云芝糖肽在高效液相凝胶柱上色谱行为的研究

用高效波相凝胶柱测定了云芝糖肽（PSP）主要组分的分子量,发现分子量随着流动相离子浓度的变化而变化,离子浓度越小,分子量越大。结果表明,以已知分子量的多糖Dextran作标准测得的云艺糖肽的分子量只是一个相对值,但在流动相离子浓度一定情况下仍可作为质量控制的一个指标。     

DEAE-纤维素法从琼脂中分离制备琼脂糖工艺研究

采用DEAE-纤维素法静态和动态两种工艺从琼脂中分离制备琼脂糖,并考察了最佳工艺条件。静态吸附的最佳工艺条件为:在80℃下,浓度为40g/L的琼脂溶液与25g DEAE-52纤维素进行4h的离子交换,制得的琼脂糖凝胶强度为1028g/cm2,硫酸根含量为0.208%,透明度为64.0%,凝固温度为36.0℃,融化温度为90.2℃,得率为57.2%;动态吸附的最适工艺条件为:在80℃下,浓度为8g/L的琼脂溶液,以1.5m L/min的上样流速流经填充60g DEAE-52纤维素的层析柱,制得的琼脂糖凝胶强度为1040g/cm2,硫酸根含量为0.159%,透明度为65.8%,凝固温度为36.5℃,融化温度为89.8℃,得率为50.3%。DNA Marker电泳实验表明,自制琼脂糖具有优异的电泳性能,能满足生化实验要求。     

Fe3O4@ZIF-8-表面辅助激光解吸/电离质谱法检测美洲大蠊多肽

本实验在室温下合成了以Zn作为金属中心,2-甲基咪唑作为连接剂的磁性金属有机框架材料Fe₃O₄@ZIF-8,以Fe₃O₄@ZIF-8作为固体基质,通过建立Fe₃O₄@ZIF-8-表面辅助激光解吸/电离质谱(SALDI-MS)法,实现了美洲大蠊小分子多肽IPMTAPGL-NH₂、LTAPGL-NH₂、SLMTGPGL-NH₂、SLHTAPGL-NH₂的快速检测。实验优化了基质浓度、检测限和点样方法等条件,考察了该基质对美洲大蠊多肽IPMTAPGL-NH₂的质谱信号影响。与传统基质辅助激光解析电离质谱法(MALDI-MS)相比,Fe₃O₄@ZIF-8-SALDI-MS法检测背景更干净,目标多肽响应更强,检测灵敏度更高。该法可应用于血样中美洲大蠊多肽IPMTAPGL-NH₂的快速检测。     

多粘类芽孢杆菌HY96-2胞外多糖的分离纯化

多粘类芽孢杆菌HY96-2发酵液经乙醇沉淀,Sevag法去蛋白,透析和DEAE-52离子交换柱等手段纯化,获得HY96-2胞外多糖组分B和寡糖组分D,其中多糖组分B纯度为91.39%。进而采用凝胶渗透色谱法(GPC)、气相色谱法(GC)测定了多糖组分B的分子量,得组分B的分子量为1.22×10~6 Da。实验对组分B的单糖组成进行了分析,确定其含有5种单糖:鼠李糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖,它们的摩尔比为:2.52∶0.25∶1∶1.61∶2.24,为一种新结构多糖。     

水溶性酵母β-葡聚糖的制备及免疫活性评价

以废啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)为原料, 通过稀酸与稀碱处理获得碱不溶性酵母β-葡聚糖(SCBG), 进而在低温强碱/脲水溶液中氧化降解得到水溶性酵母β-葡聚糖(SCBGs), 再经层析柱分离得到4个纯化组分(SCBGs-0-1, SCBGs-1-1, SCBGs-1-2和SCBGs-1-3). 利用高效液相色谱、 高效凝胶渗透色谱与十八角激光光散射联用技术、 核磁共振波谱及与刚果红结合实验等对4个纯化组分的单糖组成、 分子量及化学结构进行了分析, 并通过其对巨噬细胞RAW 264.7吞噬能力及NO和TNF-α释放量的影响评价其免疫活性. 研究结果表明, 各纯化组分均由单一的葡萄糖构成, 是一类以β-1,3-D-葡聚糖为主链且在主链C₆位羟基上具有分支的β-1,3/1,6-葡聚糖,其分子量依次为198000, 960000, 270000和18700, 除SCBGs-1-3外, 其余3个组分均具有超螺旋结构, 且4个组分均能显著增强RAW 264.7的免疫活性.     

