快速诊断乙型肝炎表面抗原免疫胶乳

自七十年代以来,国内外用高分子免疫胶乳作为临床诊断疾病的新试剂得到广泛应用。但胶乳试剂用于乙肝表面抗原(HBsAg)的检测国内却未见报道。国外虽有专利,但仍处于完善阶段。我所与四川医学院协作研制成功了HBsAg诊断胶乳并经712例临床试验获得较满意结果。     

溶胶-凝胶-HBsAb膜免疫传感器的研制与应用

采用溶胶-凝胶(Sol-gel)技术,成功地将乙肝表面抗体(HBsAb)包埋于Sol-gel中,再滴涂于铂盘电极表面,制成溶胶-凝胶-HBsAb膜非标记免疫传感器.根据抗原与抗体特异性结合形成的免疫复合物使敏感膜有效扩散截面积减小的特性,提出了利用铁氰化钾作为氧化还原探针间接检测乙肝表面抗原(HBsAg)的新方法.用循环伏安法(CV)对电极逐层修饰过程进行了表征,并探讨了对HBsAg定量检测的可行性及其响应机理.采用差示脉冲伏安法(DPV)检测人体血清中的HBsAg.线性范围5～320μg/L,线性相关系数r=0.997.该传感器响应迅速,灵敏度高,稳定性好.于4℃干态保存14d,其响应信号基本不变.将其用于108例临床血清检验,与酶联免疫吸附法(ELISA)的符合率为87.5％.     

便携式生物传感器用于癌症标志物定量检测的研究进展

癌症标志物的精准检测对癌症的早期诊断以及癌症患者生存率的提高具有重要意义。液体活检可实现体液癌症标志物的检测,具有非侵入性、可重复取样检测的优势,有望用于癌症早期的精准诊断。基于便携设备进行信号定量读出的液体活检,可通过简单快速的操作获取检测结果,并且其检测过程不受检测场所的限制,在癌症的早期筛查、预后以及治疗效果的监测方面显示出巨大的应用潜力。本文基于癌症标志物便携、定量检测的研究进展,对利用气压计、体积条形图芯片、血糖仪、温度计、 pH计和数字万用表等进行信号定量读出的癌症标志物检测方法进行了总结,讨论了其面临的挑战,并对该领域的发展和应用前景进行了展望。     

表面等离子体子共振生物传感器用于乙肝表面抗原的测定

运用自行研制的表面等离子体子共振（SPR）生物传感器，采用自组装成膜技 术并以戊二醛作偶联剂，在传感片表面修饰HBsAg单克隆抗体，将其用于乙肝表面 抗原（HBsAg)的检测。实验结果表明SPR生物传感器对HBsAg的检出限为0.06ng/mL 。与传统的酶联免疫吸附试验（ELISA）相比，SPR生物传感器的检出灵敏度明显高 于ELISA法。用该SPR生物传感器对HBsAg质控血清与纯化的HBsAg溶液进行比较检测 ，结果表明该SPR生物传感器对HBsAg具有好的特异选择性。     

双层类脂膜非标记乙型肝炎表面抗原免疫传感器

采用固体铂盘电极支撑的双层类脂膜（Pt-BLM）技术崮定乙肝表面抗体（HBsAb）,研制成Pt-B12M-HBsAb电位型非标记免疫传感器,用于检测人血清中乙肝表抗原（HBsAg）。对影响构筑BLM的各种凶素进行了研究,用循环伏安法对Pt-BLM进行了表征。传感器对HBsAg呈Nernstu向应,其线性范围为2～320μg／L,线性回归方程为△V=-1．09＋32．41gρ（HBsAg）,线性相关系数r=0．9998。该传感器响应迅速,灵敏度高,稳定性及选择性好,于4℃干态保存4周,其响应信号基本不变。将其用于临床血清检验,结果满意。     

