水体嗜水气单胞菌的监测

首先探索了快速检测嗜水气单胸的微生物学培养法和免疫学方法，进而利用所建方法对５８０余个不同来源的样品进行实测，考核其特异性和敏感性，监测鳖池水的细菌数量变化动态，结合疫情建立菌情－疫情关系模型。     

斑点叉尾鮰寄生单殖吸虫中国一新纪录属(锚首虫科)

记述了锚首虫科Ancyrocephalidae 单殖吸虫中国1外来属、外来种, 即寄生于斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus鳃上的趋鮰虫属Ligictaluridus Beverley-Burton, 1984, 普氏趋鮰虫Ligictaluridus pricei (Mueller, 1936) Beverley-Burton, 1984. 所获标本与Mueller (1936)、Mizelle ＆ Cronin (1943)、Mizelle ＆ Regensberger (1945)、Prost (1973)、Klassen ＆Beverley-Burton(1985)的描述基本一致。趋鮰虫属和普氏趋鮰虫均为我国首次报道.     

中华鳖嗜水气单胞菌菌的制备和应用

探讨了福尔马林在不同温度、不同浓度条件下对中华弊敢单胞菌细胞的灭活时间,介绍了中华鳖嗜敢单包菌灭活菌苗的物的制备过程,并报告了菌苗的安全性、免疫效力和现场应用结果。     

嗜水气单胞菌发酵条件的优化研究

研究了嗜水气单胞菌的最佳培养条件,通过单因子实验得到该菌株的最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为大豆蛋白胨,初始pH值为7.5,最适生长温度和时间为28℃、36h,最佳氯化钠浓度为6.84mg/mL;在其他培养条件不变的情况下,通过对大豆蛋白胨、葡萄糖、K2HPO4浓度、初始pH值做四因子三水平的正交实验,得到培养基最佳组合为:葡萄糖10 g/L、大豆蛋白胨10 g/L、K2HPO44.56mg/mL、初始pH值7.5.研究结果为嗜水气单胞菌规模化发酵培养奠定了基础.     

应用流式细胞仪检测斑点叉尾鮰红细胞免疫粘附功能

制备荧光标记的致敏酵母及未致敏酵母,应用流式细胞仪检测斑点叉尾鮰全血体系与洗涤红细胞体系下红细胞C3b受体(erythrocyte C3breceptors,E-C3bR)与红细胞免疫复合物(erythrocyte immune complexes,E-IC)花环率,同时检测未灭活血清与灭活血清(58℃处理30min)对洗涤红细胞免疫粘附功能的调控作用.结果显示,斑点叉尾鮰红细胞能有效粘附致敏酵母及未致敏酵母,其灭活血清组E-C3bR与E-IC花环率(分别为16.78%和13.51%)明显高于未灭活血清组(分别为5.99%和6.99%)与生理盐水组(分别为8.59%和8.30%);未灭活血清组E-C3bR与E-IC花环率明显低于生理盐水组.试验结果表明斑点叉尾鮰红细胞具有免疫粘附功能,并且血清中存在促进红细胞免疫粘附功能的热稳定因子及抑制其免疫粘附功能的热不稳定因子.该试验不仅从技术上促进了红细胞免疫功能的研究,而且有助于全面客观地了解鱼类的红细胞免疫功能,为鱼类的病害监测及其防治奠定基础.     

发酵饲料对斑点叉尾鮰生长及生化指标的影响

【目的】评估使用发酵饲料替代部分基础饲料饲喂斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)的效果。【方法】在户外网箱中饲喂初始体质量约285 g的斑点叉尾鮰42 d。在此期间设置T1,T2和T3共3个实验组,除T1组全部用基础饲料饲喂外,T2和T3组所用饲料中基础饲料与发酵饲料的质量比分别为95∶5和90∶10;然后分析各组实验鱼的主要生长性能和生化指标。【结果】1) 与T1组相比,T2和T3组的终末体质量、体质量增加率、特定生长率和蛋白质效率均有统计学意义上的上升(p<0.05)而饵料系数有统计学意义上的下降(p<0.05),且T3组的肥满度也有统计学意义上的上升(p<0.05)。2) T2和T3组与T1组相比,前两者肌肉粗蛋白质量分数有统计学意义上的上升(p<0.05);3) T2和T3组血清中的谷草转氨酶活性较T1组而言有统计学意义上的下降(p<0.05);4) 与T1组相比,T3组肝和头肾中还原型谷胱甘肽含量和超氧化物歧化酶活性有统计学意义上的下降(p<0.05);5) T1,T2和T3组肝的组织学结构无明显差异。【结论】饲喂一定比例的发酵饲料能提高斑点叉尾鮰的生长性能,改善该鱼种的肌肉营养组成,并有利于该鱼种肝的健康。     

