柱前衍生反相离子对高效液相色谱法测定Fe(Ⅱ)

建立了将PDT作为柱前衍生试剂,用反相离子对高效液相色谱法分离和测定Fe(Ⅱ)的新方法.样品经柱前衍生后,以ODS C8色谱柱进行分离,以含60%(体积分数)乙腈、60mmol/L的高氯酸钠和20mmol/L的乙酸-乙酸钠水溶液(pH 4.65)作为流动相,流速为1mL/min,检测波长为295nm,整个分离过程在14min内完成.考察了Fe(Ⅱ)在不同水样中的回收率,当Fe(Ⅱ)的添加量为20μg/L时,其回收率为99%～102%.峰高、峰面积和保留时间的相对标准偏差分别为1.06%、2.87%和0.45%.方法的检出限为0.35μg/L(S/N=3).该法成功应用于环境水样中Fe(Ⅱ)含量的测定.     

对甲基苯磺酰氯柱前衍生法测定水中哌嗪

建立了一种高效液相柱前衍生化测定水中哌嗪含量的方法。选取对甲基苯磺酰氯(p-TSC)为衍生试剂对哌嗪进行衍生化,衍生产物利用液质联用(LC-MS)技术定性,高效液相色谱定量分析。方法采用Ultimate XB-C18色谱柱,以甲醇-水(体积比60:40)为流动相,流速为0.8 mL/min,检测波长为240 nm,室温下检测。实验结果表明,哌嗪的衍生化产物与过量衍生化试剂分离良好,在10～100 mg/L的范围内,哌嗪的浓度与其衍生产物峰面积呈现良好的线性关系,相关系数r>0.999。方法的检出限为0.09 mg/L,定量限为0.30 mg/L。回收率范围为88.2%～99.2%,相对标准偏差为2.5%～5.3%。通过正交反应试验确定了最佳衍生化条件:衍生温度为55℃,缓冲液pH为10.0,衍生时间10 min。     

柱前衍生化高效液相色谱-荧光检测法测定桑叶中的1-脱氧野尻霉素

采用柱前衍生化高效液相色谱-荧光检测法测定了桑叶中的1-脱氧野尻霉素(DNJ)。用0.05 mol/L HCl提取桑叶中的DNJ,采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)试剂在pH 8.5硼酸盐缓冲液下对DNJ进行衍生化,以0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH 5.0)-乙腈(体积比为85∶15)为流动相,利用C18色谱柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)分离,在激发波长为250 nm、发射波长为395 nm条件下进行荧光检测,DNJ的AQC衍生物与衍生化试剂的水解产物分离良好。方法的线性范围为0.5～25 mg/L,检出限为0.02 mg/L（S/N=3）。实验测得桑叶中DNJ含量为0.12%;回收率为96.1%～98.6%。     

HPLC柱前衍生法测定蛋白粉中N-乙酰神经氨酸的含量

建立了保健食品蛋白粉中N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)含量测定的高效液相(HPLC)柱前衍生方法。利用透析袋释放Neu5Ac并除去样品中的大分子蛋白质,以邻苯二胺为衍生剂,80℃水浴衍生1 h,采用高效液相紫外检测器进行检测。采用Intersil ODS-3 C_(18)色谱柱,流动相:乙腈-1%的四氢呋喃水溶液(含0.2%磷酸)(8:92,V:V),检测波长为227 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量为50μL。Neu5Ac在2.008～20.080 mg/L范围内峰面积与测定浓度呈良好的线性关系,回归曲线为:y=-7541.5x+25303,r=0.9991,方法检出限为0.2 mg/L,Neu5Ac平均回收率为101.5%,RSD为2.7%(n=6)。室温下,Neu5Ac衍生溶液在12 h内稳定。测定3批样品中Neu5Ac的平均含量为:99.4～103.0 mg/100 g。该方法适用于富含蛋白质的保健食品中Neu5Ac的含量测定。     

