葛根素对α-糜蛋白酶的结构及其活性影响

应用荧光光谱、圆二色光谱及酶活性检测等方法研究了葛根素与α-糜蛋白酶的相互作用,结果表明:葛根素对α-糜蛋白酶的荧光猝灭机理为非辐射能量转移的静态猝灭,两者之间的相互作用力主要是范德华力或氢键作用力,根据F(o|¨)rster非辐射能量转移理论测得葛根素在α-糜蛋白酶中的结合位置与色氨酸残基间的距离为3.67 nm;通过圆二色谱(CD)光谱研究表明葛根素能够引起α-糜蛋白酶的二级结构发生变化;酶活性试验表明葛根素可作为α-糜蛋白酶的抑制剂。     

α-糜蛋白酶催化合成喹啉衍生物

首次以α-糜蛋白酶为生物催化剂,通过2-氨基芳基酮和α-亚甲基酮之间的Friedl?nder缩合反应,合成了11种喹啉衍生物,取得了中等至优异的产率.该方法操作简便,条件温和,不仅拓展了蛋白酶非专一性及生物催化的应用范围,对推动绿色化学的发展也具有积极意义.     

α-糜蛋白酶催化合成β-脲基巴豆酸酯

β-脲基巴豆酸酯是合成6-甲基嘧啶二酮衍生物及3,4-二氢嘧啶二酮衍生物的重要中间体,在生物制药中有着广泛的应用.由于酶具有绿色、安全、高效的催化特性,采用α-糜蛋白酶为生物催化剂,以N,N-二甲基甲酰胺为反应介质,37℃条件下,通过1,3-二羰基化合物和脲的缩合反应,合成了一系列β-脲基巴豆酸酯类化合物.     

氨基双四唑型金属螯合磁性纳米粒子的制备及其对蛋白质的吸附性能

通过4步化学反应对磁性Fe3O4@Si02纳米粒子进行化学修饰,设计和制备了一种N,N’-二(5-四唑亚甲基)胺修饰的金属螯合磁性纳米粒子.用X射线光电子能谱(XPS)、Zeta电位对该新型吸附剂进行了表征.用静态吸附法研究了螯合Cu(Ⅱ)吸附剂对溶菌酶、细胞色素C和α-糜蛋白酶的吸附性能以及溶液pH值、盐浓度、蛋白初始浓度对吸附量的影响.结果表明,吸附剂对蛋白质的吸附主要通过金属配位机理进行,且符合Langmuir吸附模型,对溶菌酶、细胞色素C和α-糜蛋白酶的最大吸附量分别20.0、13.5和17.9 mg/g.此外,将螯合Cu(Ⅱ)吸附剂用于混合蛋白质样品的吸附,发现此吸附剂对混合蛋白质样品中的溶菌酶具有选择性吸附作用,说明此金属螯合吸附剂在蛋白质选择性分离富集中具有一定应用价值.     

人血清中总蛋白的四羧基铁酞菁二级散射法测定

在pH3.8的Britton-Robinson (B-R)缓冲溶液中,蛋白质与四羧基铁(Ⅲ)酞菁(Fe(Ⅲ)Pc (COOH)4)结合,使二级散射信号ISOS增强,且增强的二级散射信号与蛋白质浓度呈良好的线性关系.在最大的二级散射波长(λSOSmax)处分别对牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、人免疫球蛋白(IgG)、α-糜蛋白酶(α-Chy)进行测定,线性范围分别为0.0～1.80mg/L、0.0～1.60 mg/L、0.03～1.20mg/L、0.0～1.20mg/L;相应检出限分别为0.501、0.354、3.63、1.18μg/L.将该方法应用于实际人血清样品中总蛋白的测定,结果与考马斯亮蓝法基本一致.     