蒸制对斑点叉尾鮰肉挥发性风味物质的影响

【目的】考察蒸制处理对斑点叉尾鮰(〖WTBX〗Ietalurus punetaus〖WTBZ〗)肉主要挥发性风味物质的变化。【方法】采用固相微萃取-气相色谱质谱(SPME-GC-MS)法分别对新鲜和蒸制的斑点叉尾鮰肉的挥发性成分进行分析。【结果】从新鲜和蒸制的斑点叉尾鮰肉中分别检测出34种和31种挥发性成分,其中相同成分有22种;这些挥发性成分中含量较高的是醇类、酸类和酮类,它们在新鲜斑点叉尾鮰肉中相对含量分别为21.65%,16.80%和3.24%,在蒸制斑点叉尾鮰肉中相对含量分别为19.04%,18.52%和3.03%。【结论】2-氨基丙醇、2-甲氨基乙醇、N′-异丙基脲基乙酸、正棕榈酸、D-氨基丙酸、3,3-二甲基-4-(1-氨基乙基)-2-氮杂环丁酮等物质可能与斑点叉尾鮰鱼肉的风味有关。     

嗜水气单胞菌的研究进展

回顾了嗜水气单胞菌的生物学性状、血清型、致病性以及致病机理的研究情况,并概述了嗜水气单胞菌的致病毒力因子和诊断检测技术方面的研究情况及新的研究进展.     

中华鳖抗嗜水气单胞菌亚单位疫苗的制备与应用

水体条件致病菌嗜水气单胞菌对中华鳖养殖业的危害巨大.为预防嗜水气单胞菌的感染,提高中华鳖免疫抵抗力,研究开发嗜水气单胞菌疫苗是一种有效的方法.利用PCR手段克隆获得嗜水气单胞菌DnaK和DnaJ两个基因,并将两基因重组到大肠杆菌表达载体上,转化至大肠杆菌表达菌株,纯化获得了重组蛋白rDnaKAh和rDnaJAh.将两个重组蛋白分别与弗氏佐剂充分混合制备成疫苗,腹腔注射中华鳖幼鳖,加强免疫一次后,用已分离获得的致病菌株感染中华鳖幼鳖,实验结果表明rDnaK具有81.8％的免疫保护效应,而rDnaJ仅具有31.8％的免疫保护效应.     

斑点叉尾鮰鱼苗阶段耗氧率和窒息点的测定

在实验室内测定30尾斑点叉尾Hui鱼苗的群体耗氧率和窒息点,鱼苗平均体长2．11cm,平均体重0．10g,试验用水为曝气24h以上的自来水,水的碱度2．60mgN/L,硬度1．15mgN/L,pH值7．2,溶氧5．86mg/L,结果表明,在水温28．2－28．5度时的斑点叉尾Hui鱼 耗氧率为0．5233mg/g.h,耗量为0．0544毫克／尾．小时,窒息点为0．5226mg/L,斑点叉尾Hui的耗氧率呈现出明显的昼夜变化。     

XapR蛋白在嗜水气单胞菌抗生素耐药性的功能

研究嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila） LysR型转录调节因子中XapR蛋白抗生素耐药的调控机制。通过测定嗜水气单胞菌ATCC 7966（野生型菌株）与嗜水气单胞菌ATCC 7966 xapR基因缺失株（ΔxapR）对34种抗生素的最低抑菌浓度,系统地评价xapR基因抗生素耐药性;进一步利用定量蛋白质组学技术,探讨xapR参与嗜水气单胞菌调控的生物过程。结果表明：xapR基因缺失后细菌对头孢孟多的耐药性减弱;xapR基因可调控细菌碳代谢、TCA循环等多种代谢途径,此外还与外膜蛋白、TonB、ABC转运系统等抗性基因的表达密切相关。综上,XapR蛋白可通过调节细菌中心代谢途径以及多个抗性基因改变嗜水气单胞菌的耐药性。     

