胎瘤、妊娠。提示子宫平滑肌瘤发生与雌激素水平升高有关;子宫平滑肌肿瘤虽形态有异,但绝大多数为良性经过,子宫平滑瘤的合并症更进一步证实子宫平滑肌瘤发生与雌激素水平升高有关。     

当归注射液对兔主动脉平滑肌细胞中增殖细胞核抗原表达的影响

目的：观察当归注射液对平滑肌细胞（ Ｓ Ｍ Ｃ） 中增殖细胞核抗原（ Ｐ Ｃ Ｎ Ａ） 表达的影响。方法：用免疫组织化学 Ｌ Ｓ Ａ Ｂ 法检测培养的兔主动脉 Ｓ Ｍ Ｃ 中 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 的表达,同时测定培养液中超氧化物歧化酶（ Ｓ Ｏ Ｄ） 、脂质过氧化物（ Ｌ Ｐ Ｏ） 、前列环素（ Ｐ Ｇ Ｉ２） 及环磷酸腺苷（ｃ Ａ Ｍ Ｐ） 的含量。结果：当归注射液能增加 Ｓ Ｏ Ｄ 活性,降低 Ｌ Ｐ Ｏ 和升高 Ｐ Ｇ Ｉ２ 、ｃ Ａ Ｍ Ｐ 水平,抑制 Ｓ Ｍ Ｃ 中 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 的表达（ Ｐ＜ ００５ ～００１） 。结论：当归有抑制 Ｓ Ｍ Ｃ 增殖的作用。     

~(131)I-标记大黄素在动物体内的药物动力学和组织分布

本文采用同位素示踪法研究尾静脉注射131I-标记大黄素在大鼠体内的药物动力学和小鼠体内的组织分布.在NBS催化剂作用下,将131I-NaI与大黄素反应得到产物2-131I-大黄素,放射性化学产率为96%,放射性化学纯度95%,且标记物在大鼠血浆中24h内稳定.131I-标记大黄素在大鼠体内的药物动力学过程符合一室模型,半衰期(t1/2)为0.25h,清除率(CL)为0.007L/(h·kg).小鼠的组织分布特征为肺部和肾脏最高,脑组织最低,其它组织水平基本相似.研究结果表明静脉注射131I-标记大黄素后在体内分布和清除速度较快,主要经过肾脏排泄,且不易透过血脑屏障.     

兔组织工程化骨膜冻存前后异体移植早期外周血T淋巴细胞亚群的检测

本实验应用MSCs及成骨诱导培养的MSCs作为种子细胞与SIS复合构建组织工程化骨膜并冻存,与未冻存的组织工程化骨膜同时植入同种异体新西兰兔皮下,通过对外周血T淋巴细胞亚群的检测,初步探讨其免疫原性。本研究结果表明,以同种异体MSCs及经成骨诱导后的MSCs构建组织工程化骨骨膜冻存前后植入异体兔体内其免疫反应水平低。     

聚丙烯酰胺凝胶电泳体系中蛋白质的荧光标记分析

在室温下,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,分离经荧光胺或对氯荧光胺荧光标记的蛋白质样品,可在2.5小时内完成蛋白质样品的分离和其区带的鉴定。耗时是传统方法的四分之一,而且荧光图象清晰、灵敏度较高。     

rhBMP-2对陈旧性兔关节软骨缺损的修复作用

利用注射型活性材料重组骨形态发生蛋白-2（recombinant human bone morphogenic protein 2,rhBMP-2）修复兔关节软骨,观察其治疗效果.将12只8周龄成年大白兔随机分为2组,均行手术切开双膝髌股关节面制备全层软骨缺损模型,缝合创口后分笼饲养4周,使之成为陈旧性关节软骨缺损模型.再次手术切开关节腔,清除原缺损区纤维组织,钻通骨髓腔.2组分别接受如下治疗：A组应用rhBMP-2纤维蛋白胶,B组单纯生物蛋白胶治疗.分别于10、14、18周处死动物,观察大体和形态学特征,组织学评分.结果A组于10、14周时,软骨缺损被白色半透明坚硬组织平滑修复,富有光泽,与正常软骨边界清楚,18周时修复组织与正常软骨边界模糊,质地坚硬,表面平滑光润;B组于10、14、18周时均未见软骨修复.组织评分A组明显优于B组（P〈0.01）.结论：rhBMP-2可以有效修复兔关节软骨的缺损,为组织工程化软骨的临床应用提供了实验依据.     

心脉隆胶囊对原代大鼠血管平滑肌细胞形态损伤的保护作用

目的:探讨大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)的原代培养方法及观察心脉隆胶囊(XMLJ)对由H2O2诱导VSMCs细胞形态损伤的保护作用。方法:采用组织贴块法培养原代大鼠VSMCs,继而用62.5μmol.L-1H2O2损伤细胞,通过HE染色观察XMLJ对VSMCs形态损伤的保护作用。结果:200μg.mL-1的XMLJ对过氧应激造成的VSMCs形态损伤,具有明显的保护作用,细胞形态接近于正常组VSMCs。结论:组织贴块法培养大鼠VSMCs方便简单,XMLJ对H2O2诱导的VSMCs细胞形态损伤具有一定的保护作用。     

毛细管电泳定量分析兔血管平滑肌细胞内外源基因RT-PCR产物

目的 应用毛细管电泳的方法定量分析体外培养的兔血管平滑肌细胞中外源基因Mrna的表达水平.方法 构建兔特异性金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP-3)基因重组质粒载体,通过阳离子脂质体介导转染兔平滑肌细胞;实验分为重组质粒组、空质粒载体组、正常对照组;转染48小时后抽提各组总RNA,按照RT-PCR方法进行扩增;对重组质粒载体进行双酶切,提纯TIMP-3DNA并进行浓度测定,按照已知浓度对其进行毛细管电泳,绘制TIMP-3DNA标准浓度曲线图;对RT-PCR产物分别进行琼脂糖凝胶电泳及毛细管电泳,观察结果并依据标准浓度曲线公式计算RT-PCR产物的含量.结果 琼脂糖凝胶电泳中,重组质粒组在TIMP-3基因相应的碱基位置出现明显的阳性条带,而其他两组未见明显的条带;毛细管电泳结果显示重组质粒组TIMP-3DNA含量明显高于正常对照组及空载体质粒组,P＜0.05,差别具有显著性意义.讨论 CE是一种高效的定性定量方法,RT-PCR产物可以用毛细管电泳直接分离定量.     

我国实施房地产证券化的可行性分析

我国推行房地产证券化的总体条件已经基本具备，但有待进一步完善。随着我国市场经济体制改革的不断深入，实施房地产的证券化条件将日益成熟。     

农村残疾人群体组织的可行性分析

随着农村经济的快速发展,现存农村残疾人的社会救济方式已跟不上农村残疾人对基本公共服务均等化诉求的脚步。农村残疾人自发组织起来,或是被第三方协助组织起来共同发展已是必然的趋势。本文对农村残疾人群体自我组织或是被组织起来协同发展这一扶助方式的可行性进行了分析。     

农村残疾人群体组织的可行性分析

随着农村经济的快速发展,现存农村残疾人的社会救济方式已跟不上农村残疾人对基本公共服务均等化诉求的脚步.农村残疾人自发组织起来,或是被第三方协助组织起来共同发展已是必然的趋势.本文对农村残疾人群体自我组织或是被组织起来协同发展这一扶助方式的可行性进行了分析.     

某工程蓄冷方案可行性分析

本文对某工程蓄冷方案进行了可行性分析研究。