阳离子双子表面活性剂诱导的α-CT超活性和构象变化（英文）

报道了α-糜蛋白酶(α-CT)催化活性及其与阳离子双子表面活性剂(N,N′-双(十二烷基二甲基)-1,2-二溴化癸二铵,简写为12-10-12)相互作用热力学的关系。酶活性通过紫外-可见吸收光谱法测量底物醋酸2-萘酯(2-NA)分解速率进行评估。在较短的培育时间内,12-10-12能够激活α-CT,得到催化2-NA分解的超活性,同时也加速了酶变性的动力学过程。在低于α-CT/12-10-12体系的临界聚集浓度(cac12-10-12,CT)时,显示一个钟形的大的超活性区。酶活性随时间变化的结果表明,由12-10-12激活的α-CT有高的酶活性和低的变性稳定性。进而采用等温滴定量热(ITC)、稳态荧光光谱和差示扫描量热(DSC)技术研究了12-10-12诱导α-CT超活性的机理。结果表明酶的超活性来源于正电荷的12-10-12与α-CT相互作用对α-CT内部结构的扰动,使得酶的构象变得比处于弱相互作用平衡的天然酶的构象更加松弛,这有利于2-NA水解酸性产物释放的动力学,而同时也导致了α-CT结构的不稳定性。     

HPHIC固定相对脲变α-糜蛋白酶复性的影响

依据计量置换保留理论所得到的参数lgI, 来测定不同构象态α-糜蛋白酶(α-Chy)在两种不同高效疏水相互作用色谱(HPHIC)固定相表面的折叠自由能, 发现脲变α-Chy在HPHIC固定相表面获取的折叠自由能比溶液中的高很多, 不同HPHIC固定相表面为脲变α-Chy提供不同的折叠自由能, 且都随变性剂脲浓度的增大而增大;通过对不同HPHIC色谱柱后复性α-Chy的比活测定, 还发现脲变α-Chy的复性效率与其从固定相表面的折叠自由能有关, 同一构象的α-Chy从固定相表面得到的折叠自由能越高越有利于其折叠成天然蛋白质.     

固定化酶催化合成CCK-8C-端三肽衍生物

报道胆囊收缩素（CCK-8）C-末端片段三肽衍生物外Hpac-Met_Asp(Cam为起始 原料，采用三种固定化酶--α-糜蛋白酶／Celite-545、木瓜蛋白酶／VA-Epoxy、 步酶促反应得到目标三肽化合物．对酶的专一性、酶的固定化、溶剂选择和合成条 件等进行了研究，比较了自由酶法与固定化酶法的结果．     

共振瑞利散射光谱法同时测定α-萘酚和β-萘酚异构体

在硼砂-HCI(pH=8.2)的水溶液中,α-萘酚(α-N)和β萘酚(β-N)分别与卢一环糊精(β-CD)形成包合物,对共振瑞利散射光谱(RRS)有很强的增敏作用.实验发现.α-N和β-N两种包合物的RRS光谱在320hm处有等强度的等散射点,β-N的包合物在338nm处出现一个突出尖峰,经偏振实验证实是共振荧光峰,而两者在470nm处的共振瑞利散射峰形和增强趋势一致,且具加和性.故可在470nm处测定萘酚的总量,再在338nm处以"同原射线计量法"测定β-N和α-N的含量.在470nm处测定萘酚总量实验的线性范围为5.0×10-63.6×10-4mol/L,最低检出限为2.0×10-6mol/L,RSD为3.5%.在338nm处测定β-N和α-N含量的线性范围均为5.0×10-6～3.1 X 10-4mol/L,最低检出限分别为1.6×10-6mol/L和1.8×10-6mol/L.RSD分别为3.7%和3.6%.测定的选择性较好,据此可对合成样品进行同时测定和对α-萘酚试剂的纯度分析,结果令人满意.     

红外光谱-差示扫描量热法对聚烯烃共聚物中α-烯烃种类与含量的鉴别

利用傅立叶变换红外光谱(FTIR)研究了与不同α-烯烃共聚合的多种聚乙烯,并对共聚物的结构和类型进行了定性分析.由1 378、1 369 cm-1处的峰位置和峰强度判断聚烯烃的种类,由770、 899、784 cm-1处的峰判断α-烯烃的种类.利用差示扫描量热(DSC)热分级方法确定熔融峰的位置,并对共聚物中α-烯烃的含量进行了定量计算.     

