产α-ALDC的枯草芽孢杆菌原生质体融合条件

通过双亲灭活原生质体融合技术对2株产α-乙酰乳酸脱羧酶的枯草芽孢杆菌3226-5和V-20进行原生质体融合.初步探讨了2菌株较适宜的融()条件.对获得的几百株融合子进行酶活比较,从中得到20株酶活比双亲高的菌株.     

应用原生质体融合方法对FeO硫杆菌改良

FeO硫杆菌（T.ferrooxidans）是生物湿法冶金工业中最有应用价值的一种脱硫菌。但其生长缓慢，影响其在高寒地区的工业应用。采用Baccilus.subtilis.、Escherichia.coli.、Aervmonas.hydrophila、Rhodotorola.glutinis.分别与T.ferrooxidans原生质体融合的方法来改变其代谢机制，缩短其生长代期。实验表明T.ferrooxidans和B.subtilis.融合细胞3＃的生长代期明显缩短，通过选育驯化过程，采用BP神经网络预测方法，确定最佳培养条件，所得改良菌株的生长代期较原菌株缩短1／3－1／2，浸矿时间比原菌少了1／3。     

棉花增产菌和苏芸金芽孢杆菌原生质体的形成融合条件的探讨

本实验对两种不同属间的细菌棉花增产菌(一种芽孢杆菌Kan~rCan~(?))和苏芸金芽孢杆菌(Kan~(?)Can~r)原生质体的形成、再生及融合进行了研究,初步确定了适应这两种出发菌株的破壁、再生及融合的最佳条件.在此条件下,其破壁率均可达到98%;融合率可达2.15×10~(-5).试验结果证明,两种不同属间的细菌细胞融合是完全可能的.     

原生质体融合技术及其在苏云金芽孢杆菌中的应用

原生质体融合技术获得的长足进展使其成为一种有效的重组技术并在苏云金芽孢杆菌上得到了广泛应用.本文从PEG诱导融合、电场诱导融合、激光诱导融合和螯合剂诱导融合等方面阐述了原生质体融合技术的进展,并从种内融合、种间融合和远缘融合三个角度列举了它在苏云金芽孢杆菌广谱多功能生态工程菌构建中的应用.     

30种植物提取物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌抑制作用研究

利用索氏抽提乙醇回流法获得30种植物的乙醇提取物,用滤纸圆片法分析各种植物提取物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌两种细菌的抑制活性.结果表明,在30种植物提取物中,有14种对大肠杆菌的生长有抑制作用,有21种植物提取物对枯草芽孢杆菌的生长有抑制作用.其中,泽漆提取物对大肠杆菌的抑制作用最强,黄花蒿次之,且提取物抑制作用随浓度的...     

灭活原生质体融合技术选育苏云金杆菌新菌种：原生质体融合？…

利用双灭活原生质体融合技术获得了苏云金杆菌新菌株。着重对原生质体制备,再生、恶劣活及融合的实验条件进行了报道。     

灭活原生质体融合技术选育苏云金杆菌新菌种——原生质体融合条件的研究

利用双灭活原生质体融合技术获得了苏云金杆菌新菌株。着重对原生质体制备、再生、灭活及融合的实验条件进行了报道。     

甜味蛋白Brazzein在Escherichia coli和Bacillus subtilis中的表达研究

通过实验对比研究了植物来源的甜味蛋白Brazzein单独及与E coli信号肽融合表达的情况,证实无信号肽序列的Brazzein编码基因实现了可溶性活性表达,它的肽链N端未融合其他氨基酸或肽链.同时,在Brazzein肽链中引入31His→Ala的突变,依照Bacillus subtilis的偏爱密码子,合成了定点突变后的Brazzein编码序列,并在B.subtilis WB600中实现了可溶性胞内表达,得到了表达量较高的活性蛋白产物.     