川芎多糖脱色方法比较

比较了活性炭、H2O2和大孔吸附树脂对川芎多糖提取液的脱色效果。选用极性大孔树脂S-8在工作液流速为2BV/h,川芎浓度为0.33g/mL时,脱色率为92.7%,多糖保留率为93.0%,表明S-8适合用于川芎多糖提取液脱色。     

甘露聚糖肽的结构鉴定

采用离子交换柱层析和凝胶柱层析从甘露聚糖肽原料中分离纯化得到4种均一糖肽MT1-A,MT1-B,MT2-A和MT2-B;通过单糖组成分析、甲基化分析、氢核磁共振谱(~1H NMR)、红外光谱(IR)和氨基酸组成分析等手段对均一糖肽MT1-A,MT1-B和MT2-B的结构进行了鉴定.结果表明,3种均一糖肽的单糖组成、糖残基的连接方式与MT2-A相同,但是分子量以及氨基酸总量有所不同.测定了不同批次甘露聚糖肽原料的~1H NMR谱,以MT2-A的~1H NMR谱图为标准谱,以异头氢区域为鉴定区域,通过计算不同批次甘露聚糖肽原料以及其它3种均一糖肽与MT2-A的~1H NMR谱的相关系数,定量评价了不同批次甘露聚糖肽原料与4种均一糖肽的相似程度.结果表明,甘露聚糖肽是由糖链结构一致、分子量和氨基酸含量不同的几种均一糖肽构成的混合物.     

响应面法优化大孔树脂对地参多糖脱色工艺及抗氧化活性分析

采用响应面法优化大孔树脂对地参多糖的脱色工艺,并分析其抗氧化性能。利用综合评分法,从5种大孔树脂中筛选出对地参多糖脱色较好的树脂,根据前期单因素试验结果,利用响应面法对多糖脱色率影响较大的NKA-9树脂脱色条件进行优化,依据回归分析确定其最佳脱色条件,同时测定地参多糖对羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O_2~-·)的清除能力。结果表明,NKA-9树脂是地参多糖脱色的适宜树脂,多糖脱色的最佳工艺条件为:NKA-9树脂用量3.3wt%、脱色温度40℃、脱色时间88min。在此条件下,多糖保留率为96.20%,预测值为96.80%;多糖脱色率为66.54%,预测值为66.71%。地参多糖对·OH和O_2~-·有明显的清除能力,且随多糖质量浓度的增加而逐渐增强;当地参多糖的质量浓度为0.420mg/mL时,对·OH和O_2~-·的清除率分别为74.56%和69.98%。通过响应面试验优化的NKA-9树脂脱色工艺可对地参多糖进行有效脱色;地参多糖具有一定的体外抗氧化能力,可作为食品及医药行业的天然抗氧化剂资源进行有效开发利用。     

铁皮石斛原球茎多糖DCPP3c-1的分离纯化及结构初步分析

铁皮石斛原球茎粗多糖(DCPP)经阴离子交换纤维素柱(DEAE-2)和凝胶柱(Sephadex G-200)依次层析,分离纯化得灰色多糖DCPP3c-1.其纯度经比旋光度法、柱层析、紫外扫描检测,组分和结构经薄层层析、高效液相色谱、红外光谱及高碘酸钠氧化等试验分析.结果显示DCPP3c-1为均一组分,相对分子质量为72.4 ku.由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成,其分子物质的量之比为1.120 4:1:1.046:23.354:3.828:1.046.分子中1→6残基占14%,1→2或1→4残基占40.7%,1→3键占45.3%.红外光谱显示其具有多糖特征吸收峰,并存在吡喃糖苷键.DCPP3c-1是首次从液体悬浮培养的原球茎中分离得到的新型酸性杂多糖组分.     

淫羊藿多糖的分子特征及免疫活性研究

用超声复合酶提取、离子交换凝胶分离、分子筛凝胶纯化得到3个淫羊藿叶多糖组分(EPs-1,EPs-2和EPs-3).3个多糖组分的分子特征通过气相色谱、高效凝胶渗透色谱进行了表征,并采用体外淋巴细胞增殖和巨噬细胞吞噬活性实验对多糖的免疫活性进行了评价.3个多糖组分EPs-1,EPs-2和EPs-3的总糖含量分别为90.36%,94.51%和89.19%.EPs-1,EPs-2和EPs-3主要由半乳糖醛酸(GalA)、半乳糖(Gal)、鼠李糖(Rha)、木糖(Xyl)、阿拉伯糖(Ara)和甘露糖(Man)组成,其平均相对分子质量分别为81.64×10~3,60.53×10~3,21.85×103;3个多糖都能够促进脾淋巴细胞增殖和激活巨噬细胞活性.这些结果说明淫羊藿多糖可以作为天然的免疫活性调节剂应用于医药和功能食品.     