酶催化法合成CCK-8的一个四肽片段

用酶催化法合成了缩胆囊素(CCK-8)的1个四肽片段(Phac-Met-Gly-Trp-Met-OEt).该四肽片段是依次通过Phac-Met-OEt与Gly-OMe·HCl,Trp-OMe和Met-OEt偶合得到的,这3步偶合反应分别用α-糜蛋白酶、木瓜蛋白酶和α-糜蛋白酶作为催化剂,并对影响反应的因素进行了研究,反应中间体和产物均经质谱(FAB-MS)分析证实.     

热动力学对比进度法VI. 单底物酶促反应的热动力学研究

本文导出了单底物酶促反应的热力学变换方程组, 建立了单底物酶促反应动力学的对比进度方程和热动力学的数学模型。根据此模型, 可由一次反应的热谱曲线同时解析出动力学参数(K~m, V~m)和反应的摩尔焓(△H)。用热导式热量计研究了α-糜蛋白酶催化N-乙酰基-L-酪氨酸乙酯水解的热动力学。并对本文建立的热动力学研究法的特点作了详尽的讨论。     

热动力学对比进度法VI. 单底物酶促反应的热动力学研究

本文导出了单底物酶促反应的热力学变换方程组, 建立了单底物酶促反应动力学的对比进度方程和热动力学的数学模型。根据此模型, 可由一次反应的热谱曲线同时解析出动力学参数(K~m, V~m)和反应的摩尔焓(△H)。用热导式热量计研究了α-糜蛋白酶催化N-乙酰基-L-酪氨酸乙酯水解的热动力学。并对本文建立的热动力学研究法的特点作了详尽的讨论。     

呋喃甲酰基吡唑啉酮Pb(Ⅱ)络合物吸附波的电化学性质

在pH 4.0的HOAc-NaOAc介质中,Pb(Ⅱ)与1-苯基-3-甲基-4-(α-呋喃甲酰基)吡唑啉酮-5(HPMαFP)生成络合物,于-0.46 V(vs.SCE)处出现一灵敏的极谱峰,Pb(Ⅱ)的质量浓度在0.10~10.0 mg.L-1范围内峰电流与浓度呈线性关系。用多种电化学方法研究了极谱波的性质及电极反应机理,证明-0.46 V处的极谱波为络合物吸附波,峰电流由中心离子Pb(Ⅱ)还原产生。用直线法测得络合物组成为Pb(Ⅱ)∶HPMαFP=1∶2,表观稳定常数为4.97×106。     

吐温20存在下铜(Ⅱ)-α,α′-联吡啶-2,2′-二氯-4,4′-二硝基重氮氨基苯分光光度研究及其分析应用

在吐温20存在的碱性溶液中,铜(Ⅱ)、α,α′-联吡啶与2,2′-二氯-4,4′-二硝基重氮氨基苯(2,2′-diCl-DNAAB)迅速形成1:1:2的三元络合物(在550nm处几乎无吸收),使试剂2,2′-diCl-DNAAB的最大吸收550nm处的吸光度迅速减小,借此测定痕量铜。适宜pH为10.8—11.7;在50毫升溶液中含有1.0—2.5毫升5％吐温20、1.0—320μmolα,α′-联吡啶、2.5—5.0毫升0.2mmol/L2,2′-diCl-DNAAB、4.0—12.0毫升乙醇对吸光度无影响。铜量在0—19微克/25毫升范围服从比尔定律;表观摩尔吸光系数为1.05×10~5。考查了60种离子或化合物对测定的影响。方法应用于工业废水和铁矿中微量铜的测定,结果令人满意。     

