介质的物化性质对PstⅠ和PstⅠ*活性的影响

利用限制性核酸内切酶PstⅠ在不同的有机介质中的催化反应,研究了水含量、相对粘度,介电常数和渗透压等介质的物化性质对PstⅠ原活性和星号活性的影响.结果表明这4种物化性质对PstⅠ原活性和星号活性的影响恰好相反.     

9个PstI接头片段的合成及其酶反应研究

采用固相亚磷酸三酯法和化学与酶促相结合的方法合成了９个ＰｓｔＩ接头片段，并对它们进行了酶切反应研究．结果表明：ＰｓｔＩ识别序列中尿苷的存在只降低其互补链的切割程度，对其本链没有影响；ＰｓｔＩ切割底物是按两步单股切割机制进行，作用的最小底物是含有识别序列的８～１２聚脱氧核糖核苷酸，且对底物中识别序列两边的碱基对数目有一定要求；ＰｓｔＩ识别序列中的二个胞苷在酶反应中起的作用是不一样的     

双酶水解对豆芽蛋白潜在致敏性和理化性质的影响

以豆芽蛋白水解度为指标,探讨双酶水解条件对豆芽蛋白水解度的影响,同时采用体外IgE结合力评估酶解产物的潜在致敏性,并检测水解产物的部分理化性质。结果表明:不同蛋白酶对豆芽蛋白的水解能力不同,其中,碱性蛋白酶、中性蛋白酶依次分步水解时水解度最高。该双酶分步水解条件为:底物浓度为8%,第一步水解采用碱性蛋白酶,酶与底物比为1:20,酶解4 h后灭酶;然后加入中性蛋白酶,酶与底物比为1:10,继续水解4 h后终止反应。豆芽蛋白酶解产物几乎无潜在致敏性,与大豆蛋白和豆芽蛋白相比,酶解产物中分子量低于2 000 Da的肽含量升高,乳化性增强,溶解性明显增大,而乳化稳定性降低。     

氧化型二硫苏糖醇对兔肌肌酸激酶的构象和活性的影响

采用利用内源荧光、1-苯氨基萘-8-磺酸（ANS）荧光、酶活性的测定以及动力学分析等手段，研究肌酸激酶在氧化型的二硫基苏糖醇（DTT）溶液中的结构与活性的变化．结果表明：随着氧化型DTT浓度的增加，肌酸激酶的活性逐渐丧失，直至完全失活，并伴随着构象的变化．肌酸激酶起初微小的结构变化就会导致酶活性的迅速丧失，而且其的失活先于明显可测的整体构象变化，酶分子的活性部位处于柔性区域内．另外，随着氧化型DTT浓度的提高，肌酸激酶的内源荧光发射峰位明显地红移，外源ANS荧光强度显著增强，即酶分子的疏水面加大，该结果暗示了酶蛋白的构象发生了改变．动力学分析表明，氧化型DTT对肌酸激酶的氧化过程是一个慢的可逆抑制过程，其反应的表观速率常数A的大小与氧化型DTT的浓度无关，因此是非络合型的．