高山红景天花粉的超低温保存

对来自大兴安岭、长白山的高山红景天花粉进行了超低温保存研究。结果表明:不同的干燥时间对超低温保存后花粉萌发力有明显影响,12 h干燥处理的花粉萌发力明显高于8 h、24 h干燥处理的;用0℃(8 h)→-10℃(8 h)→-20℃(8 h)变温预冻处理能大幅提升超低温保存后花粉的萌发力;超低温保存后的解冻方式以-20℃(8 h)→4℃(8 h)→25℃(8 h)为最佳。     

高山红景天酪醇生物合成途径的探讨

酪醇作为高山红景天的主要活性成分之一,其生物合成途径尚不清楚.笔者对其生物合成途径作了分析和讨论.     

高山红景天开发研究概述与应用开发建议

珍稀药用植物高山红景天具有“固本扶正”之功效，是一种同人参一样野生品种珍稀，但很有发展前途的 环境适应性强的药材。作者较系统地概述了高山红景天的资源概况、化学成份、制剂学与药理学研究进 展，应用发展前景与应用开发建议。     

高山红景天浸提液超滤过程中温度的影响

研究了温度对高山红景天浸提液超滤过程的影响. 对浸提液微滤后,在不同温度下进行超滤,分别用重量法、吸光度法对溶液中可溶性固形物、非水杂质、主要有效成分红景天甙和酪醇(以红景天甙计)的含量进行了分析和测定. 结果表明,在40 ℃下进行超滤,对溶液中可溶性固形物、非水杂质的截留去除效果和主要有效成分的提纯效果较好,可溶性固形物含量由0.036 47 g/mL降低到0.011 58 g/mL,主要有效成分质量分数由4.38 %提高到13.48 %,过程回收率为97.63 %,超滤150 min的平均透液速率为9.22 mL/min. 在超滤过程中,选择合适的温度,能够有效地降低高山红景天浸提液中的可溶性固形物和非水杂质含量,使主要有效成分红景天甙和酪醇得到较好的分离和提纯.     

高山红景天超临界CO2萃取物的气相色谱-质谱分析

在萃取压力30 MPa、温度45℃、用超临界CO2萃取高山红景天粉末2 h,萃取物用气相色谱-质谱进行化学成分分析。鉴定出45种组分,占色谱峰总面积的73.2%,主要成分包括9,12-十八碳二烯酸乙酯,二十烷,1-二十七醇,乙酸十八酯,十八醛,22,23-二氢基豆甾醇。     

黑曲霉木聚糖酶基因xynB的克隆及在酿酒酵母中的表达

从黑曲霉(Aspergillus niger)克隆木聚糖酶基因xynB,利用重叠延伸PCR法去除其中的内含子.将该基因与质粒pYES2连接,构建真核表达载体,用醋酸锂化转法导人酿酒酵母(Sacharom yces cerevisiae)INVSC1菌株表达.利用α信号肽替换基因原信号肽,以考察信号肽对表达蛋白分泌的影响.结果获得2株重组菌株,分别为xynB连接原信号肽的pYES2-xynB菌株和xynB连接α信号肽的pYES2-xynB-α菌株.木聚糖酶B成功表达,SDS-PAGE检测到约24kDa目的蛋白质条带.木聚糖酶B最适催化温度为50℃,最适催化pH值为5.0,Mn2+对酶活具有强烈的抑制作用.将α信号肽取代原信号肽使酶活达到最高的诱导时间由72h缩短为48h,但是置换信号肽使最高酶活由7.59U降低为3.97U.     

黑曲霉基因文库的构建及葡萄糖淀粉酶基因的克隆

用噬菌体λEMBL3 DNA为载体成功地构建了黑曲霉3758的完整的基因文库。供体黑曲霉染色体DNA经EcoRI部份酶切和蔗糖密度梯度离心,回收15—20kb片段,以一定的比例与经EcoRI处理的载体λEMBL3 DNA连接,连接产物用大肠杆菌SMR10单菌系统提取的包装蛋白进行体外包装,包装物感染宿主大肠杆菌Q359,获得2.5×10~5重组噬菌体/μgDNA的包装效率,比Clarke-Carbon公式对构建黑曲霉染色体基因文库要求的重组克隆数高10倍。以编码葡萄糖淀粉酶第329—481位氨基酸的DNA作为探针,用原位噬菌斑杂交的方法,从10~5个重组噬菌斑中筛选出2个杂交阳性噬菌斑。复筛以后,用快速法提取DNA,经EcoRI和EcoR V双酶切以后,走电泳,用Southern印迹法将DNA转移至硝酸纤维素膜上,与~(32)p-标记的探针杂交,证实葡萄淀粉酶基因位于2.5kb的EcoRI、EcoR V片段上,该片段已亚克隆至ρBR322。     