一种快速测定牦牛皮胶和牛皮胶中18种氨基酸的PITC柱前衍生HPLC法

建立一种有效测定牦牛皮胶与牛皮明胶中18种氨基酸含量的异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生-高效液相色谱法。对PITC衍生方法进行了优化,方法无需干燥和有机溶剂萃取过量PITC的步骤。牦牛皮使用胃蛋白酶在37℃下酶解72 h,酶解物冷冻干燥保存。样品用6.0 mol/L盐酸,110℃水解后,以PITC为衍生试剂进行衍生处理。采用Shiseido Capcell Pak C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.14 mol/L乙酸钠-0.5 m L/L三乙胺水溶液(p H 6.08)和60%乙腈,梯度洗脱,流速为1 m L/min,检测波长为254 nm。18种氨基酸在0.2~80 mg/L浓度范围内与峰面积间的线性关系良好(r2≥0.999 2),检出限为0.01~0.39 mg/kg,平均回收率为78.7%~121.0%,相对标准偏差(RSD)为0.05%~12.0%。结果表明,该方法衍生化步骤简单、灵敏度高、前处理时间短,可用于牛科动物皮胶中多种氨基酸成分和含量的测定。     

柱前衍生高效液相色谱法测定二乙醇胺脱氢产物亚氨基二乙酸和甘氨酸

以对甲苯磺酰氯(PTSC)为衍生剂,建立了柱前衍生高效液相色谱(HPLC)测定二乙醇胺脱氢产物中亚氨基二乙酸(IDA)和甘氨酸(Gly)含量的分析方法。IDA和Gly与衍生剂在碱性(pH 11)条件下于45℃反应15 min,进行柱前衍生,并利用高效液相色谱-质谱对衍生产物进行定性分析。衍生化产物采用VP-ODS色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm)分离,以0.03 mol/L醋酸铵溶液(pH 5.5)为流动相A、乙腈为流动相B(体积比为87∶13),进行等度洗脱,流速为1 mL/min,并采用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定,检测波长为235 nm。该法在IDA质量浓度为900~2 100 mg/L、Gly质量浓度为20~100 mg/L的范围内线性关系良好,相关系数(R2)均大于0.999。IDA和Gly的检出限(LOD)分别为0.089 7 mg/L和0.026 2 mg/L,加标回收率分别为98.7%~99.3%和98.0%~99.5%,相对标准偏差(RSD)分别为0.89%~1.23%和0.95%~1.11%(n=3)。该法具有反应条件温和、准确性高的特点,可用于工艺生产中IDA和Gly含量的测定。     

柱前电化学衍生-高效液相色谱法测定鱼肉中结晶紫和隐性结晶紫

建立了柱前电化学氧化还原衍生-高效液相色谱测定鱼肉中结晶紫(CV)及隐性结晶紫(LCV)残留量的方法。试样用体积分数0.5%乙酸乙腈溶液提取,酸性氧化铝吸附剂净化,乙腈和乙酸铵缓冲液(78∶22,V/V)等度洗脱,柱前库仑检测器500 m V电压下LCV衍生为CV,588 nm波长检测。CV,LCV含量在0.010~0.50 mg/L范围内线性良好(γ0.998),检出限为2.0μg/kg,定量限为5.0μg/kg。加标回收率为86.0%~91.0%。方法精密度、正确度和检出限等性能指标均达到兽残分析的要求,可用于水产品中CV,LCV测定。     

柱前衍生高效液相色谱法测定血清中克拉霉素的含量

建立了2,4-二硝基苯肼柱前衍生反相高效液相色谱紫外检测法测定血清中克拉霉素的含量,将在碱性条件下甲基叔丁基醚的血清萃取物,与2,4-二硝基苯肼在55℃酸性条件下反应30 min,然后用乙腈-0.05 mol/L pH 7.2磷酸盐缓冲液(4852)在Alltima C18色谱柱上进行分离,在340 nm检测衍生物.方法的线性范围为0.05～3.2 mg/L(r=0.9993);检出限为30 μg/L,绝对回收率大于89%,相对标准差小于10%.本方法已用于克拉霉素在健康受试者中的药代动力学研究.     

