导入蓖麻毒蛋白的供体淋巴细胞在小鼠皮肤移植中产生的特异免疫耐受

以小鼠为研究对象进行皮肤移植,受体为BALB/C鼠,供体为C₅₇BL/6鼠。用氯化钙介导蓖麻毒蛋白(ricin)进入供体鼠的脾细胞制成毒细胞,适时地注入受体体内。带有蓖麻毒蛋白供体脾细胞,一方面可提供特异移植抗原(主要组织相容性抗原)使特异的T,B淋巴细胞识;另一方面,它被识别裂解后,释放蓖麻毒蛋白,又可杀伤与其识别的T,B淋巴细胞,使受体对供体移植物产生耐受。实验共设两组,在皮肤移植前后分别用包埋蓖麻毒蛋白的供体脾细胞处理,两组移植皮片存活时间均比相应对照组有显著延长(t＞t_0.01)。混合淋巴细胞培养实验和淋巴细胞转化实验证明了实验组对供体细胞的免疫应答及免疫细胞的分化能力均受到抑制。对这一新设想进行了初步的研究。     

异种异体脱细胞神经支架制备的实验研究

目的:探讨用化学方法制备异种异体脱细胞神经支架,为周围神经组织工程提供有效的神经支架.方法:A组,SD大鼠5只,体200～250g,取双侧坐骨神经;B组,家兔1只,体重500～600g,取周围神经10根,与A组等粗等长;C组,家犬1只,取周围神经10根,与A、B组等长等粗.三组神经均采用TritonX-100、脱氧胆酸钠等进行脱细胞处理.用HE染色对去细胞程度、脱髓鞘程度及神经管道完整性进行评价.结果:HE染色A、B、C组轴突及细胞核均消失,神经内膜形成不规则圆形空腔.结论:在TritonX-100、脱氧胆酸钠的处理下,A、B、C组的细胞均被脱净,可以作为组织工程神经的支架.     

新型同种异体骨修复骨缺损动物实验研究

目的 探究新型同种异体骨修复骨缺损效果。方法 用雄性新西兰兔构建骨损伤动物模型,将60只兔随机分为实验组、对照组和空白对照组。麻醉,逐层切开,暴露股骨外侧面,在股骨近心端之外缘、大转子下缘1 cm处,用直径4 mm球头精密研磨机制备深度约为1 mm的骨缺损。同样的方法处理对侧股骨。在实验组和对照组每只兔的左股骨缺损区填充皮质骨粒,右股骨缺损区填充松质骨小块,轻压填紧,尽量使材料与孔密合,分层缝合。空白组动物进行上述同样手术,不填充任何材料。上述各组动物分别于术后1、4、8和12周,行影像学(X线)及病理组织学检查。结果 术后1周,3组动物骨缺损修复情况无差别;术后4、8和12周时,实验组动物骨组织修复速度优于对照组,显著优于空白对照组。结论 该型同种异体骨能够刺激间充质细胞分化为成骨细胞,推进骨细胞的形成及骨痂成熟,是较为理想的骨移植材料。     

小鼠免疫脾细胞与SP2／0细胞融合的杂交瘤细胞的超微结构…

对ＳＰ２／０骨髓瘤细胞，免疫脾细胞和由二者融合而分泌抗水貂肠炎病毒（ＭｉｎｋＥｎｔｅｒｔｉｔｉｓＶｉｒｕｓ，ＭＥＶ）单克隆抗体的杂交瘤细胞超微结构进行了研究。经ＭＥＶ免疫的动物脾细胞糙面内质网发达，细胞质与细胞核的比例增大，贴壁生长的ＳＰ２／０细胞的表面中央为微线毛集中区，其余部分则遍布皱褶，细胞质中内质网不发达，由ＳＰ２／０细胞和免疫脾细胞融合形成的杂交瘤细胞，表面均匀分布有皱褶，无微绒毛，细胞     