海豚链球菌灭活疫苗对罗非鱼免疫效果的研究

用野外分离的海豚链球菌(Streptococcus iniae)海水菌株HD-1和淡水菌株TBY-1制备成含1×1010cfu/mL的灭活疫苗,以0.1 mL/尾的剂量对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)进行腹腔注射,免疫2次,测定免疫后1周、3周和5周免疫鱼血清中抗海豚链球菌的抗体滴度和相应菌株攻毒后的相对保护率,以评价海豚链球菌灭活疫苗对罗非鱼的免疫保护性.结果显示免疫鱼血清中抗体凝集效价在免疫后第3周和第5周呈显著性升高,且两种疫苗免疫血清存在明显的交叉凝集反应,说明HD-1和TBY-1抗原具有交叉免疫原性.在免疫后第4周,利用8倍半数致死量浓度(LD50)的海豚链球菌强毒菌株进行攻毒试验,结果显示:HD-1和TBY-1免疫组的死亡率分别为5%和0%,相对保护率分别为93.8%和100%;未经免疫的阴性对照组的死亡率分别为77.5%和62.5%.     

维氏气单胞菌对草鱼背鳍细胞的毒性及凋亡研究

草鱼(Ctenopharyngodon idellus)在我国是一种重要的淡水经济鱼类,但是由于近些年的集约化高密度养殖导致各种水产疫病暴发,不仅对养殖行业造成巨大的损失,同时对人类生命安全也存在着巨大威胁,维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)就是其中一种人畜共患的条件致病菌。本研究旨在探索维氏气单胞菌导致宿主细胞死亡的致死机制,为今后进一步针对维氏气单胞菌开发抗菌渔用功能产品提供数据支持和理论依据。本文首先测定维氏气单胞菌胞外分泌物(Extracellular products,ECPs)的蛋白浓度,然后以不同浓度的ECPs为基准,根据细胞光镜观察结果及细胞活力检测结果确定维氏气单胞菌胞外ECPs的细胞毒性;再利用Hoechst 33342及TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling(TUNEL)检测细胞核的变化情况,最终确定草鱼源维氏气单胞菌对宿主细胞的毒性致死机制。从毒性实验中可以看出高浓度的维氏气单胞菌ECPs对草鱼背鳍(Grass carp pectoral fin,GCPF)细胞具有明显的毒性,且从Hoechst 33342结果可以看到凋亡小体的出现,而TUNEL也出现了阳性结果,实验组出现了绿色荧光,而对照组没有出现荧光。说明维氏气单胞菌胞外分泌物对宿主细胞具有明显的毒性,而且会导致宿主细胞发生细胞凋亡。     

广西桉树人工林引种发展历程与可持续发展研究

本文通过回顾广西桉树人工林的引种发展历程,对桉树人工林的经济、生态和社会价值、发展过程中的生态负面效应及其产生的根本原因进行论述与分析。并针对性地提出实现广西桉树人工林可持续发展的建议,为解答桉树的社会争议提供科学客观的分析评述,为科学制定桉树种植产业发展规划提供参考依据。     

桂西北光皮桦和马尾松人工幼林生长量的比较研究

为了进一步弄清桂西北种植光皮桦(Betula luminfera)的生长量,于1997年4月在广西林朵林场营造光皮桦人工纯林,与马尾松纯林进行对比研究,结果表明:3.5年生光皮桦林分的平均树高、平均胸径和平均蓄积量分别为7.42 m、7.50 cm和30.06 m³·hm^-2,分别比同龄马尾松林分的平均高(4.58m)、平均胸径(4.96cm)、平均蓄积(18.193m³/hm²)提高62.0%、51.2%和65.3%。说明该区营造光皮桦人工幼林的生长量较大,建议在相似立地条件下局部推广营造光皮桦人工林。     

广西存在安布闭壳龟的初步查考

作者于１９９１年在１９９２年两次带着安布闭壳龟的活动标本，深入上思县思阳镇，钦州市大直镇等地进行了野外调查和访问，获得安布闭壳龟的幼体背甲标本２个，一背甲标本１个。在调查中虽没获得活体标本，但两次调查所得资料表明广西的十万大山很可能生存有安布闭壳龟。     