柱前衍生/高效液相色谱法测定烟用添加剂中的咪唑

建立了丹磺酰氯柱前衍生/高效液相色谱(HPLC)测定烟用添加剂中咪唑含量的分析方法。添加剂样品经碳酸盐缓冲溶液处理,丹磺酰氯进行柱前衍生化后,再经乙酸乙酯萃取,取有机层萃取液经干燥、过滤、浓缩、乙腈定容、过滤后,以C18柱为色谱柱,乙腈-水为流动相梯度洗脱,荧光检测器检测。确定最佳的衍生化反应条件为:丹磺酰氯溶液质量浓度1 000 mg/L,反应温度45℃,缓冲溶液p H值10. 0,超声振荡反应时间40 min,咪唑衍生物用外标法进行定量分析。该方法在0. 5~500 mg/L范围内线性关系良好,相关系数(r)为0. 999 5,对咪唑的检出限为0. 24 mg/kg,定量下限为0. 80 mg/kg,0. 5、10. 0、500 mg/L 3个加标水平下的回收率为89. 1%~97. 2%,相对标准偏差不大于7. 5%。该方法准确可靠,适用于烟用添加剂中咪唑含量的测定。     

生物转化L-脯氨酸生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的定量分析方法

以芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)为柱前衍生剂,四硼酸钠为缓冲溶液,建立了一种柱前衍生反相高效液相色谱(RP-HPLC)测定微生物转化L-脯氨酸生成反式-4-羟基-L-脯氨酸的定量分析方法。优化了衍生反应条件,当衍生反应体系中水和乙腈的比例为66∶34,p H值为9.9时衍生效果最佳。采用Agilent Extend C-18柱进行分离,以0.1%三氟乙酸水溶液和乙腈作为流动相,梯度洗脱,检测波长263 nm。L-脯氨酸和反式-4-羟基-L-脯氨酸均在0.01~5.00 mg/m L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999,检出限为5.00~7.00 ng/L,不同浓度下的平均回收率分别为98.9%~102%和97.9%~100%。该方法重现性好,精密度高,为定量分析微生物发酵液中的L-脯氨酸和反式-4-羟基-L-脯氨酸提供了有效方法。     

分散液液微萃取-柱前衍生-高效液相色谱法测定水样中双酚A

建立了分散液液微萃取-柱前衍生-高效液相色谱法测定水样中双酚A的分析方法.通过交互正交试验和混合型优化实验设计对影响因素(萃取剂体积、分散剂类型及其体积、水样体积、pH值及离子强度)进行了优化.优化后的分散液液微萃取条件为:60 μL萃取剂,0.4 mL分散剂(甲醇),pH 4.0;优化后的柱前衍生化条件:0.1 mL 2.0 g/L衍生剂(对硝基苯甲酰氯)、衍生化时间30 min;方法的线性范围:0.002～0.2 mg/L(r=0.9997),检出限0.007 μg/L(S/N=3);不同浓度双酚A的萃取率为59.0%～63.0%,相对标准偏差(RSD)2.5%～9.2%(n=5);水样中双酚A的加标率为86.5%～107.1%,RSD为4.0%～11.9%(n=5),其它雌激素(雌酮、雌二醇、雌三醇和17α-乙炔基雌二醇)对双酚A的测定无干扰.本方法可以对水环境中的痕量BPA进行检测,具有操作简便、快速等优点.     

超高效液相色谱-串联质谱法定性和高效液相色谱法定量分析天南星中氨基酸成分

为建立中药材中氨基类极性非紫外活性成分的定性与定量分析方法,以中药材天南星为研究对象,采用柱前衍生化技术,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,经C₁₈色谱柱(100 mm×2.1 mm, 3.5 μm)分离和超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)分析,共解析了天南星中20个成分,包括18个氨基酸和2个胺类化合物。经优化衍生化条件,应用高效液相色谱法(HPLC),以Diamonsil C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)分离,以乙腈和0.05 mol/L醋酸铵-醋酸缓冲液(pH 6.5)为流动相,梯度洗脱,在254 nm下检测,建立了同时测定15种氨基酸含量的方法,经方法学考察符合含量测定要求。谷氨酸、色氨酸在2~100 mg/L范围内、精氨酸在6~300 mg/L范围内、其余各氨基酸在0.8~40 mg/L范围内均呈良好的线性关系,相关系数均不小于0.9995;平均回收率在95%~105%之间,RSD均小于3%;并成功应用于12批中药材的测定。本方法简便、灵敏、准确,具有可操作性,可用于快速鉴定中药中的氨基类成分以及进行含量测定。     

