一种家蝇幼虫热稳定抗菌肽的分离纯化

本文对家蝇三龄幼虫进行了超声处理，以诱导其产生抗菌物质。通过高温处理、酸性处理后，抗菌物质粗提中大量的热不稳定蛋白和酸性蛋白发生沉淀而被去除。将经过上述处理的粗提液经过一步Sephadex G-75凝胶过滤析、两步CM－Sepharose阳离子交换层析后，得到一个单一的具有抗阳性球菌的峰。SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示为一条带，相对分子质量大约为7000，将其命名为H1．H1为一种热稳定的碱性抗菌多肽。     

一种快速测定天麻素的方法

旨在建立一种实验室快速、简便地测定天麻素的方法.采用紫外分光光度法（UV）在220 nm波长下进行天麻素的紫外检测,并采用高效液相色谱法对该结果进行验证,结果表明：采用紫外分光光度法检测的结果与采用高效液相色谱法检测的结果并无显著性差异（P〉0.05）,因此说明在220 nm波长下进行天麻素的紫外检测是一种简便、快捷且准确的方法.     

一种大规模、快速的幽门螺杆菌脲酶分离纯化方法研究

幽门螺杆菌定植于人胃黏膜并产生大量的脲酶,报道一种大规模、快速的脲酶纯化方法.脲酶用去离子水振荡及冻融法抽提,采用Q Sepharose FF阴离子交换层析,Phenyl Sepharose HP疏水相互作用和SOURCE30S阳离子交换层析等方法纯化得到脲酶,通过酚红脲酶试剂检测酶活.总蛋白回收率为2.58%,纯化后脲酶纯度大于95%,SDS-PAGE电泳显示脲酶是由相对分子质量66 000的A亚基和30 000的B亚基组成.     

一种快速有效检测SSR标记的非变性聚丙烯酰胺凝胶的银染方法

聚丙烯酰胺凝胶银染法是一种具有高分辨率检测SSR标记的有效方法,然而传统的银染方法存在操作步骤较多、所需时间较长及试剂种类与用量较多等不足.本研究利用菜心和烟草SSR标记为研究对象,建立一种能快速有效检测其PCR扩增产物的非变性聚丙烯酰胺凝胶的银染方法.该方法包括染色和显影2个主要操作步骤,整个银染流程耗时6~7 min,只需要AgNO_3、NaOH和甲醛3种试剂,所检测SSR标记的DNA条带清晰、易辨.与其他银染法相比,本研究建立的银染法具有易于操作、耗时少、所需试剂种类和用量少及检测效果好的优势.     

一种快捷有效的构建cDNA文库的方法

构建cDNA文库是研究基因组功能基因一种有效的手段，传统的建库方法通常需要在双链cDNA两端分别加上带限制性酶切位点的接头序列，通过酶切使之产生与质粒匹配的粘性末端，然后与质粒连接构成文库。本文介绍一种简单而且不需要核酸内切酶的构建cDNA文库的方法。该方法的主要步骤包括：（1）通过反转录合成cDNA第一条链，通过置换底物的方式在cDNA3’末端合成接头序列。（2）利用cDNA两端的接头引物，通过TaqDNA合成酶PER扩增合成cDNA第二条链。（3）将PCR产生的双链cDNA直接与T-载体连接。（4）将连接物转化大肠杆菌，得到cDNA文库。利用本方法，我们成功构建红树植物红海榄的cDNA文库。PCR结果显示插入的片段分布在O．5～3．0kb之间，大部分cDNA的长度在500—1000bp之间，表明cDNA具有较好的完整性。本方法具有操作简单、高效率、低成本、RNA模板需要量少的特点，而且适用于任何高等生物RNA样品。     

乳清蛋白肽的酶法制备、分离纯化及活性评价

以抗氧化活性及蛋白质回收率为筛选指标对乳清蛋白肽酶解工艺进行优化,用层析柱对酶解液进行逐级分离纯化,并对其分子质量进行检测.研究结果表明:利用胰酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶酶解制备乳清蛋白肽,最佳用酶为碱性蛋白酶、最适底物含量为4.0%、最适加酶量为8000U/g、最佳酶解时间为4h;酶解液经DEAE-52纤维素层析后得到的A组分抗氧化活性最好,其还原力为0.320 0±0.004 1,DPPH自由基清除率为6.58%±0.36%;A组分再经Sephadex G-15葡聚糖凝胶层析柱分离纯化后得到组分G,其DPPH自由基清除率为6.73%±0.083%;组分G的主要成分为分子质量378 u的肽段,其一级氨基酸组成为赖氨酸(Lys)、亮氨酸(Leu)及丝氨酸(Ser).     

