大肠杆菌MinC/FtsZ蛋白复合物的纯化和结晶

大肠杆菌在细胞分裂时,FtsZ(Filamentous temperature-sensitive protein Z)蛋白会在细胞中部潜在位点聚合形成Z环,而MinC蛋白会抑制Z环形成,从而控制细胞分裂。本研究将min C与fts Z目的基因克隆到合适的载体中,并导入到大肠杆菌中进行表达,采用亲和层析和分子筛纯化的方法得到MinC/FtsZ复合物蛋白进行晶体筛选。通过FtsZ、MinC分别单独转化、表达纯化后混合和FtsZ、MinC共转化法两种方法得到FtsZ/MinC蛋白复合物,并分别对其进行晶体筛选。实验结果表明,在适宜的表达条件下,利用分别转化、纯化再混合的方法得到的FtsZ和MinC蛋白复合比例约为1∶1;混合时加入GTP和Mg Cl2可以促进复合物聚集态更单一,通过晶体筛选初步得到形状为针状的FtsZ/MinC复合蛋白晶体,为MinC/FtsZ复合物的结构解析提供实验基础。     

大肠杆菌MinCD蛋白复合物纯化方法和晶体筛选

大肠杆菌在细胞分裂时,细胞中部潜在分裂位点的选择受到Min系统(Min C、Min D和Min E蛋白)的精确调控,其中Min C与Min D可以形成复合物以抑制Z分裂环在错误的位置形成。本研究采用基因克隆方法获得min C、min D基因的克隆,并表达得到Min C和Min D的重组蛋白,用亲和层析与凝胶过滤层析对所得蛋白进行纯化,通过min C、min D分别单独转化、表达纯化后混合和min C、min D共转化法两种方法得到Min CD蛋白复合物,并分别对其进行晶体筛选。结果表明,共转化法得到的Min CD复合物纯度较好,且比例约为2∶1,通过晶体筛选初步获得针状蛋白晶体,为Min CD复合物的结构解析提供了实验基础。     

细胞色素bc1复合物结晶的偏振拉曼光谱研究

本文报道了用５１４．５ｎｍ和４１３．１ｎｍ激光激发的细胞色素ｂｃ１复合结日 的偏振显微共振拉曼光谱和用１０６４ｎｍ激光激发的近红外傅里叶变换偏振拉曼光谱,已观察到不同结晶取向和偏振的影响。结果表明,这些取向排列和偏振的影响和分子的对称性质和结晶的三维结构有关。综可能随着三维结构中子单元和的中心的部位不同而改变,其对称性的不同与三不对称排列有关,也可归因子蛋白南环境电学上的不对称性。     

环糊精与聚1,3-二氧五环结晶内含复合物的合成与表征

合成并表征了环糊精与聚1,3-二氧五环的结晶内含复合物.聚1,3-二氧五环分子链上较高的氧原子密度使其能与3种常见的环糊精均形成结晶内含复合物.使用了红外光谱, 热重分析,X射线衍射,氢核磁共振,¹³C NMR,电子扫描显微镜对结晶内含复合物进行了研究.通过热重分析发现,结晶内含复合物比纯的环糊精更稳定.X射线衍射显示结晶内含复合物为隧道状结构.通过固体碳13交叉极化/魔角自旋核磁共振可以看出,在结晶内含复合物中环糊精的构象非常对称,而纯环糊精分子本身的构象不够对称.通过电子扫描显微镜观察了α -环糊精与聚1,3-二氧五环结晶内含复合物的表面形貌.     

取向对聚左旋乳酸/聚右旋乳酸复合物纤维结晶性能的影响

通过熔融纺丝的方法制备了PLLA/PDLA复合物初生纤维,在60℃拉伸获得高取向的牵伸纤维.采用X-ray散射为主要表征手段,结合差示扫描量热(DSC)、扫描电子显微镜(SEM)以及傅里叶变换红外光谱(FTIR)等技术,系统研究了不同初始结构的PLLA/PDLA复合物纤维在不同温度下的结晶行为,重点阐明了取向对PLA复合物纤维结晶结构的影响.结果表明,取向促进复合物纤维中立构晶的形成;将纤维升温至200℃停留3 min后,再进行降温,降温过程中,高度取向的牵伸纤维只有立构晶形成,而初生纤维则在150℃左右出现α晶,表明纤维中取向的立构晶会抑制α晶的形成.综合实验结果发现,通过低温牵伸初生纤维,然后高温(α晶熔点以上)退火,可制备出高取向且具有高立构晶含量的PLLA/PDLA复合物纤维.     

聚对二氧环己酮/CaCO3复合物的制备及其结晶性能研究

通过调节CaCO3晶须的含量,制备了一系列聚对二氧环己酮(PPDO )/CaCO3复合物(F),利用差示扫描量热计,偏光显微镜和X-射线衍射仪研究了F的结晶行为.研究结果表明,CaCO3晶须的加入并未明显改变PPDO的晶体结构;随着CaCO3晶须含量的增加,PPDO的球晶形态和F的热力学性能均发生了明显改变.     