负载高密度乙肝检测探针磁珠的制备及性能

本文介绍了一种负载高密度乙肝检测探针磁珠的制备技术,并对其在乙肝检测中的应用性能进行了研究,开辟了一种乙肝检测的新方法。首先通过化学键连接的方法制备出表面偶联乙肝抗体的磁性复合微球（亦称“乙肝抗原检测免疫磁珠”）,之后将其用于乙肝检测研究表现出了较好的效果,为了进一步提高其检测准确性及灵敏性,对乙肝免疫磁珠的制备过程进行了优化,包括磁珠的胺化工艺及抗体的偶联工艺。通过优化得到氨基磁性复合微球的氨基含量为2.71 mmol/g、单位磁珠抗体偶联量为108.36 ug/mg、偶联效率为77.40%的负载高密度乙肝检测探针的磁珠。并在此过程中采用类“双抗原夹心酶联免疫法”对乙肝抗体的活性及优化效果进行了检测。通过性能检测比较,磁珠法检测灵敏度高于普通酶联免疫法。     

热敏相分离荧光免疫分析乙肝表面抗原的新方法

以N-异丙基丙烯酰胺为单体,将水溶性热敏高分子聚异丙基丙烯酰胺(PNIP)和抗体偶联,用异硫氰酸荧光素标记羊抗人乙肝表面抗原抗体,建立了夹心型热敏相分离荧光免疫分析乙肝表面抗原(HBsAg)的新方法.评价了抗体在PNIP上的固定效率和非特异性吸附情况.HBsAg在0.5～100μg/mL范围内与体系荧光强度呈良好的线性关系,检出限为10ng/mLHBsAg.该方法既具有均相免疫分析的快速性,又有固相免疫分析的高灵敏度.用于乙肝病人血清中HBsAg水平的测定,结果令人满意.     

溶胶-凝胶非标记免疫传感器检测乙肝表面抗原

采用溶胶 凝胶 (sol gel)技术包埋乙肝表面抗体 (HBsAb) ,涂布于金盘电极表面 ,构成sol gel HBsAb/Au非标记免疫传感器 ,用于检测人血清中乙肝表面抗原 (HBsAg)。该传感器对HBsAg的电位响应遵循Nernst方程 ,在 1～ 330 μg/L浓度范围内 ,传感器的电位响应值ΔE与HBsAg浓度C的对数呈线性关系 ,线性回归方程为ΔE =1 8.1 7+79.84lgC。响应时间为 3min。癌胚抗原、甲胎蛋白等对测定无明显影响。对于HBsAg阴性血清 ,电位响应值ΔE <30mV ,而对于阳性血清则ΔE >30mV ,据此 ,作为临床判别的依据。对1 0 0例临床血清分别用传感器和酶联免疫法 (ELISA)进行双盲检验 ,两法的符合率为 86 %。     

金纳米棒免疫层析试纸条定量检测前列腺特异性抗原

建立了一种基于金纳米棒(GNR)的免疫层析方法,用于快速定量检测前列腺特异性抗原(PSA)。以GNR为标记探针,通过包裹羧基化的聚合物后,采用共价偶联的方式连接抗PSA单克隆抗体形成偶联物,以鼠抗PSA单克隆抗体和羊抗鼠IgG分别喷涂硝酸纤维素膜,形成试纸条的检测线和质控线,采用三明治夹心法构建GNR免疫层析试纸条,用于PSA的定量检测。结果表明,GNR免疫层析试纸条特异性强,稳定性好,灵敏度高,对PSA检测的线性范围为0.1～50 ng/mL,检出限为0.1 ng/mL,批内和批间变异系数均小于10%,且具有良好的保存稳定性。本方法可用于检测血清中PSA的浓度水平,对于前列腺癌的早期诊断、监测治疗及预后判断具有重要意义。     

巨细胞病毒检测试剂盒在欧洲上市

据报道，德国Qiagen公司最近推出定量检测巨细胞病毒（CMV）分子诊断检测方法，该CMV多聚酶链反应（PCR）检测试剂盒已经获得了CE标记，在欧洲已投入使用。免疫抑制的患者容易患严重的CMV感染，危及生命。Artus CMVPCR检测试剂盒能够早期检测CMV。该试剂盒能够快速定量检测CMV DNA，可以用于Abi Prism、LightCycler和Rotor-Gene3000检测系统。     