新疆药桑叶多糖的分离纯化及结构研究

研究了新疆药桑叶多糖的分离纯化及初步的结构分析。采用DEAE-Cellulose-52及Sephadex G-200分离纯化药桑叶多糖,采用聚酰胺薄层层析及GC法测定药桑叶多糖的组成,凝胶过滤法测定其相对分子质量,红外光谱测定其苷键类型。粗多糖经DEAE-52分离得到6个多糖级分W1、W2、N1、N2、N3和N4,其中的4个级分W1、N1、N2和N4经Sephadex G-200纯化后,各个级分的洗脱峰均为单一对称峰。聚酰胺薄层法及GC法确定药桑叶多糖由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖及木糖等单糖组成。测得W1、N1、N2和N4的分子量分别为71 331Da,60 049Da,35 825Da和21 374Da。红外光谱中有典型的多糖吸收峰及α-型糖苷键。     

水溶性凝胶渗透色谱法测定芸芝多糖组分的分子量及其相对含量

用水溶性凝胶渗透色谱法考察了芸芝多糖在水溶性凝胶柱上的吸附影响因素,建立了最佳分离的测试条件,成功地将芸芝多糖的混合物分离为３个组分,测得各组分的分子量分别为１,１９０,０００,７９６,００和５５２,０００;各组分相对百分含量分别为８３．６％,８．９％,７．５％。     

利用Pen a 1表位抗体亲和纯化目标蛋白的研究

以虾致敏蛋白Pen a 1(Tropomyosin)抗原表位为研究对象,建立了利用Pen a 1表位抗体亲和纯化致敏蛋白的新方法。Fmoc法合成致敏Pen a 1蛋白的C端含有3个抗原表位的第247~284位氨基酸对应的多肽片段,应用马来酰亚胺法将多肽与KLH(匙孔血蓝蛋白)、BSA(牛血清白蛋白)偶联制备人工免疫抗原(Peptide-KLH)和人工包被抗原(Peptide-BSA),免疫人工抗原免疫纯种新西兰白兔,获得多克隆抗血清,抗血清经辛酸-硫酸铵及特异性血清纯化预装柱(HiTrap rProtein A FF)纯化后与溴化氰活化琼脂糖凝4B(CNBrActivated Sepharose 4B)进行偶联。ELISA(酶联免疫吸附试验)测定该多克隆抗体效价为2.05×106,多肽对抗体的IC50(50%抑制浓度)为0.21 mg/L,交叉试验表明该抗体与虾中非Pen a 1蛋白无交叉反应性;Bradford法测定CNBr-Activated Sepharose 4B与抗体的偶联率为90.76%。间接竞争ELISA测定1 mL偶联介质的吸附容量为2.84 mg Pen a 1,免疫亲和柱的加标回收率为89.6%~93.6%,亲和柱使用寿命为4次。     

虎舌红多糖的分离纯化与性质研究

采用水提醇沉法提取虎舌红多糖,经DEAE-C32柱层析分离,Sephadex G-200进一步纯化,得到AⅠ和AⅡ二种虎舌红多糖,Sephadex G-200凝胶过滤法表明,AⅠ组分为均一组分,其相对分子质量为2.76×104,借助气相色谱技术,研究了粗多糖和AⅠ组分的单糖组成.     

半枝莲多糖脱色及清除羟基自由基作用的研究

研究了半枝莲多糖的脱色的最佳条件及多糖体外清除羟基自由基的作用,结果表明,从活性炭、中性氧化铝、大孔吸附树脂AB-8、LSA-21和NKA-9等5种脱色剂中筛选出的最佳脱色剂为AB-8,AB-8脱色的最佳条件是pH7,温度40℃,溶液中多糖含量1046.5mg/L,此时多糖保留率为88.446%,脱色率为90.65%;体外清除羟基自由基作用结果表明,半枝莲粗多糖、SBP、SBP1随浓度的升高,其清除作用逐渐增强,SPB2几乎没有清除羟基自由基的能力.     