IL-2联合银耳多糖激活的同种脾细胞对肝癌实验性治疗的研究

目的研究淋巴因子IL-2联合银耳多糖(Tremella Polysaccharide TP)共同激活的小鼠脾细胞对体外肿瘤细胞的杀伤作用及小鼠移植性肝癌的治疗作用.方法将IL-2激活的小鼠脾细胞(即LAK细胞)和IL-2与银耳多糖协同激活的小鼠脾细胞(即TP-LAK细胞)分别作用于体外培养的3H-TdR标记的肿瘤细胞P815,H22和B16,2h后用γ-闪烁计数仪进行检测,并计算杀伤程度.将上述激活的小鼠脾细胞在小鼠荷肝癌局部皮下注射,隔日1次,共5次.检测肿瘤质量、体积、组织学改变和主要脏器的形态学改变.结果 IL-2与银耳多糖激活的小鼠脾细胞对体外培养的肿瘤细胞有明显的杀伤作用,2种效应细胞对B16杀伤作用最强,H22次之,P815最弱,TP-LAK细胞的作用较之LAK细胞更强,P<0.05.治疗组肝肿瘤质量、体积均低于对照组.组织学上肿瘤坏死程度重且范围广,淋巴细胞、单核细胞浸润明显,纤维组织增生明显.银耳多糖协同IL-2实验组较单纯的IL-2实验组表现得更为明显.除脾脏外,其他主要脏器无明显形态学变化.结论 IL-2激活脾LAK细胞是有效的抗肝癌细胞,IL-2 与银耳多糖在活化脾细胞提高抗肿瘤方面具有协同作用.其对体内主要脏器无明显影响.     

啮齿类实验动物脾病理变化观察与分析

目的 对2020年10月北京市实验动物抽检中存在的脾病理变化进行观察,并对病变出现的可能原因进行分析,为后续实验动物送检及饲养管理提供合理建议。方法 动物经安乐死后,取其脾,制成切片后进行HE染色,利用光学显微镜进行病理学观察并作出诊断。结果 在抽检的360只啮齿类动物(包括170只小鼠、80只大鼠、100只豚鼠以及10只地鼠)中,来自不同机构的10只SPF级ICR小鼠和10只SPF级SD大鼠出现了白髓细胞减少、红髓髓外造血增加、巨噬细胞增加等病理变化。结论 抽检中所出现的脾病变可能与实验动物的年龄、实验动物长期接触某种毒性物质、自身免疫缺陷、感染或其他部位发生肿瘤相关。所以,在进行实验动物质量抽检时,应尽量避免送检幼龄或老龄动物,同时进一步完善饲养管理制度,确保实验动物健康。     

CTLA4—Ig诱导免疫耐受的机制及应用研究

CTLA4－Ig作为阻断B7－CD28／CTLA4共刺激通路、诱导抗原特异性T细胞克隆无能的最有效制剂，其作用机制主要有三：抑制T细胞的活化和效应过程、调节Th1/Th2型细胞分化、阻断树突状细胞的分化成熟。对于CTLA4－Ig的应用研究很多，取得一定效果的同时也存在局限性。本从不同途径探讨CTLA4－Ig诱导免疫耐受的作用机理及应用研究，为进一步临床应用提供参考。     

小鼠脾细胞DNA合成实验技术及其影响因素的研究

本文以测定氚化胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入新鲜制备的离体的小鼠脾有核细胞DNA的方法,来判断细胞DNA合成能力,并对影响脾细胞DNA合成的某些基本因素的作用进行了研究。研究表明,2毫升pH7.4的Eagle培养液中含4×10(?)个脾有核细胞时,加入1.2微居里~8H-TdR(比活度为5居里/毫摩尔),持续作用4小时,可获最佳实验结果。植物血凝素(PHA)和小牛血清在此实验中可以不用。     

人绒毛膜促性腺激素的纯化及其对小鼠脾细胞产生CSFs的诱导作用

HCG 粗品(10Iu/mg)经乙醇抽提,Sephadex G-100和 SE-Sephadex C-50凝胶过滤后,纯化了800倍,免疫活性达8370Iu/mg.经 SDS-PAGE 鉴定 HCG 的两亚基分子量分别为17000和32000.用纯化的 HCG 制备具有较高滴度的抗 HCG 抗血清.通过软琼脂培养法观察了 HCG 诱导小鼠脾细胞产生 CSFs 的影响,结果表明 HCG 浓度为400Iu/mg时,诱导效应最大。时间依赖曲线以72小时的 CSFs 活力最高.HCG 的诱导作用可以被抗HCG 抗血清完全中和。     