柱前衍生化HPLC法测定酵母细胞壁中的甘露聚糖与β-葡聚糖

采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为柱前衍生化试剂,结合反相高效液相色谱法,建立了同时测定酵母细胞壁中甘露聚糖和β-葡聚糖的方法。样品中的多聚糖经盐酸高温水解得到甘露糖和葡萄糖,经PMP衍生后,以0.02 mol/L乙酸铵-乙腈(80.5∶19.5)为流动相等度洗脱,反相C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离,紫外检测器(波长250 nm)检测,所测2种单糖的含量通过换算后得到甘露聚糖和β-葡聚糖的含量。结果表明,甘露糖和葡萄糖在10.0~1 000 mg/L质量浓度范围内与对应峰面积呈良好的线性关系,相关系数(r2)大于0.999。样品在28.0~80.0 mg范围内加标水平的平均回收率为88.1%~91.0%,相对标准偏差(RSD)小于3%,甘露糖和葡萄糖的检出限(LOD)分别为0.10 mg/L和0.08 mg/L。该方法灵敏度高、准确性好、实用可靠,适用于酵母细胞壁样品中甘露聚糖和β-葡聚糖含量的分析测定。     

柱前衍生高效液相色谱法测定化工废水中乙二胺

建立了化工废水中乙二胺含量的柱前衍生高效液相色谱分析方法。利用N-(苄氧羰基氧基)琥珀酰亚胺(CBZ-OSu)与乙二胺在80℃下反应5 min后,由高效液相色谱-二极管阵列检测器进行分离检测,色谱分析时间为5 min。色谱柱为Waters Xbridge C18(150×4.6 mm,5μm);流动相为60%乙腈水溶液;1.0 m L/min流速下,等度洗脱;210 nm波长处检测。结果表明,乙二胺质量浓度在0.60~100 mg/L范围内,与对应的峰面积呈现良好的线性关系,相关系数为0.9989;方法的检测限为0.17 mg/L(S/N=3),定量限为0.58 mg/L(S/N=10);实际样品的加标回收率为95.5%~102.1%,相对标准偏差为0.14%;已用于测定化工废水中乙二胺。     

柱前衍生/高效液相色谱-荧光检测器测定面粉制品中的偶氮甲酰胺

建立了面粉制品中偶氮甲酰胺(ADA)残留量的丹磺酰氯柱前衍生结合高效液相色谱-荧光检测器的分析方法。面粉制品中的ADA经湿热处理后,转变成氨基脲(SEM),加入丹磺酰氯(DNS-Cl)进行衍生。采用Aglient TC C18(250 mm×4.6 mm,5μm)对衍生产物进行分离,流动相为乙腈-水(65∶35),流速1.0m L/min,柱温30℃,激发波长330 nm,发射波长530 nm,高效液相色谱-荧光检测器检测,外标法定量。偶氮甲酰胺在0.1~50 mg/L范围内具有良好的线性关系,相关系数(r)大于0.998,检出限(LOD)和定量下限(LOQ)分别为0.03 mg/L和0.10 mg/L。在0.1,0.3,1.0 mg/kg 3个加标水平下的平均回收率为78.4%~96.6%,相对标准偏差(RSD,n=6)为7.1%~9.4%。该方法具有简便、快速、灵敏等特点,可用于面粉制品中偶氮甲酰胺的检测。     

高效液相色谱柱后衍生法测定蜂王浆中的链霉素

采用高效液相色谱柱后衍生法测定蜂王浆中的链霉素。样品用庚烷磺酸钠的酸性溶液进行提取,通过LC-18柱和WCX柱两次固相萃 取达到净化的目的。该方法采用反相C8柱,以0.01 mol/L的庚烷磺酸钠溶液和乙腈为流动相,在碱性条件下以1,2-萘醌-4-磺酸钠溶液 为柱后衍生化试剂,用荧光检测器检测。该方法的线性范围为0.02～0.5 mg/L,相关系数为0.9958,方法的检出限和定量限分别为为 0.005 mg/kg和0.01 mg/kg,回收率范围为84.0%～104.0%,相对标准偏差不大于7.9%。结果表明,该方法能有效地减少蜂王浆中链霉素 检测的假阳性结果,符合目前检测工作的需要。     