梅花鹿茸多肽的化学结构及生物活性

在马鹿茸活性多肽结构与功能研究基础上, 从新鲜梅花鹿茸中分离纯化了活性单体多肽, 确定了其化学结构, 并与马鹿茸多肽进行结构与活性比较. 利用离子交换层析、 凝胶过滤层析及反相高效液相色谱层析等生物化学技术, 从梅花鹿茸中分离得到1个新多肽, SDS-PAGE电泳显示为一条带, HPLC图谱为单一峰, MALDI-TOF MS给出该多肽的精确分子量为3263.4, 其等电点pI=8.15. 一级结构研究表明, 该多肽是由32个氨基酸残基组成的直链多肽, 不含半胱氨酸, 富含缬氨酸、 赖氨酸、 亮氨酸和甘氨酸, 氨基酸序列为VLSATDKTNVLAAWGKVGGNAPAFGAEALERM. 生物活性检测结果表明, 该多肽可促进原代培养的表皮细胞和软骨细胞增殖, 也能刺激NIH3T3成纤维细胞株的分裂. 梅花鹿茸多肽与马鹿茸多肽在结构上均为32个氨基酸残基组成的直链多肽, 但第5, 8, 11和30位氨基酸残基不同. 2种多肽结构上的变化并未影响其促细胞增殖生物活性.     

响应面法优化小球藻抗氧化肽的制备工艺研究

以小球藻藻种为原料,通过实验室培育得到藻粉,再通过碱性蛋白酶制备小球藻抗氧化肽,以DPPH自由基清除率为指标,通过单因素和响应面设计探究加酶量、pH、酶解时间和反应温度对抗氧化肽的抗氧化性的影响,通过超滤离心对多肽进行分离,测定了各组分的DPPH自由基清除率,再通过氨基酸分析仪和凝胶渗透色谱仪测定了DPPH自由基清除率最好的多肽组分的氨基酸组成和分子量,又测定了它的热稳定性和贮藏稳定性。结果表明：小球藻蛋白制备抗氧化肽的最佳条件为：pH为7,反应温度为40℃,反应时间为30 min,加酶量为4 000 U·g^-1,此时DPPH自由基的清除率是58.03%。超滤分离得到五个组分,其中分子质量为5 KD-10 KD的DPPH自由基清除率最佳,多肽中的抗氧化氨基酸含量为49.9%,它的相对分子量为474,抗氧化肽有着良好的热稳定性以及贮藏稳定性。     

绳江蓠多糖的提取及抗氧化活性研究

本文采用NaOH水溶液对海南绳江蓠进行超声浸提制备绳江蓠粗多糖(GCP),通过单因素实验和正交试验,考察得出GCP最佳提取工艺条件为NaOH溶液质量浓度1.5%,提取温度70℃,液料比1∶40,提取时间水浴4h,超声1h,提取率为20.01%,总糖含量为26.00%。对绳江蓠粗多糖进行乙醇沉降分级纯化,得到3种多糖组分GCP20、GCP40、GCP50,凝胶渗透色谱结果表明三种组分数均分子量分别为117kDa、116kDa和113kDa。电子自旋共振法测试GCP20、GCP40、GCP50对·OH的清除活性,三种组分均有很好的自由基清除能力,20mg·mL-1GCP20的羟基清除率达81.4%。紫外可见分光光度计在734nm波长下测试GCP20、GCP40、GCP50对ABTS+·的清除活性,浓度为20mg·mL-1时,三种组分对ABTS+·清除率均接近100%,表明这三种组分均有很好的抗氧化活性。     

牛膝多糖中单糖组分的毛细管电泳-电化学检测方法研究

利用毛细管电泳－电化学检测技术（CE－EC）对牛膝多糖水解液中的单糖进行了分离测定,证实牛膝多糖的化学组成中主要有葡萄糖、甘露糖和果糖3种单糖组分,并对其含量进行了测定。讨论了工作电位、分离电压、缓冲液浓度等因素对分离检测的影响。     

白术水溶性多糖的结构特征

白术(Atractylodes macrocephala Koidz)水溶性粗多糖,经乙醇分级及Sepha-dex G-75层析柱制备得到组分AMP.经Sephadex G-75、DEAE-阴离子交换纤维素层析及HPLC验证,AMP相对分子质量及极性为均一组分,HPLC测得相对分子质量为8 374.气相色谱(GC)分析表明其单糖组成为Glc,Gal,Rha和Man,物质的量比为7.36∶1.00∶3.05∶1.52.多糖AMP经部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化分析,其结构主体部分由Glc,Rha和Man组成,平均每6个残基上有1个分支,分支点为Glc的4-O处和Man的6-O处,末端残基为Glc.