新型四肽亲水材料用于糖肽的高效富集

本研究采用原子转移自由聚合(Atom-transfer radical-polymerization, ATRP)法合成了一种新型四肽亲水作用色谱材料 (Poly-DAPD),用于糖肽的选择性富集.通过氮气吸脱附、热重分析和X射线光电子能谱等技术进行表征,结果表明,四肽已成功接枝到硅球上.固相萃取富集实验表明,合成的亲水材料对牛胎球蛋白(Fetuin)糖肽富集选择性高;与商品化ZIC-HILIC材料相比,Poly-DAPD材料富集掺有5摩尔倍数牛血清蛋白(BSA)的Fetuin样品时,在获得的糖肽数目及抗干扰性能方面都更具优势.此Poly-DAPD材料可进一步用于不同糖蛋白的糖基化分析研究.     

基于叠氮基-氰基点击化学的苯硼酸亲和硅胶的制备及其在糖蛋白/糖肽选择性富集中的应用

硼亲和色谱法在糖肽/糖蛋白选择性富集中的应用趋于成熟。硼酸亲和材料的选择性,生物相容性,制备过程是否简便均是开发新型苯硼酸功能化材料需要考虑的问题。该研究立足硼酸亲和材料开发的关键问题,设计并开发了一种新型苯硼酸亲和硅胶(TCNBA)。该材料采用基于叠氮基-氰基的无铜催化点击化学方法进行合成,生物相容性好,制备方法简便。红外光谱和X射线光电子能谱图表征结果证明材料合成成功。TCNBA的糖肽富集选择性利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)进行评价,结果表明,TCNBA能够分别从辣根过氧化物酶(HRP)和免疫球蛋白G(IgG)酶解液中鉴定出13个和11个糖肽;以HRP和牛血清白蛋白(BSA)酶解液混合物(物质的量比1∶10)作为研究对象,富集后能够鉴定出5个糖肽。TCNBA的糖蛋白富集选择性利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)进行评价,以HRP、IgG、核糖核酸酶B(RNaseB)作为考察对象,结果表明,TCNBA对糖蛋白具有较好的富集选择性。以实际样品人血清为测试对象验证TCNBA在实际生物样品中的应用价值。结果显示,富集后非糖蛋白得到较大程度去除,糖蛋白得以富集。所制备的材料和方法具有大规模实际蛋白质样品分离处理的应用前景。     

一种弱阳离子交换材料的亲水模式糖肽富集新方法

亲水作用色谱(HILIC)材料在糖肽的富集与分离中得到越来越广泛的应用. 针对目前HILIC材料糖肽选择性不足的缺点, 发展新的糖肽富集方法十分必要. 本工作发展了一种商品化的弱阳离子交换材料(WCX)在亲水模式下对糖肽的富集方法. 首先考察了微固相萃取(SPE)模式下WCX上多肽保留的机理. 结果显示, WCX上糖肽的保留同时受乙腈含量和pH的影响. 将WCX用于牛胎球蛋白(fetuin)胰蛋白酶酶解液中糖肽的富集, 获得了39条糖肽信号. 当fetuin与牛血清白蛋白(BSA)酶解液以物质的量比1:5混合时, 富集到26条糖肽信号. 富集人免疫球蛋白(IgG)胰蛋白酶酶解液时获得25条糖肽信号, 1:5时获得23条糖肽信号. 实验说明WCX对唾液酸化和非唾液酸化糖肽的富集均有高选择性. 该方法拓展了WCX的应用范围, 丰富了HILIC材料的种类.     

氧化铝富集糖肽的研究

糖基化蛋白对于生命体的生长发育, 免疫调节, 细胞识别粘附等具有重要意义, 而异常的糖基化表达与风湿关节炎、肿瘤、阻塞性肺病等疾病密切相关. 因此糖蛋白结构检测对于研究生命活动至关重要. 由于在复杂样品中糖肽含量相对较少, 加之非糖肽的离子抑制作用, 使得糖肽的质谱检测有一定的挑战性. 因此发展一种有效富集糖肽的方法是必要的. 本实验中我们选用氧化铝对糖肽进行富集研究, 并考察了影响氧化铝保留多肽的机理. 我们利用氧化铝, 从HRP酶解液中共获得16个糖肽, 从IgG酶解液中共获得12个糖肽. 与直接检测样品酶解液和经商品化材料Sepharose富集后再检测相比, 检测到糖肽的个数增多. 实验数据证明氧化铝富集糖肽具有较好的选择性和覆盖率.     

