壳聚糖与丙烯腈接枝共聚物的制备及固定化α-淀粉酶研究

本文以过硫酸钾/亚硫酸氢钠为引发体系,制备了丙烯腈接枝壳聚糖的共聚物,并以 其为载体固定化α-淀粉酶,探讨了固定化酶的最佳制备条件和固定化酶的性质,并与游离 酶、壳聚糖作为载体的固定化α-淀粉酶进行了比较,结果表明,丙烯腈接枝壳聚糖共聚物 是固定化α-淀粉酶的优良载体。     

磁性壳聚糖微球用于酶的固定化研究：Ⅲ磁性壳聚糖微球的活化及其对脲酶的固化研究

以环氧氯丙烷活化的磁性壳聚糖微球作为载体、对脲酶进行固定化研究,结果表明,在25℃时,活化磁性壳聚糖微球对脲酶的固定化在2h时就达到了最大值,固定化酶和自由酶的最适温度都在65℃左右,自由酶和固定化酶的米氏常数Km值分别为0．042mol/L和0．008mol/L,固定化酶的Km降低了5倍。     

壳聚糖与丙烯腈接枝共聚物的制备及固定化a—淀粉酶研究

主以过硫酸钾／亚硫酸氢钠为引发体系,制备了丙烯腈接枝壳聚糖的共聚物,并以其载体固定化a-淀粉酶,探讨了固定化酶的最佳制备条件和固定化酶的性质,并与游离酶、壳聚糖作为载体的固定化a-淀粉酶进行了比较,结果表明,丙烯腈接枝壳聚糖共聚物是固定化a-淀粉酶的优良载体。     

微球载体固定化碱性磷酸酶的底物／产物吸附现象

微球载体固定化碱性磷酸酶的底物／产物吸附现象史国利，马建标，何炳林（南开大学高分子化学研究所，天津，３０００７１）关键词碱性磷酸酶，固定化，底物，产物，吸附在酶固定化研究中载体对底物和产物的吸附会造成载体内部和载体周围底物和产物的浓度不均一［１］，从...     

辐射聚合固定化α—淀粉酶的研究

用低温辐射聚合法将α-淀粉酶固定到聚甲基丙烯酸-β-羟乙酯载体上。研究了低温辐射聚合固定化的条件;讨论了不同固定化酶对淀粉转化成还原糖的相对活性及其重复使用的稳定性;探索了载体微孔结构与固定化酶活性的关系。结果表明,在真空体系内,酶用量≥250μg/mL、单体浓度在30％～40％之间,于-50℃～-55℃范围内进行5.6×10~5rad剂量的辐射聚合,所得固定化酶重复使用10多次其相对活性仍可保持在30％以上。     

磁性壳聚糖微球用于脲激酶的固定化研究I. 磁性壳聚糖微球的制备和表征

为制备用于固定化酶的磁性壳聚糖微球,本文首先用化学共沉淀法制备了磁流体,随后在磁流体存在下进行壳聚糖和戊二醛的共聚反应。结果表明,磁流体中的Ｆｅ３Ｏ４以水化物的状态存在,其含量为２．０４％,平均粒径为０．２～０．５ｕｍ左右;磁性壳聚糖微球的弱碱交换量随交联度的增加而减小,质量磁化率与微球粒径成反比。该微球具有良好的磁响应性,在外加磁场下可被快速的从溶液中分离出来。     

京尼平交联磁性壳聚糖微球的制备及其脂肪酶的固定化

采用反相悬浮法与溶胶凝胶法结合制备磁性壳聚糖微球,并以此为载体,京尼平为交联剂,脂肪酶为模型酶进行固定化,研究了酶固定化的最优条件和固定化酶的性质。结果表明,在京尼平浓度为0.6 g/L、交联温度为55 ℃、交联时间8 h,固定化酶的比活力最大,为4.31 U/g。固定化酶在25~35 ℃,pH值在8.0有最大活性,其米氏常数Km为0.26 mol/L。同时,固定化酶具有良好的热稳定性及pH稳定性,可重复利用,且能进行磁分离。     

乳胶微球固定化碱性磷酸酶的研究

本文系统地研究了生物素化碱性磷酸酶在微球载体上的固定化，确定了在胺化聚苯乙烯微球上固载的最适条件，并对所得固相酶的最适ｐＨ值，最适温度，米氏常数Ｋｍ值等性能进行了测试，结果发现生物素化碱性磷酸酶固定于胺化微球后其最适ｐＨ值从９．５降低至９．３；酶的最适温度没有发生变化，但范围稍加宽；在５０℃温度下处理９０分钟，固相酶活化保持在４０％，稳定性增强，固定化后酶的Ｋｍ减小。     