琼脂糖凝胶蛋白芯片片基的制备及应用

建立了一种制备琼脂糖凝胶修饰玻片的方法。以乙肝表面抗原为检测指标,比较了琼脂糖凝胶片基和常规的醛基片基固定抗体后的检测灵敏度,发现琼脂糖凝胶修饰后可以明显增加检测的荧光强度,并在10ng/L～100μg/L之间具有良好的线性关系。在此片基同时固定了抗HBsAg和抗HBeAg抗体,并以牛血清白蛋白和生物素标记抗体为阴性和阳性对照点,采用夹心式免疫反应法检测乙肝病毒的两种抗原,取得良好效果。     

口腔颌面恶性肿瘤患者血清硒,NK细胞活性检测的临床意义及评价

用气相色谱法及四甲基偶氮唑蓝法（ＭＴＴ）对３７例口腔颌面恶性肿瘤初发患者进行手术前后血清硒及外用血ＮＫ细胞活性检测，并以健康人群作对照，结果发现肿瘤患者血硒及ＮＫ细胞活性均显著低于正常水平，并且随着病情进展有进一步降低趋势；治疗（手术）后血硒及ＮＫ细胞活性则明显升高。由此认为对患者进行血硒、ＮＫ细胞活性检测可作为口腔恶性肿瘤的辅助诊断指标之一，并为判断疗效及预后提供参考。同时通过对血硒与免疫应答关系的探讨，认为将硒及ＮＫ细胞运用于肿瘤的防治中具有广阔前景。     

成年人乙肝疫苗免疫效果的分析

为了解成年人的乙肝疫苗免疫效果，在乙肝两对半全阴性的成年人接种重组乙肝疫苗三针（第0、1、6个月）1个月后用IRMA方法检测HbsAb浓度。结果表明，69名受检对象中，20-30岁17人，有应答者15人，占88.2%；30-40岁38人，有应答者34人，占89.4%；40岁以上14人，有应答者13人，占92.8%；总应答率为89.9%。提示成年人乙肝疫轩免疫应答率相当高，但是年龄不同产生HbsAb的浓度大小有差异。     

基于蓝光技术的数字化分子诊断与检测技术

该文基于课题组前期对CD/DVD技术的生物光盘检测技术的研究基础上,建立了基于全新的BD技术的分子定量检测技术。与CD和DVD相比,BD光驱具有更小的激光聚焦光斑,实现了更高的检测通量与检测灵敏度。通过在蓝光光盘表面制备大小和灰度不同的墨点阵列,并利用标准BD光驱结合光盘质量诊断软件进行测试,分析了系统的横向分辨率以及用于定量检测的可行性,结果表明蓝光检测系统具有较高的灵敏度和横向分辨率(100μm)。在BD光盘表面成功制备了生物素—链霉亲和素结合反应阵列,利用标准BD光驱以及纠错软件,实现了对链霉亲和素的定量检测。     

非竞争性毛细管电泳免疫分析乙肝表面抗原

用硫脲标记乙肝抗体(抗-HBs),基于抗原．抗体高选择性识别,建立了非竞争性毛细管电泳免疫分析乙肝表面抗原的新方法。研究了混合温育时间、缓冲溶液酸度和浓度、进样时间的影响。在5mmol／L Tris-20mmol／L H3BO3-3mmol／L EDTA(pH7．0)的运行缓冲溶液中,游离的标记抗体和抗原抗体复合物在15min内完全分离。HBsAg在4．0—50mg／L范围内与复合物的峰面积呈良好的线性关系;相对标准偏差小于6％;检出限为3．0mg／L。该方法用于乙肝病人血清和正常人血清中HBsAg的测定,结果令人满意。     

化学修饰型硝基酚传感器的研究

采用Ｎａ－蒙脱石修饰碳糊电极制成的传感器,用于硝基酚类物质检测及定量分析。经研究发现,此种电极具有稳定性好,灵敏度高的优点,并且可用于邻,对硝基酚共存体系中两物质的分别定量检测。     