大鼠口服免疫耐受与皮肤移植的研究

目的利用口服供者脾细胞延长受者大鼠皮肤存活时间,检测调节性T细胞在移植前后的变化,探讨口服免疫耐受的机制。方法以纯系SD大鼠为供者,纯系Wistar大鼠为受者,行异体皮肤移植,将24只受者大鼠随机分为A组（对照组,口服PBS）、B组（每日口服SD大鼠脾细胞1×10^7个）,C组（每日口服SD大鼠脾细胞5×10^7个）,对受体进行450Rad^60Co照射,然后检测受者外周血及脾脏CD4＋CD25＋、CD8＋CD28-调节性T细胞（Treg）,并对受者进行供者脾细胞导管灌胃,每次口服5×10^7个细胞,每日一次,7d后检查迟发型超敏反应（DTH）,并行皮肤移植,观察移植皮肤的存活时间,复查Treg两次。结果口服脾细胞后,DTH反应均出现明显的抗原特异性降低;C组的皮肤移植存活时间达到19．17d±1．94d,与前两组比较差异有显著性（P〈0．01）。在口服供体脾细胞延长皮肤移植存活大鼠（C组）的外周血及脾脏中CD8＋CD28-Treg均比口服前明显增高（P〈0．01）,并能维持2周以上。结论口服抗原可以引起受者对异基因抗原的特异性免疫反应降低,使受者的皮肤移植存活期延长,CD8＋CD28-Treg在口服免疫耐受的机制中发挥了重要作用。     

巴马香猪无细胞真皮与人无细胞真皮动物移植实验效果的比较

目的:比较辐照巴马香猪无细胞真皮与辐照人无细胞真皮移植动物实验效果.方法:以机械去表皮法制备无细胞真皮与人无细胞真皮辐照(剂量30 KGy)处理后移植于W istar大鼠全厚皮肤缺损创面进行比较.结果:辐照处理的巴马香猪无细胞真皮与人无细胞真皮在大鼠创面愈合过程相似,愈合后创面收缩率差异不显著.结论:辐照处理的巴马香猪无细胞真皮与辐照处理的人无细胞真皮移植于W istar大鼠全厚皮肤缺损创面恢复效果无显著差异,可作为人无细胞真皮的替代品进一步用于烧伤治疗的研究.     

巴马香猪无细胞真皮与人无细胞真皮动物移植实验效果的比较

目的：比较辐照巴马香猪无细胞真皮与辐照人无细胞真皮移植动物实验效果.方法：以机械去表皮法制备无细胞真皮与人无细胞真皮辐照（剂量30 KGy）处理后移植于W istar大鼠全厚皮肤缺损创面进行比较.结果：辐照处理的巴马香猪无细胞真皮与人无细胞真皮在大鼠创面愈合过程相似,愈合后创面收缩率差异不显著.结论：辐照处理的巴马香猪无细胞真皮与辐照处理的人无细胞真皮移植于W istar大鼠全厚皮肤缺损创面恢复效果无显著差异,可作为人无细胞真皮的替代品进一步用于烧伤治疗的研究.     

冻干猪脾转移因子的紫外吸收度与核糖含量关系的实验研究

通过对猪脾转移因子的核糖含量和紫外吸收率这两上质量控制指数的实验研究，发现两者在质量控制方面有相辅性。在一定的浓度范围内，核糖含量与紫外吸收度具有良好的线性关系，其相关系数〉０．９５。     

两个细胞生物学实验的实验方法改进

细胞生物学实验是学生了解细胞相关的知识和技能最直接有效的手段,如何在有限的时间内让学生了解到更多的实验知识及掌握更多的实验技能,对实验教学方法不断改进显得非常重要.本人结合自身教学经历,对细胞生物学实验课程中的两个常规实验方法进行了改进,并对实验课教学的方法提取了自己的观点与建议.     