固体表面特征对脲变α-糜蛋白酶折叠的贡献

以脲变α-糜蛋白酶(α-Chy)为模型蛋白, 用蛋白折叠液相色谱法研究了该蛋白在7种不同固体表面上的折叠及其在折叠过程中形成的中间体, 选用疏水相互作用色谱(HPHIC)固定相为吸附剂, 在动态条件下着重研究了疏水色谱固定相TSK和PEG-600表面对脲变α-Chy复性效率的贡献. 用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱对3.0 mol•L^－1脲变α-Chy, 在经 HPHIC柱复性并同时分离的收集组分进行确认后, 仅有一种稳定的脲变α-Chy折叠中间体. 发现PEG-600固定相表面较TSK固定相对α-Chy复性效果好. 证实了疏水性强度及固体表面配基的结构对蛋白折叠起着关键性的作用.     

荧光光度法测定山竹黄酮混合物中γ-山竹黄酮

研究了α-和γ-山竹黄酮的光谱性质,建立了测定山竹黄酮混合物中γ-山竹黄酮的荧光光度法。配制一系列浓度的α-山竹黄酮、γ-山竹黄酮及其混合物溶液,分别测定其紫外吸收光谱及荧光光谱。结果表明:α-和γ-山竹黄酮的紫外光谱较为相近,其最大吸收波长分别为317 nm和308 nm。而其荧光光谱有明显的差别,α-山竹黄酮无荧光性质,γ-山竹黄酮在436 nm处有较强荧光。γ-山竹黄酮的荧光强度与其浓度在1.0×10-6~6.0×10-5mol/L范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9975,方法的检出限为4.7×10-7mol/L。将荧光法的测定结果与高效液相色谱法(HPLC)进行了比较,二者有良好的一致性。     

水溶性苯胺蓝光度法测定蛋白质

在pH1．0～2．3的酸性介质中,水溶性苯胺蓝与牛血清蛋白、人血清蛋白、卵白蛋白、α-糜蛋白酶作用形成结合产物时将导致溶液光吸收发生变化,在558nm褪色,在634nm附近吸光度增强,且吸光度差(△A)值均与蛋白浓度成正比,不同蛋白质分别在0～50mg／L或20～80mg／L范围内符合比耳定律。据此,建立了一种新的光度测定蛋白质的新方法。它用于人血清和尿液样品中总蛋白质的质量测定,回收率在95％～102％之间,结果满意。     

紫外分光光度法测定啤酒中α-酸的含量

采用紫外分光光度法测定了8种不同品牌啤酒中α-酸的含量。实验考察了不同有机溶剂、介质酸度对α-酸紫外吸收的影响。结果表明:α-酸在279nm处有较强的吸收,方法线性范围在10～50μg/mL,检出限2.6μg/mL,相对标准偏差2.01%。8种不同品牌啤酒中α-酸的含量(μg/mL)为:百威啤酒(392.07)蓝带啤酒(383.82)崂山啤酒(373.72)雪花啤酒(238.26)司陶特黑啤酒(99.49)燕京啤酒(55.16)青岛啤酒(54.91)哈尔滨啤酒(35.05),平均偏差小于5%。用标准加入法测定其回收率,样品回收率范围在93.81%～105.15%之间。     

不饱和环缩醛/多硫醇体系的光交联

本文研究了3,9-二丙烯基-2,4,8,10-四氧螺[5,5]十三烷(DPTST)和四巯基醋酸季戊四醇酯(PTMA)以苯乙酮衍生物、安息香醚和芳酮作光引发剂时的光交联。通过测定双键在1680cm^-1和巯基在2570cm^-1处的红外吸收随光照时间的变化以及凝胶转化率和硬度随光照时间的变化来表征光交联动力学。 光交联速度与组分配比、光引发剂性质及含量有明显关系。以苯乙酮衍生物和α,α-二甲氧基-α-苯基苯乙酮为光引发剂、DPTST/PTMA的摩尔比为2:1到3:1时,得到较好的实验结果。