4-二甲胺偶氮苯磺酰氯柱前衍生高效液相色谱法测定人体尿液中肌氨酸

建立了以4-二甲胺偶氮苯磺酰氯为柱前衍生试剂的高效液相色谱法测定人体尿液中肌氨酸的含量。通过优化衍生反应的条件,确定了最佳衍生条件为:反应时间20min,反应温度75℃,衍生反应pH为9.8,衍生试剂与肌氨酸比例为4∶1。采用Agilent TC-C18柱(250×4.6mm,5μm),以pH=7.0的9mmol/L磷酸盐缓冲溶液-乙腈(60∶40,V/V)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长465nm。结果表明,肌氨酸在0.002~4.00mmol/L范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9998;检测限(S/N=3)为0.70nmol/L;定量限(S/N=10)为2.33nmol/L;加标回收率为95.69%~107.79%。该方法简单、灵敏度高、稳定性好,可用于测定尿液中肌氨酸含量。     

柱前衍生高效液相色谱法测定烟草中阿维菌素残留

建立了烟草中阿维菌素残留量的柱前衍生高效液相色谱测定方法。烟草样品经乙腈提取,碱性氧化铝固相萃取柱净化,以三氟乙酸酐(TFAA)-N-甲基咪唑(NMIM)-乙腈(ACN)进行柱前荧光衍生化,用高效液相色谱-荧光检测器检测。结果表明,该方法对烟草中阿维菌素残留量的最低检测浓度为0.001mg/kg,添加回收率在89.37%～102.84%之间,相对标准偏差为3.02%～4.05%(n=5)。     

2-4-二硝基苯肼衍生/高效液相色谱法测定葡萄酒中总乙偶姻的含量

建立了测定葡萄酒中总乙偶姻含量的2,4-二硝基苯肼衍生/高效液相色谱法,确定了2,4-二硝基苯肼(DNPH)进行柱前衍生的最佳酸度、反应时间、DNPH用量、反应温度及衍生后处理步骤。采用UltimateC18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)对衍生产物进行分离,流动相为乙腈-水(55∶45),流速1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长363 nm。在优化条件下,乙偶姻在0～40.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.999 9。干红葡萄酒样品的加标回收率为95%～106%,相对标准偏差(RSD)为2.3%～3.4%;干白葡萄酒的回收率为94%～104%,RSD值为2.5%～3.1%。对几种不同种类葡萄酒的总乙偶姻含量进行测定,结果显示国产伪劣葡萄酒及自酿腐败葡萄酒中总乙偶姻的含量明显高于合格葡萄酒。乙偶姻的含量可为葡萄酒的品质鉴定提供参考。     

丹磺酰肼衍生-高效液相色谱-荧光检测器法测定水中痕量3-羟基丙醛

提出了丹磺酰肼衍生-高效液相色谱-荧光检测器法测定水中痕量3-羟基丙醛(3-HPA)的方法。将1.0 g水样、2.0 mL含200 mg·L^-1丹磺酰肼的乙腈溶液、1.0 mL 3.0%(体积分数)乙酸溶液混合,再用乙腈定容至50 mL,于40℃衍生反应30 min。以Agilent Eclipse Plus C₁₈色谱柱为固定相,以不同体积比的乙腈-0.10%(质量分数)七氟丁酸溶液的混合溶液为流动相进行梯度洗脱,采用荧光检测器测定。结果表明：衍生试剂丹磺酰肼与3-HPA衍生物在20 min内可实现基线分离;3-HPA的质量浓度在7.6～380.0μg·L^-1内与衍生物的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为1.1μg·L^-1;方法用于实际水样分析,测定值的相对标准偏差(n=6)为0.71%,3-HPA的加标回收率为98.0%～102%。