磁性壳聚糖微球的制备及其用作漆酶固定化载体

磁性壳聚糖微球的制备及其用作漆酶固定化载体;壳聚糖;固定化;漆酶;酶活力     

P（DMAA-co—AM）水凝胶制备及其固定a-淀粉酶研究

采用氧化还原引发体系,水溶液聚合法制备P（DMAA-co-AM）水凝胶,并以其作为载体固定a-淀粉酶。采用单一变量法研究交联剂（N,N＇-亚甲基双丙烯酰胺）用量、引发剂（过硫酸铵）用量、单体浓度和单体配比对凝胶性能的影响。以水凝胶的最大平衡溶胀度为指标,得出制备P（DMAA-co-AM）水凝胶的优化条件：交联剂用量为0．3％,引发剂用量为0．6％,单体浓度为20％,N,N’-二甲基丙烯酰胺与丙烯酰胺的摩尔比为2：1。在优化条件下,采用原位聚合法固定a-淀粉酶,测定不同单体配比的P（DMAA-co-AM）水凝胶固定化a-淀粉酶的活性。     

信号肽对OPMA在枯草杆菌中的分泌表达及其催化活性的影响

将编码枯草杆菌BS168的amyE信号肽(S)的基因与编码多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的基因重组, 分别构建了分泌表达多功能淀粉酶OPMA-N和OPMA-G的重组载体pMA5-OPMA-SN和pMA5-OPMA-SG, 并分别在枯草杆菌BS168中实现了OPMA-SN和OPMA-SG的有效分泌表达.SDS-PAGE分析表明, 该信号肽的引入提高了异源蛋白的分泌量, OPMA-SN和OPMA-SG的分泌水平(53%和67%)比OPMA-N和OPMA-G(45%和58%)明显提高, 但此信号肽在分泌表达OPMA-N或OPMA-G后不能被有效切除.活力分析表明, OPMA-SN(5.17 U/mg)和OPMA-N(4.57 U/mg)的活力水平与分泌水平一致, 但OPMA-SG(4.50 U/mg)和OPMA-G(4.65 U/mg)的活力水平却与分泌水平呈反相关性.通过分析OPMA-SN和OPMA-SG分子的空间构象发现, 信号肽的存在不影响OPMA-N的活性部位构象, 但影响OPMA-G的活性部位构象, 从而导致OPOMA-G的催化活性下降.     

壳聚糖固定L-天门冬酰胺酶的研究

研究了以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，固定化Ｌ－天门冬酰胺酶的最适条件，并对固定化天门冬酰胺酶的理化性质进行了初步探讨。分别从不同固定化程序、缓冲液及保护剂等方面进行了固定化天门冬酰胺酶的条件优化；固定化酶的活力回收可达２０％左右。固定化酶的最适范围变宽，由游离酶的最适ｐＨ＝４～６变为ｐＨ＝６～１０。连续使用６次后仍可基本维持固定化酶的活力。固定化酶对胃蛋白酶的水解性也较游离酶大大提高。     

木瓜蛋白酶的固定化研究

木瓜蛋白酶具有广谱的蛋白水解酶活性,广泛地应用于啤酒、饮料的澄清,肉类嫩化和复配消化药物等方面。近年来,为了扩大该酶在啤洒澄清上的应用,一些研究者致力于探索该酶的固定化研究,以提高该酶的利用效率,降低生产成本。     

化学修饰木瓜蛋白酶的固定化及性质研究

在底物保护和无底物保护下,用丁二酸酐对木瓜蛋白酶进行化学修饰,以三硝基苯磺酸法测定修饰酶的平均氨基修饰度,以棉布为载体,戊二醛为交联剂,对修饰前后的木瓜蛋白酶分别进行固定化.考察了温度、pH和表面活性剂SDS对化学修饰的固定化木瓜蛋白酶活力的影响,并与固定化天然木瓜蛋白酶进行了比较.研究表明,化学修饰固定化木瓜蛋白酶的最适反应温度为80℃;最适pH为9.0;在SDS浓度为20mg/mL时酶活也仍能保持在40%左右;米氏常数为187g/L.与天然的固定化酶相比,化学修饰的固定化木瓜蛋白酶的热稳定性、耐碱性和耐洗涤性得到了显著提高.     