卵形鲳鲹源创伤弧菌导致宿主细胞凋亡的作用机制

弧菌是自然界菌群中的一部分,作为一种有害菌不仅可以感染常见的水产品,有些弧菌更是对人体有一定的致病性。随着近些年水产养殖的不断扩大,由创伤弧菌(Vibrio vulnificus)引起的鱼病不胜枚举,不仅给养殖行业造成巨大的损失,同时对人类生命安全也存在着巨大威胁。本文对卵形鲳鲹源创伤弧菌感染宿主细胞的机制进行研究,目的是阐明创伤弧菌对宿主细胞的致死机理,为未来研发抗病菌功能产品提供理论依据。本文通过确定创伤弧菌胞外产物(Extracellular products,ECPs)的蛋白浓度,以不同的蛋白浓度为基准,利用光镜观察和细胞活力CCK检测技术测定创伤弧菌ECPs对细胞的毒性。然后使用Hoechst 33342染核观察及DNA ladder来进一步确定其致死机制。根据细胞毒性结果,卵形鲳鲹源创伤弧菌ECPs对宿主细胞有很强的细胞毒性。Hoechst 33342染核结果发现实验组出现了凋亡小体,这与STS处理的阳性对照组中细胞变化相一致。但是ECPs处理后的宿主细胞未出现明显的DNA ladder。卵形鲳鲹源创伤弧菌对宿主细胞具有明显的毒性,再通过理化性质的检测,可以初步确定创伤弧菌导致卵形鲳鲹细胞死亡是通过凋亡途径发生的。未来将针对凋亡途径的具体通路进行深入研究,为控制病菌的感染提供理论依据。     

广西北部湾大宗海水养殖鱼类卵形鲳鲹感染溶藻弧菌及其致病性研究

【目的】2016年广西钦州湾近海网箱养殖的卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)发生以体表皮肤溃烂、皮下出血、内脏器官病变为典型症状的细菌性疾病,通过对患病卵形鲳鲹中病原菌进行分离、鉴定与保存,为后续开展病原菌快速检测技术和防控技术等研究,以及控制相关病原菌在海水养殖中的暴发和流行奠定基础。【方法】利用LB平板和TCBS平板从患病卵形鲳鲹体表溃烂病灶、肾脏、肝脏组织中分离纯化疑似病原菌,并对其进行常规形态特征和生理生化反应的生物学检验,通过16SrDNA基因测序对疑似病原菌株进行分子生物学鉴定,在细胞和鱼体水平开展病原菌的致病性研究,同时进行人工感染的回接试验。【结果】分离得到4株疑似病原菌(TOQZ01,TOQZ02,TOQZ03,TOQZ04),基于其表型、分子生物学特征和进化关系,判定4株菌株均为弧菌属的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus),且细胞毒性试验和回归试验证实,分离得到的溶藻弧菌为此次卵形鲳鲹发病的病原菌。【结论】溶藻弧菌是引起广西沿海地区海水养殖鱼类发生细菌性鱼病的主要致病菌之一,未来将基于本研究中分离得到的溶藻弧菌开展病害快速检测技术和防控技术等现代海水生态健康养殖关键技术研究,以实现对广西海水养殖溶藻弧菌病的快速诊断、实时监控和有效预防。     

广西近岸强额孔雀水蚤对球形棕囊藻的下行控制

为认识广西近岸强额孔雀水蚤Parvocalanus crassirostris对球形棕囊藻（Phaeocystis globosa,下文简称棕囊藻）的下行控制作用,首先通过垂直拖网的方式对广西近岸强额孔雀水蚤丰度的月变化进行调查;然后,通过室内实验获得强额孔雀水蚤对单细胞棕囊藻的摄食率;最后,在棕囊藻赤潮易发季节,选择固定站位对棕囊藻囊体数量与强额孔雀水蚤丰度之间的关系进行连续观测。结果发现,强额孔雀水蚤在广西近岸终年存在;在调查海域,其丰度变化为（1 005±886）ind.·m^-3到（10 723±5 168）ind.·m^-3,平均值为（5 878±3 373）ind.·m^-3。棕囊藻囊体密度高值期出现在强额孔雀水蚤丰度低值期。强额孔雀水蚤可高效摄食单细胞棕囊藻,水温从16℃到28℃时,其对单细胞棕囊藻的摄食率从（61.55±44.65）×10³ cells·ind.·h^-1到（73.92±4.66）×10³ cells·ind.·h^-1,但统计分析结果表明,水温对摄食率影响并不显著（P>0.05）。较之小孔径浮游生物网（孔径160 μm）,以往使用大孔径浮游生物网（孔径505 μm）对广西近岸强额孔雀水蚤进行采样,所得强额孔雀水蚤丰度降低2个数量级。鉴于强额孔雀水蚤可高效摄食单细胞棕囊藻,而自然海区中又存在高密度的强额孔雀水蚤,推测强额孔雀水蚤是广西近岸单细胞棕囊藻的重要捕食者,其摄食调控在控制棕囊藻赤潮的形成中可能发挥重要作用。在研究广西近岸棕囊藻赤潮发生机理时,建议考虑以强额孔雀水蚤为代表的小型桡足类动物的下行控制作用。