基于膜超滤的糖肽富集新方法

建立了一种用于糖肽富集的新型超滤方法,采用截留相对分子质量为3 000 u的超滤膜,截取相对分子质量大于3 000 u的组分,同时完成糖肽的富集、样本的脱盐及浓缩,简化了操作过程并减少了样本损失.用4种标准蛋白酶切肽段混合物测试方法的有效性,结果表明,采用超滤方法富集后的样品可以多鉴定1个糖肽,且所有鉴定的糖肽丰度远高于未富集的样品.将该方法用于人血浆样本,血浆全酶切肽段的1个SCX组分用超滤法富集后,其鉴定的糖肽数量超过未富集组分的6倍,且糖肽富集的选择性大于85%.该方法为糖蛋白质组学的研究及糖相关生物标志物的开发提供了有力的技术支持.     

糖蛋白/糖肽的分离富集方法

蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,糖基化对蛋白质的结构和功能有着重要的影响。目前,作为蛋白质组学的一个组成部分,糖蛋白质组学是备受关注的研究热点。而从复杂的生物样品体系中富集糖蛋白/ 糖肽是蛋白质糖基化研究的重点和难点,本文就糖蛋白/糖肽分离富集方法的研究进展和应用作了简要概述。这些方法包括常用的凝集素亲和法、硼酸法、肼化学法和亲水作用法,还包括分子筛法、强阳离子交换法等新方法。     

姜黄素-硅胶吸附剂的制备及其富集分离饮用水中痕量铁铜离子

制备了一种新型姜黄素修饰的硅胶吸附剂,并以它为固相萃取吸附剂富集、分离饮用水中痕量的Fe3+、Cu2+离子,ICP-AES法测定。同时采用静态吸附法研究了吸附剂对Fe3+、Cu2+的吸附条件:pH、振荡时间、吸附剂质量、洗脱条件和干扰离子等。该方法适用于自来水、河水及海水中痕量铁铜的测定。     

两性离子双功能化超亲水金属有机框架纳米复合材料的制备及其用于糖肽的选择性富集

蛋白糖基化是生物体中普遍发生且重要的生物学过程,其参与多种分子生物学的功能和途径,是临床诊断重要的生物标志物.但是,糖肽因其丰度低、离子化效率低、糖链异质性等难点,使糖蛋白分析一直面临巨大的挑战.因此,研究合成了一种新型的两性离子双功能化纳米金(AuGC)修饰的超亲水性沸石咪唑骨架(ZIF-8)纳米复合材料(AuGC/...     

仿生聚合物材料用于糖肽的高选择性富集

蛋白质糖基化分析对深入认识其生物功能和发现生物标志物意义重大。由于生物样品中糖肽的丰度低,糖肽的富集至关重要。该文合成了一种以色氨酸为功能基团的新型仿生聚合物材料(简称Poly-Trp),并用于糖肽的高选择性富集。扫描电子显微镜、热分析仪和红外光谱仪等表征证明Poly-Trp已成功合成。通过考察溶液条件变化对糖肽在Poly-Trp保留的影响,发现糖肽在Poly-Trp上的保留分别随着溶液中乙腈浓度的降低和酸度的升高而变弱。且Poly-Trp对牛胎球蛋白糖肽的富集选择性高于商品化ZIC-HILIC和氨基硅胶,能抵抗物质的量倍数为100的牛血清白蛋白的干扰。该研究中仿生聚合物材料的设计为糖肽富集材料提供了新思路和新方法。     

ENRICHMENT OF THE SPINDLE FIBER ATTACHMENTS FROM MOUSE LIVER CELL NUCLEI

Spindle fiber attachments (SFAs) were enriched in a fraction of nuclei isolated from mouselivers. The enrichment method combines sonication, treatment with 2 mol/L NaCl and highspeed centrifugation. SFA was enriched 27-fold on the average (n = 4) when measured byradioimmunoassay. The basic method offers opportunities for further increases of yield andfor the enrichment of SFA uf other vertebrates.     