基于配体、受体和复合物指纹的虚拟筛选方法比较

近年来, 作为基于配体和基于受体两种方法的补充, 以复合物指纹为基础的药物筛选方法相关研究正受到广泛的重视. 那么这种新兴的方法相对于传统方法在筛选结果准确率上是否具有优势? 同时, 由于复合物指纹可以通过复合物结构测定和将相应蛋白和配体进行分子对接两种方式获得, 那么基于这两种方式获得的复合物指纹所得的筛选结果准确率是否有显著性差异呢? 通过对一系列HIV-1蛋白酶复合物晶体结构同时进行基于配体的相似性搜索、分子对接传统的能量打分、基于复合物晶体结构的复合物指纹的相似性搜索和基于分子对接所得复合物结构的复合物指纹的相似性搜索的筛选比较, 结果表明: (1)如果三种方法都是直接基于实验结构, 那么复合物指纹和分子对接两种方法都因为是兼顾了受体和配体两个方面, 准确率都要高于仅仅基于配体的方法|(2)实际运用中, 通过实验测定所有复合物结构并不可行, 因此需要进行分子对接才能大量的获得复合物结构并进一步生成相应的复合物指纹, 令人兴奋的是, 基于此种方式获得的复合物指纹与直接基于实验复合物结构获得的复合物指纹在筛选结果上并无显著性差异, 从而可以作为实验复合物指纹筛选方法的有效补充.     

环氧乙烷和环氧丙烷共聚物及其盐复合物的结晶与熔融

环氧乙烷和环氧丙烷共聚物及其盐复合物的结晶与熔融齐力，林云青，陈东霖（中国科学院长春应用化学研究所长春１３００２２）关键词环氧乙烷环氧丙烷共聚物，高分子固体电解质，结晶，熔融聚环氧乙烷（ＰＥＯ）及其盐复合物等￣［１，２］是一类高分子固体电解质，但ＰＥ...     

测定高聚物结晶动力学参数的非等温理论和方法

对测定高聚物结晶动力学参数的非等温结晶理论和等速变温ＤＳＣ方法进行了讨论，文中包含了作者在此领域研究工作的最新进展。     

聚乳酸立体复合物的结构与性能研究进展及展望北大核心CSCD

聚乳酸(PLA)类材料以其独特的生物相容性和生物可降解性备受关注。将其两种旋光对映体,即PLLA与PDLA共混,会产生一种具有更高熔点的立体复合物(sc-PLA),并能提高聚合物的结晶度、结晶速率以及耐热性,对于PLA类材料的开发和应用具有重要意义。本文从结晶机理、球晶形态、热稳定性和降解性能等方面综述了近年来有关sc-PLA结构与性能的研究进展,并对sc-PLA研究方向提出了作者的观点。     

镧配合物对等规聚丙烯等温结晶性能的影响

利用Avrami方程和Lauritzen-Hoffman结晶动力学理论研究了一种镧配合物LaC对等规聚丙烯(iPP) 等温结晶行为的影响. 差示扫描量热法(DSC)和X射线衍射技术(XRD)研究表明, LaC的加入并未改变iPP的结晶形态, 但LaC的存在能提高体系的结晶度并显著加速iPP的结晶过程. 在130 ℃进行等温结晶时, 含0.5%LaC(质量分数)的iPP与纯iPP相比, Avrami指数n值无显著差异, 但前者总的结晶速率常数k值比后者提高约4倍,而半结晶时间t1/2值减少到后者的62%, Avrami方程分析结果表明LaC的存在主要起到增加晶核的作用. 利用Lauritzen-Hoffman结晶动力学理论, 通过对iPP在121 ℃、124 ℃、127 ℃和130 ℃下等温结晶的数据进行分析可知, 加入0.5%的LaC后, 体系的成核常数kg从纯PP的3.3×105 K2增加到PP/LaC的3.8×105 K2, 而结晶生长时大分子在垂直于分子链方向折叠的界面自由能σe从纯PP的0.223 J·m-2降低到PP/LaC的0.154 J·m-2, 表明LaC在iPP结晶过程中不仅起到增加晶核的作用, 同时使大分子链更易排入晶格, 即起到促进结晶成长的作用.     

Purification and initial characterization of a putative blue light-regulated phosphodiesterase from Escherichia coli

The Escherichia coli protein YcgF contains a photosensory flavin adenine dinucleotide (FAD)-binding BLUF domain covalently linked to an EAL domain, which is predicted to have cyclic-di-guanosine monophosphate (GMP) phosphodiesterase activity. We have cloned, overexpressed and purified this protein, which we refer to as blue light-regulated phosphodiesterase (Blrp) for its putative activity. Blrp undergoes a reversible photocycle after exposure to light in which the spectrum of its photostationary state and kinetics of recovery of the dark state are similar to those of the isolated BLUF domain of the AppA protein. Unlike the AppA BLUF domain, the chromophore environment in the context of full-length Blrp is asymmetric, and the protein does not undergo any detectable global changes on exposure to blue light. When overexpressed in E. coli, Blrp copurifies with certain proteins which suggests that it plays a protective role in response to oxidative stress. Predicted proteins from Klebsiella pneumoniae and from a bacterium in the Sargasso Sea are similar to E. coli Blrp in both their BLUF and EAL domains, which suggests that blue light sensing in these bacteria may follow similar pathways.     