光电子调控的聚苯胺氧化还原反应用于铜离子可视化检测

构建了由中间价态聚苯胺(ES-PANI)和二氧化钛(TiO2)纳米粒子组成的光致变色检测平台,用于痕量铜可视化检测.在紫外光激发下,ES-PANI(墨绿色)会被TiO2产生光生空穴氧化为完全氧化态聚苯胺(深蓝色);随着Cu2+的加入,ES-PANI生成还原态聚苯胺(浅黄色),导致一系列可由肉眼观测到的颜色变化.光致变色过程中的颜色转变取决于Cu2+调控的不同价态聚苯胺.本方法结合了光电化学和可视化检测的优点,在Cu2+的检测中表现出了高选择性和灵敏度,检出限为0.4μmol/L.采用Photoshop软件读取绿通道平均强度值和用酶标仪记录紫外吸收值,发展了另外两种定量检测方法.此外,将本方法用于人类头发实际样品中Cu2+的定量检测,回收率令人满意.所建立的检测平台简单、成本低廉,无需复杂的仪器即可在几分钟内同时检测多种样品.这种光电子调控的比色策略为设计新型比色检测平台提供了新思路,并且可望应用于临床快速诊断便携试剂盒的开发.     

带有乙型肝炎表面抗原基因的重组痘苗病毒——一种可能的乙型肝炎活疫苗

我们组建了带有痘苗病毒胸腺嘧啶核苷激酶(TK)基因的痘苗病毒载体,并将乙型肝炎(以下简称乙肝)表面抗原(HBsAg)基因(adr亚型)插入载体质粒,置于痘苗病毒早期启动基因的调控下。通过感染与转染相结合的方法,得到了带有乙型肝炎表面抗原基因的重组痘苗病毒。它保持了原有的感染性,并能有效地表达乙肝表面抗原。当病毒接种量为每个细胞1PFU(空斑形成单位)时,每1×10~6细胞感染后24h可产生2—3μg HBsAg,其中大部分释放于细胞培养液中。每升培养液可以产生0.5—1mg HBsAg。表达产物HBsAg能形成颗粒,其大小、浮力密度,多肽组份等都与病人血清中的HBsAg颗粒相同。用重组痘苗病毒免疫家兔,可以产生抗乙肝表面抗原的专一性抗体。实验结果表明,利用本文组建的重组痘苗病毒不仅可以提供一个生产乙肝表面抗原的系统,而且这种重组痘苗病毒就可作为活疫苗使用,来预防乙肝病毒感染。     

基于四极杆-飞行时间质谱的非标记蛋白定量检测方法学研究

以四极杆飞行时间质谱检测的蛋白肽段的质谱信息为基础,开发了一种简单、准确的蛋白定性、定量检测方法,并用于牛血清白蛋白的定性、定量检测。对酶解肽段的梯度洗脱条件和流速等液相色谱条件进行了优化;进行蛋白样品的酶解及质谱检测,利用MassHunter定量软件对数据进行分析;为减少假阳性结果的出现,实验优化了数据处理软件中的设置参数,并对方法的重现性进行了考察。结果显示,重复检测的8个肽段峰面积的RSD均在3.0%以下。该方法对牛血清白蛋白的检出限为100 ng。实验发现,样品中蛋白的含量与检测到的肽段匹配率呈对数关系,并从检测到的丰度较高的8个肽段中确定可用于BSA蛋白定性检测的肽段为:HLVDEPQNLIK,定量检测的肽段为:ATEEQLK,方法的回收率为106%。该方法操作简便,检测快速,成本较低,专一性强,可用于蛋白特异性肽段的筛选及复杂生物样品中蛋白的检测。     

微量元素锌在治疗Bell麻痹中的作用

为探讨急性早期应用补锌和综合疗法治疗Bell麻痹 ,将 1 5 8例Bell麻痹患者 ,随机分成两组 :(1 )补锌组 (补锌 +综合疗法 ) ;(2 )对照组 (单纯综合疗法 )。对其进行了观察对比治疗 ,同时检测了所有患者治疗前后自身对照发锌值 ,还对所有患者进行了定位诊断、面神经电反应测试、并对面肌功能进行评分。结果表明 ,对定位诊断其病变在D段、面肌功能评分在 1 1分以下、面神经无电反应患者 ,即使给予早期综合治疗 ,效果仍较差 ,而早期给予补锌加综合治疗效果优于对照组 ,其它段内患者治疗次数和治愈天数也均优于对照组。可见微量元素锌在发挥免疫应答、免疫调控中的重要作用