Immobilization of Horseradish Peroxidase on Nonwoven Polyester Fabric Coated with Chitosan

The immobilization of horseradish peroxidase (HRP) on composite membrane has been investigated. This membrane was prepared by coating nonwoven polyester fabric with chitosan glutamate in the presence of glutraldehyde as a crosslinking agent. The physico-chemical properties of soluble and immobilized HRP were evaluated. The soluble HRP lost 90% of its activity after 4 weeks of storage at 4°C, whereas the immobilized enzyme retained 85% of its original activity at the same time. A reusability study of immobilized HRP showed that the enzyme retained 54% of its activity after 10 cycles of reuse. Soluble and immobilized HRP showed the same pH optima at pH 5.5. The immobilized enzyme had significant stability at different pH values, where it had maximum stability at pH 3.0 and 6.0. The kinetic properties indicated that the immobilized enzyme had more affinity toward substrates than soluble enzyme. The soluble and immobilized enzymes had temperature optima at 30 and 40°C and were stable up to 40 and 50°C, respectively. The stability of HRP against metal ion inactivation was improved after immobilization. Immobilized HRP exhibited high resistance to proteolysis by trypsin. The immobilized HRP was more resistant to inactivation induced by urea, Triton X-100, and organic solvents compared to its soluble counterpart. The immobilized HRP showed very high yield of immobilization and markedly high stabilization against several forms of denaturants that offer potential for several applications.     

壳聚糖基多功能纳米药物载体的体外研究

制备了一种壳聚糖基多功能纳米药物载体系统, 并探讨了其体外释药性质. 合成了甲氨蝶呤-壳聚糖偶联物(MTX-CS), 甲氨喋呤(MTX)的取代度为6.3%; MTX-CS具有两亲性, 在水性介质中能自组装形成纳米粒子, 平均粒径为(269.5±18.3) nm, zeta电位为(25.7±0.9) mV. MTX-CS纳米粒子能有效包载抗血管生成药Combretastatin A-4(CA-4), 当药物/载体材料投料比为1∶4 时, 载药量为15.7%, 包封率为62.8%. 体外释放实验结果显示, CA-4释放较快, MTX释放缓慢, 有利于发挥2种药物的协同抗肿瘤作用.     

Effect of organic and inorganic acids on chitosan/glycerophosphate thermosensitive hydrogel

The influence of organic and inorganic acids on chitosan/glycerophosphate (CS/GP) hydrogel has been investigated by dissolving chitosan in different acids. The results of gelation showed that all of the chitosan dissolved in monovalent acid solutions (i.e., formic, acetic, propionic, butyric, isobutyric, lactic, nitric, hydrochloric, and chloroacetic acid), when neutralized by GP solution, could transform into hydrogel after 2–5 min at 37 °C, while those dissolved in multivalent acids failed in gel formation. The inner structures of CS/GP hydrogels prepared with monovalent acids depended on the ionic strength and chain length of acids. Morphological examination by scanning electron microphotography demonstrated that large pores occurred during the gel-forming process, and the aperture size was also related to different acids. The cytotoxicity studies indicated that CS/GP systems prepared by dissolving chitosan in tested acids except chloroacetic acid were nontoxic to mouse embryonic fibroblasts and Hela cells.     

壳聚糖及其衍生物水凝胶的研究进展

综述了近年来壳聚糖及其衍生物水凝胶的研究工作进展,介绍了水凝胶的制备方法和应用,尤其是在生物医药方面的广泛应用,并对其未来进行了展望。     

溶胶凝胶复合材料的研究及对生物酶的固定

研究了一种新型的氧化铝/聚乙二醇（Al2O3/PEG）溶胶凝胶复合材料,利用红外光谱、探针电镜对材料的性能进行了表征。试验结果表明：复合膜中含有大量的羟基和氢键,且两种组分形成互穿网络,该材料刚柔相济的特点使其适合于做生物传感器的固定化材料。PEG是极性高聚物,在溶胶凝胶的体系中,可以起到加速反应及防止膜开裂的作用。Al2O3/PEG复合材料对酶具有较好的生物相容性和较高的稳定性,将生物酶固定其中制备成的生物传感器具有良好的反应活性,同时,还证明了这种生物传感器具有稳定性和灵敏度高的特点。