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通过将HL-60细胞移植到裸鼠体内获得实体肿瘤。以此为材料确立了一个简便的提纯DNA甲基化酶程序,它包括:细胞的超声破碎、超离心、去核酸、硫酸铵盐析、DEAE-纤维素柱层析及Sephadex G100凝胶过滤。用梯度-PAGE得到一条电泳均一的区带,测得该酶的分子量为479kD,该酶的最适pH为8.2,对钾、钠离子敏感,对热不稳定;用L-B作图法测得其对底物S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(SAM)的K_m为2.94×10~(-5)mol/L;SAH是该酶的竞争性抑制剂。在1mmol/L S-腺苷酰-L-高丰胱氨酸(SAH)存在下,其K_i为4.17×10~(-4)mol/L,同时也测定了该酶对DNA底物的专一性及几种代谢相关物对该酶的调节作用。 相似文献
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高活性燕麦蛋白源ACE抑制肽的制备、纯化及结构鉴定 总被引:5,自引:0,他引:5
利用胰蛋白酶水解燕麦蛋白制备了高血管紧张素转化酶(Angiotensin I-Converting Enzyme, ACE)抑制活性的燕麦蛋白酶解物, 分别采用离子交换色谱、凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱等分离手段从酶解物中分离出一种新的强活性ACE抑制肽, 其IC50值为77.3 μmol/L; 通过基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱对其进行结构鉴定, 其氨基酸序列为Glu-Gly-Gly-Tyr-Arg. 相似文献
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枯草芽孢杆菌通过超声破壁,(NH4)2SO4分段盐析,DEAE SepharoseFF离子交换层析,Blue SepharoseCL 6B亲和层析,SephadexG 200凝胶过滤等纯化步骤,分离出6 磷酸葡萄糖脱氢酶。经PAGE和SDS PAGE检测为单一蛋白区带,比活1 7375IU/mg,纯化倍数72 7,收率13 6%。凝胶过滤法测定表观分子量220KD,SDS PAGE测定亚基分子量50 5KD,可见该酶是由四个相同亚基构成的四聚体。测定最适pH、温度分别为8 5,37℃,底物G6P的Km值0 177mmol·L-1。考察了部分金属离子及EDPA对该酶活性、紫外、荧光光谱的影响。 相似文献
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经过超离心,聚乙二醇分级沉淀及DEAE-Sephadex,Blue-Sepbarose。磷酸纤维素三种柱层析等一系列过程,纯化了小白鼠肝脏的果糖6-磷酸,2-激酶。经凝胶过滤和SDS聚丙烯酰胺电泳方法测出该酶是由两个相同亚基构成的分子量为110000的蛋白。Mg~(2+)是其活性所必需的,活化方式呈正协同性。酶与底物的结合方式,对果糖6-磷酸表现正协同性,对ATP无协同性,其Km值随果糖6-磷酸的浓度减小而增大,表明酶的作用为顺序机制。活性中心有一个必需氨基酸残基与结合ATP有关,结合后,其侧链pKa由9.5移至9.8。 相似文献
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梅花鹿茸中活性多肽的纯化、测序及功能研究 总被引:2,自引:0,他引:2
利用凝胶过滤、离子交换层析及C18反相柱层析等方法, 从梅花鹿茸中分离得到了一个多肽CNT14, SDS-PAGE电泳显示其为一条带, HPLC图谱为单峰, 激光解析电离飞行时间质谱测定其分子量为1479.9028. 氨基酸组成分析结果表明, 此多肽主要含缬氨酸、亮氨酸、谷氨酸及脯氨酸, 用电喷雾串联质谱法测序结果为E-P-T-V-L-D-E-V-C-L-A-H-G-P. 活性检测结果表明, 该多肽能够明显促进小鼠海马HT22细胞增殖. 同时, 采用固相合成法对该多肽进行了合成, 与所分离的天然多肽进行了结构与性质的比较. 相似文献