基因工程人表皮生长因子的分离纯化及其浓度的在线检测

在分离纯化快速开拓系统(AKTA explorer 100)中用凝胶(Sephadex G—50 superfine)纯化人表皮生长因子,并在优化的条件下对人表皮生长因子(hEGF)进行定量测定?与经离子交换柱、SDS—PAGE及凝胶图象扫描分析系统的人表皮生长因子标准品间相互印证。结果表明在优化条件下,在SDS—PAGE上可得到与标准样品hEGF一样清晰的单条带,其产品纯度高于94％,检出限可达1μg／mL。该法不仅对人表皮生长因子的在线检测行之有效,而且对其它蛋白质分离的在线检测也具有参考价值。     

Purification and Refolding of Cyclodextrin Glycosyltransferase Expressed Escherichia coli

Recombinant DNA technology and protein engineering are currently utilized in the cost-effective production of pharmaceutical and industrial proteins with native conformation. Escherichia coli retains its dominant position as the first choice of host for speed, simplicity and well-established production protocols. However, protein production using recombinant E. coli occasionally encounters complex purification and refolding steps. This paper introduces an efficient scheme for purification andin vitro refolding of industrially important proteins including cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase) expressed in recombinant E. coli employing a polycationic amino acid fusion system. Fusion of polycationic amino acids to CGTase allowed purification and refolding of CGTase to be simple and efficient. A novel CGTase production strategy will be discussed by considering recent progress in protein purification and refolding techniques.     

Temperature-dependent Crystallization and Phase Transition of Poly(L-lactic acid)/CO_2 Complex Crystals

Semicrystalline polymers can crystallize in the unique crystalline polymorph and show different phase behaviors under the highpressure CO_2 treatment. Understanding such unique crystallization and phase transition behavior is of fundamental importance for the CO_2-assisited processing of semicrystalline polymers. Herein, we investigated the polymorphic crystalline structure, phase transition, and structureproperty relationships of poly(L-lactic acid)(PLLA) treated by CO_2 at different pressures(1-13 MPa) and crystallization temperatures(T_c's, 10-110 °C). PLLA crystallized in the PLLA/CO_2 complex crystals under 7-13 MPa CO_2 at T_c≤50 °C but the common α crystals under the high-pressure CO_2 at T_c≥70 °C. Solid-state nuclear magnetic resonance analysis indicated that the PLLA/CO_2 complex crystals possessed weaker interactions between the PLLA chains than the common α crystals. The PLLA/CO_2 complex crystals were metastable and transformed into the thermally stableα crystals via the solid-to-solid route during heating or annealing at the temperature above 50 °C. The complex crystals of PLLA produced at low T_c was more ductile than the α crystals due to the lower crystallinity and the plasticizing effect of CO_2.     

高抗冲共聚聚丙烯的结晶动力学及形态

用示差扫描量热仪(DSC)、偏光显微镜(PLM)和场发射扫描电镜(FESEM)对高抗冲共聚聚丙烯(HIPP)的非等温结晶行为、等温结晶动力学及结晶形态进行了系统研究, 并与均聚聚丙烯(iPP)进行了对比. 非等温热分析结果表明, HIPP的结晶和熔融温度均低于iPP. 等温结晶动力学分析结果表明, HIPP的半结晶时间、结晶活化能及分子链折叠端表面自由能均高于iPP. 研究结果表明, HIPP中的共聚组分与基体存在部分相容性, 并阻碍其结晶. PLM和FESEM研究结果表明, HIPP中存在大量均匀分散的橡胶粒子, 其直径约1~2 μm, 并具有核-壳结构. 增韧相在基体相中的良好分散与粘结, 以及有效核-壳增韧结构的形成是实现HIPP良好刚-韧平衡性能的关键. 这与HIPP的组成及聚合工艺密切相关.     

聚醚酯/蒙脱土复合材料的结晶动力学和结晶形态

有机－无机复合材料是近来材料科学发展的热点,无机物对基体的结晶行为有很大的影响［１,２］．聚醚酯嵌段共聚物的高弹性依靠硬段结晶形成的物理交联点［３,４］,因而任何影响结晶的因素必然导致其性能的变化．通过聚醚酯与蒙脱土的复合,研究聚醚酯的结晶行为的变化...     

Influence of Molecular Interaction on Crystallization Behavior of Glycine from Mother Liquor

The mother liquor for preparing industrial HCN was investigated, to analyze the side-products’ structure and influence of molecular interactions of side-products with glycine and solvent on the glycine’s crystallization process. The side-products(SPs) were super-branched oligmers with plenty of hydrophilic groups, which could affect the crystallization process by interactions such as hydrogen bond. Alcohol-water mixed solvent with different polyols could be used to weaken the SPs-glycine interaction and strengthen the SPs-water interaction, which help to improve the crystallization efficiency and purity. After optimization, SPs’ mass fraction in glycine could be reduced by 80% and the morphology of crystal particles could also be improved.