细胞生物学实验课程的教学改革探索

细胞生物学实验课程是细胞生物学理论教学的重要组成部分,是提高学生动手能力,培养学生严谨求实科学态度的重要手段.该文针对目前高校细胞生物学实验课程中普遍存在的问题,提出增加多媒体教学、开设开放性实验、充分利用实验时间等建议,以期增强学生的自主性与参与性,培养出更多动手能力强、专业素质高的人才.     

IL-2联合银耳多糖激活的脾细胞对体外肿瘤细胞杀伤作用的研究

目的研究淋巴因子IL-2联合银耳多糖(Tremella Polysaccharide TP)共同激活的小鼠脾细胞对肿瘤细胞的体外杀伤作用.方法用甲基-3氢胸腺嘧啶核苷标记肿瘤细胞H22,B16,p815,将标记的靶细胞悬液调至1×105/mL,分别以效靶比40∶1,20∶1和10∶1加入效应细胞,混匀后置37℃5%CO2培养箱内培养2h,2h后用γ-闪烁记数仪对上述细胞悬液进行检测.结果 2种效应细胞对B16杀伤作用最强,H22次之,p815最弱,TP-LAK细胞的作用较之LAK细胞更强(P<0.05),且效靶比越高,杀伤作用越强.结论 IL-2激活脾LAK细胞是有效的抗肿瘤细胞,IL-2与银耳多糖在活化脾细胞提高抗肿瘤方面具有协同作用.     

小鼠同种异体及异种神经移植后脾脏T淋巴细胞亚群的变化

目的通过化学法萃取的去细胞异体及异种神经移植后,观察移植免疫排斥过程中小鼠脾脏T细胞总数与亚群变化,探讨周围神经缺损修复的可行性。方法BALB/c小鼠随机分成假手术组、新鲜自体神经移植组、新鲜同种异体神经移植组、新鲜异种神经移植组、化学去细胞同种异体神经移植组和化学去细胞异种神经移植组,每组32只。分别在神经移植术后3、71、4、28 d,每组各取8只小鼠脾脏,淋巴细胞分离液获取淋巴细胞,计数。用荧光标记的CD3+、CD4+、CD8+、CD25+单抗作用后,流式细胞仪检测T淋巴细胞及其亚群百分数,Stata7.0统计软件进行统计处理。结果在7 d1、4 d、28 d各时间点上,化学去细胞神经同种异体和异种神经移植组CD3+、CD4+、CD8+、CD25+阳性T细胞百分率与假手术对照组、自体神经移植组相比无显著差异(P>0.05),而新鲜同种异体及异种神经移植组在相同时间点上的CD3+、CD4+、CD8+、CD25+阳性T细胞百分率与假手术对照组、自体神经移植组相比则有明显增高,差异显著(P<0.05)。结论新鲜同种异体周围神经移植后的排斥属于急性排斥反应。化学去细胞处理的同种异体神经的免疫原性等于或接近于自体神经,要明显低于新鲜同种异体神经移植。     

输注体外诱导的同种反应性淋巴细胞诱导大鼠肝脏移植免疫耐受的研究

目的 观察输注体外诱导的同种反应性淋巴细胞,是否可以延长大鼠移植肝脏的存活时间,从而探索一条诱导肝移植免疫耐受的新途径.方法 以供者Lewis大鼠淋巴细胞作为刺激物,体外刺激受者BN大鼠淋巴细胞增殖,应用CFSE（羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）标记法检测增殖情况;将增殖后的BN大鼠淋巴细胞经照射灭活后输注给同品系的BN大鼠,并行Lewis到BN的肝移植,观察肝移植后BN大鼠生存期.结果 同种反应性淋巴细胞体外能够活跃增殖;采用同种反应性淋巴细胞输注可以显著延长肝移植大鼠的存活时间（P＜0.05）.结论 体外诱导的同种反应性淋巴细胞输注,有可能成为诱导抗原特异性免疫耐受的一种新途径.