草鱼基因组随机扩增多态性引物及多态性位点的筛选

为了建立草鱼基因组DNA多态性分析的指标体系,应用RAPD技术,从180条10碱基随机引物中筛选出了31条能扩增出多态性DNA片段的引物。用这31条多态性引物共扩增出了327条重复性好、带型清晰、分辨率高的谱带。扩增产物的片段大小范围在400—2000bp之间。单一引物扩增条带为5—14条。用这些多态性引物在草鱼基因组DNA中检测到了93个多态性位点,并对这些多态性位点上的等位基因频率进行了统计分析。这31条多态性引物和所检测到的93个多态性位点初步为草鱼基因组的多态性分析提供了可靠的分析指标体系。     

一种适用于绿僵菌克隆筛选的DNA批量快速提取方法

基因组DNA的提取是最基本的分子生物学实验技术,介绍了一种适用于绿僵菌克隆筛选的DNA批量快速提取方法.研究结果表明:使用改良的察氏琼脂培养基(CDA)代替常用的土豆葡萄糖琼脂(PDA)培养绿僵菌,以钢珠振打破碎菌丝,配以简化的酚氯仿抽提操作,可以高效地提取高质量的真菌基因组DNA.本方法中,CDA菌落生长需2～3 d,双样品提取耗时约15 min,每个菌落可获得DNA数百纳克,片段长度在10 kb左右,电泳条带清晰可见.     

不结球白菜SSR引物的高效开发及其通用性研究

利用改进的ISSR-PCR分离不结球白菜基因组微卫星,进行两步PCR,分别设计出SSR两端引物IP2和IP3（即SSR引物对）,SSR引物产率为12%,明显高于传统方法.不结球白菜SSR序列以（GA）n为主,占70%.将69对SSR引物用于芸苔属其它8种作物的扩增,97%引物有显著扩增,扩增率最高的为四倍体白菜和甘蓝（85.5%）,最低的为青花菜（49.3%）.10对为通用引物,在所检测的8种作物中片段大小一致,其余的扩增片段和数目差异较大,表现出较为丰富的多态性.尤其是在C基因组的甘蓝和花椰菜上,最多可检测到5个位点,表明运用lSSR-PCR开发出的引物多态性较高.     

一种河口沉积物总DNA的高效提取方法

研究主要目的是从河口沉积物中提取高质量DNA,为后期应用分子生物学技术研究河口沉积物微生物功能基因及种群分析等奠定基础。用CTAB-SDS-冻融法,样品预处理-CTAB-SDS-冻融法,样品预处理-CTABSDS-冻融-DNA重沉淀法和土壤总DNA提取试剂盒法提取3种河口沉积物总DNA,通过DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA纯度和浓度及16S rDNA的PCR扩增分别对这4种方法进行评价。结果显示,样品预处理-CTABSDS-冻融法-DNA重沉淀所提取的DNA质量最高,可以用于后续的分子生物学研究。     

从土壤中快速提取纯化DNA方法的建立

比较了从土壤中提取及纯化DNA的不同方法,确立了TENS-乙酸铵提取方法和PVPP柱层析的纯化方法.结果显示:TENS-乙酸铵提取方法对不同土壤均有较好的提取效果,DNA片段长度在23.1 kb以上,且无明显降解;PVPP柱层析的纯化方法比胶回收纯化方法的DNA回收效率高、质量好,可用于PCR扩增.     

一种基于增量的整数型画圆算法

提出了基于线段的增量画圆算法,本算法可以一次画多个点.除初始化部分外,算法中只使用加、减和移位运算.本算与传统算法相比可大大提高画圆的速度.     

一种基于手动芯片点样仪的快捷高效的转基因植物PCR-dot-blot鉴定法

本论文报道一种快捷高效的PCR—dot—blot新方法．该方法利用手动芯片点样仪将微量PCR产物（约100pgDNA）点样,并采用North2 South Biotin Random Prime DNA Labeling and Detection Kit（PIERCE）完成快速斑点杂交．通过鉴定转基因烟草证明这种方法是可行而有效的．这种新方法节省材料,效率极高,特别适合大批量鉴定转基因植物．