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)糖基转移酶基因的克隆、序列分析及表达

为获得具有催化活性的糖基转移酶纯酶,本研究以短小芽孢杆菌基因组DNA为模板,利用简并PCR技术扩增到基因(GT-A)全长序列.该序列全长1 287bp、编码423个氨基酸,分子量约为49.2KD.经序列分析,该基因属于糖基转移酶基因.根据GT-A基因开放阅读框序列设计引物,构建了原核表达重组质粒GTA-pet28a,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功诱导出了一个约50kD的融合蛋白.纯化后测定其糖基转移酶活性,与37℃相比,80℃的反应温度其活性能提高3.4倍左右.研究结果表明,该酶是一种具有应用潜力的嗜高温糖基转移酶.     

短小芽孢杆菌(Bacillus p umilus )糖基转移酶基因的克隆、序列分析及表达

为获得具有催化活性的糖基转移酶纯酶,本研究以短小芽孢杆菌基因组 DNA 为模板,利用简并PCR 技术扩增到基因(GT‐A )全长序列.该序列全长1287 bp 、编码423个氨基酸,分子量约为49.2 KD .经序列分析,该基因属于糖基转移酶基因.根据 GT‐A 基因开放阅读框序列设计引物,构建了原核表达重组质粒GTA‐pet28a ,并在大肠杆菌 BL21(DE3)中成功诱导出了一个约50 kD 的融合蛋白.纯化后测定其糖基转移酶活性,与37℃相比,80℃的反应温度其活性能提高3.4倍左右.研究结果表明,该酶是一种具有应用潜力的嗜高温糖基转移酶.     

从黑曲霉发酵的果胶粗酶中分离纯化内切聚半乳糖醛酸酶

使用硫酸铵分级沉淀、CM -SephadexC - 5 0弱阳离子、POROSPE疏水层析和POROSHQ2 0强阴离子交换分离技术 ,从黑曲酶发酵的果胶酶粗品中纯化出一种电泳纯的果胶酶 .经SDS -PAGE电泳测定其相对分子量约 41.8kD ,最适pH和最适温度分别为 5 .0和 36℃ .     

关于黑曲霉生产纤维二糖酶发酵条件的研究

作者通过单因子及正交试验，研究了C源、N源、磷酸盐及吐温－80对纤维二糖酶产量的影响，并对温度、时间、pH值和培养基含水量等培养条件进行优化，使黑曲霉生产纤维二糖酶的酶活量由343．1U/g增至908.2U/g，提高了165％。     

红景天水提液对酪氨酸酶抑制效果的初步研究

高山红景天（Rhodiola sachalinensis A．Bor．）,又名库叶红景天,是一种生长在世界高山高纬度地区的珍贵药用植物,在我国主要分布在东北的长白山区．由于其生长环境极其恶劣,如缺氧、低温干燥、狂风、受紫外线照射,昼夜温差大等,具有很强的生命力和特殊的适应性．民间主要以其根茎人药,具有滋补强壮,抗疲劳,抗衰老,抗寒冷等药效;80年代又发现其具有镇静,提高脑力和体力等功效．但它对酪氨酸酶的抑制作用迄今未见报道．美国加州Berkeley大学的Kubo教授对酪氨酸酶抑制剂的研究最为前沿,他们已从天然植物中提取了几种酪氨酸酶抑制剂,测定了它们对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用．为进一步阐明高山红景天的药理作用,我们对高山红景天的水提液的抑制酪氨酸酶活性作用进行了研究,旨在对高山红景天植物的开发和利用提供实验数据．     