氧化石墨烯固定化凝集素的制备及在糖蛋白/糖肽富集中的应用

生物体内蛋白质的糖基化修饰调控着细胞识别、细胞黏附和迁移以及免疫应答等多种生理过程,并与多种人类重大疾病的发生、发展密切相关。因此对蛋白质糖基化修饰的鉴定,不仅能够为生物学机理研究提供重要信息,对疾病诊断标志物和治疗靶标的发现也至关重要。然而在复杂生物体系中,大多数糖蛋白为低丰度蛋白质,其含量与现有质谱仪器的检测灵敏度之间存在较大差距,所以对含有不同糖型结构的糖蛋白进行全面/高效的富集,是实现高灵敏度糖蛋白鉴定的必由之路。凝集素富集作为一种有效的糖蛋白富集方法,已在糖蛋白质组学研究中得到了广泛的应用。针对现有凝集素功能化材料存在负载量偏低以及富集效率有限等问题,我们制备了两种以氧化石墨烯(GO)为载体的新型固定化凝集素,利用GO比表面积大,功能基团含量高,分散性、化学稳定性好等特点,实现了高负载量的凝集素固定(GO-ConA 2.073 mg/mg, RSD=1.0%; GO-WGA 1.908 mg/mg, RSD=0.14%)。同时考察了材料的可重复使用性与稳定性:每隔3天测一次同一GO-lectin材料对对应糖蛋白的富集效果,可以看出材料合成两周内富集效果都>200 μg/mg。将该GO-lectin成功应用于糖蛋白、糖肽的选择性富集,在糖蛋白质组学研究中体现出良好的应用潜力。     

天冬氨酸作为非特异性吸附抑制剂在二氧化钛选择性富集磷酸肽中的应用

二氧化钛富集法作为目前使用最为广泛的金属氧化物富集磷酸肽的方法,在富集过程中常常对富含天冬氨酸和谷氨酸的酸性非磷酸化肽段存在一定的非特异性吸附作用。这些肽段与磷酸化肽段一同被富集,降低了磷酸肽富集的选择性。传统方法中使用的非特异性吸附抑制剂常会对质谱的电喷雾离子源造成污染,因而限制了其在液相色谱-质谱联用(LC-MS)系统中的应用。本研究将天冬氨酸作为一种新型的非特异性吸附抑制剂加入到二氧化钛富集体系中,并分别对3种和9种标准蛋白质酶切肽段混合物进行富集实验,同时与添加另一种非特异性吸附抑制剂——谷氨酸以及不添加任何非特异性吸附抑制剂的富集体系进行了富集效果的比较。结果表明,天冬氨酸可以有效地提高二氧化钛对磷酸肽富集的选择性。将添加天冬氨酸的二氧化钛富集体系应用于鼠肝全蛋白质磷酸肽的富集中,同样取得了很好的效果,表明天冬氨酸在复杂的生物样本的磷酸肽富集中也同样具有良好的应用前景。此外,由于天冬氨酸在反相色谱中极易被洗脱去除,从而避免了传统抑制剂对LC-MS系统离子源的污染问题。     

聚烯丙基氯点击反应接合葡萄糖纳米磁球的制备与糖肽富集

糖蛋白及与蛋白质结合的糖链在生物体内的丰度一般极低,为实现其准确定性及定量,去除高丰度非糖蛋白、非糖肽的干扰,通常需要进行富集前处理操作。该文设计并制备了一种基于点击化学反应和烯丙基氯多功能化位点聚合物的葡萄糖改性核-壳-壳型磁性纳米颗粒,并建立了相应的用于糖肽亲水富集的固相微萃取方法。以人免疫球蛋白G酶解液为样品,共测得32个糖肽信号。该方法检出限可达10 fmol,每克磁性分离介质的富集容量达100 mg。     

用于N-糖肽/糖蛋白分离富集的新型材料

蛋白质糖基化在调节各种复杂的生物过程中,如分子识别、免疫应答和蛋白质折叠等起着至关重要的作用。由于糖肽/糖蛋白在复杂生物样品或临床样品中丰度较低,进行糖蛋白组学分析前往往需要进行目标蛋白的分离富集。研究开发具有高效糖蛋白分离富集能力的新型材料对糖蛋白/糖肽的研究具有重要意义。近年来报道了许多新型糖蛋白分离富集材料,如有机高分子材料、生物基材料、新型有机骨架材料和新型功能复合材料等。这些材料因其结构、生物相容性和理化性质等特点,从不同层面推动了糖蛋白分离富集技术的发展。本文就目前国内外有关糖肽/糖蛋白分离富集的新型材料进行了总结和讨论,并对其未来发展提出展望。     

完整糖基化肽段的富集与质谱解析新技术研究进展

蛋白质糖基化是生物体内最重要的翻译后修饰之一,在蛋白质稳定性、细胞内和细胞间信号转导、激素活化或失活和免疫调节等生理过程和病理进程中发挥重要作用.而异常的蛋白质糖基化往往和多种疾病的发生发展密切相关,目前应用于临床检测的多种肿瘤生物标志物大多属于糖蛋白或者糖抗原.因此在组学层次系统分析蛋白质糖基化的变化对阐明生物体内糖...