紫外诱变黑曲霉微生物转化甘草皂苷

甘草皂苷是甘草的主要药效成分。但由于其结构上的特点,在机体中的运输和药效发挥上受到一定限制。微生物转化方法可以定向脱去一个单葡萄糖醛酸基以改变分子的极性,转化后的产物单葡萄糖醛酸基甘草皂苷元可以更好地为机体所利用。本文对微生物转化甘草皂苷所用黑曲霉进行了改性研究,通过紫外诱变使黑曲霉产生变异。从致死率曲线中选取黑曲霉变异几率最大的时间范围,再进行初筛、复筛和发酵,最后选出对甘草皂苷转化较高的变异菌株。实验筛选出的变异黑曲霉菌株对甘草皂苷的转化率为原始菌株的6.5倍。     

黑曲霉B1降解氧乐果特性研究

从三明农药厂污泥中分离到一株具有较高降解氧乐果活性的真菌,初步鉴定为黑曲霉(Aspergillusniger.).该菌为好氧菌,最佳生长和最佳降解氧乐果的条件相同,均为30℃,pH5.5,可利用氧乐果作为唯一磷源进行生长.在氧乐果与葡萄糖共存的分批培养过程中,黑曲霉B1对葡萄糖与氧乐果的代谢表现为典型的顺序利用特性.黑曲霉B1优先利用葡萄糖为菌体生长的碳源和能源,在葡萄糖浓度降至0.1g L时,黑曲霉B1对氧乐果的降解速率明显增加,培养5d对1g L氧乐果的降解率可达55.75%.     

Aspergillus oryzae与Aspergillus niger原生质体的制备、再生与非对称灭活工艺研究

为提高菌丝原生质体的释放量和活力,分别考查了培养基碳源、菌龄、酶浓度、酶解时间及再生培养基种类对Aspergillus oryzae和Aspergillus niger 原生质体释放和再生的影响,并研究了两亲本原生质体的非对称灭活参数。结果表明:（1）以MPY液体培养基为菌丝培养基,按105个孢子/ml培养基的接种量接入新鲜孢子悬液,30 ℃/100 rpm分别振荡培养18和21 h,总浓度15 mg/ml的复合酶液（溶壁酶：蜗牛酶：纤维素酶＝1:1:1）按1 g湿菌丝球/10 mL酶液的比例,于30 ℃/70 rpm条件下酶解2.5 h,然后以高渗豆汁固体培养基为再生培养基,在上述制备工艺参数下两亲本原生质体的释放量和再生率均可达到107个/ml和30％以上;（2）通过灭活曲线确定A. oryzae HN3042原生质体于15 W紫光灯垂直距离13 cm处照射15 min,A. niger CICC2377原生质体于65 ℃水浴10 min,此灭活剂量可使99％以上双亲原生质体非对称失活。     

黑曲霉A.niger 6640生物转化制备蔗果低聚糖

优化了黑曲霉A.niger 6640发酵制备蔗果低聚糖的发酵条件,研究了A.niger6640中β-呋喃果糖苷转移酶(β-Ffase)的性质,用阴离子柱DEAE Sepharose CL-6B对β-Ffase进行了分离纯化,用SDS-PAGE电泳初步分析了β-Ffase的分子质量.结果表明:A.niger 6640发酵制备FOS的最佳p H值为7.6、最佳发酵时间为40 h、最佳发酵温度为33℃、最佳蔗糖质量分数为40%;在磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中,采用真空干燥工艺从A.niger 6640中制得的β-Ffase的催化反应的最佳p H值为6.5、最佳反应时间为16 h、最适酶用量为0.19 g;分离纯化得到的β-Ffase的分子质量约为75 ku.     

果胶裂解酶液态发酵条件的研究

通过单因素及正交实验对黑曲霉(Aspergillus niger)产生果胶裂解酶的发酵条件进行优化,研究了该酶的性质。实验表明,该酶的最适产酶培养基组成为(g·L-1):麸皮60,玉米秸杆40,尿素20,K2HPO4·3H2O 2．0,KCl 7．0,CaCO310．0。最适培养条件为:初始pH 6．0,30℃,接种量8％,培养2 d,此时酶活力为8．47 U／mL。该酶的最适温度50℃,最适pH 6．0。