Modification of the rib operon derived from Bacillus subtilis and its expression in Escherichia coli

A riboflavin operon （rib operon） derived from Bacillus subtilis 368 was modified on structure and the resulting operons were expressed in various strains of Escherichia coli. The results showed that the optimization of the rib operon and the host strain used for expression are two main factors affecting the riboflavin production. Replacing the promoterl and rfn box of the rib operon with a strong constructive promoter spol drastically increased the expression of the rib genes. When E. coli JM109 was used as the host strain, the highest riboflavin production reached 95.3μg/mL （about eight times higher than that of the unmodified r/b operon）. In addition, when tetracycline （20 μg/mL） was used as the selective pressure, compared with the ampicillin resistant transformants, a higher riboflavin yield was obtained in tetracycline resistant host strain.     

克氏固氮菌与枯草芽孢杆菌的原生质体电融合

为了提高联合固氮菌的抗逆性,采用电融合技术,在小麦根际联合固氮菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌａｏｘｙｔｏｃａ）与抗逆性强的枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）之间实行了原生质体融合,并从再生的融合子中筛选到多株具有特定性状的后代菌株。经形态观察、革兰氏染色、抗生素抗性、耐热性、抗菌活性、固氮活性以及淀粉酶试验等多项指标测定,数株融合子表现出双亲的耐热、抑菌、固氮等优良性状,具有潜在的应用价值。     

大肠杆菌aroG基因在枯草杆菌中的分泌表达

为了对大肠杆菌中由ａｒｏＧ基因编码的３－脱氧－Ｄ－阿拉伯庚酮糖酸－７－磷酸合成酶（ＤＡＨＰ合成酶）进行结构与功能的深入研究,尝试了ａｒｏＧ基因在枯草杆菌中的表达。表达载体以ｐＵＢ１１０为骨架,采用了枯草杆菌热激蛋白ｇｒｏＥＳＬ基因的启动子,碱性蛋白酶ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ基因的信号肽和Ｎ－乙酰胞壁酸－Ｌ－丙氨酸酰胺酶ｃｗｌＨＢ基因的转录终止子,将ａｒｏＧ基因在枯草杆菌ＷＢ６００宿主菌中进行了分泌表达     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌WB600中的表达

将来源于枯草芽孢杆菌WB600的启动子PyxiE与碱性蛋白酶基因进行融合,将融合片段插入到大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pSUGV4中,构建了表达质粒pSUPyAp. 将该质粒转入枯草芽孢杆菌WB600中,得到转化子pSUPyAp/WB600,它在启动子PyxiE驱动下,能够在牛奶平板上产生透明的水解圈,其发酵上清液中的碱性蛋白酶活性最高为518.5 U/mL,其酶活分别是在启动子Bp53和P43驱动下的3.01倍和1.22倍.     

啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)营养缺陷型的筛选及原生质体融合

本文采用营养缺陷型的互补进行了啤酒酵母原生质体融合产物的筛选。从DNA含量分析看,融合子多为三倍体,少数为四倍体,融合子的生长速度和酒精产率都比亲株高,种内原生质体融合率为1.21×10~(-4)。     

短小芽孢杆菌质粒pCJ转化枯草杆菌的研究

本文采用我国自己分离的短小芽孢杆菌抗四环素质粒pCJ3转化枯草杆菌的各种突变体.质粒DNA经氯化铯—溴化乙锭密度梯度离心纯化后转化枯草杆菌的感受态细胞.结果表明枯草杆菌BR151,SB202,168,QB1130及QB1133都可作为质粒pCJ3的受体,转化效率在10~3左右,其中以SB202这株突变体为最高,从各种转化体中提取的质粒及经BamHI消化后的质粒的电泳图均与原质粒pCJ3及其BamHI酶切片段相同,并具有pCJ3的抗四环素转化活性.将pCJ3DNA经BamHI酶切后重新用T_4-DNA连接酶连接再转化枯草杆菌细胞,其转化效率比原质粒高1—2个数量级.研究了二价金属离子、pH及培养基成分对转化的影响,结果证明:Ca~(++)对枯草杆菌转化有促进作用,Cu~(++),Zn~(++)则有抑制作用,转化的最适pH在7.2—7.5之间;营养丰富培养能提高转化效率.     

The permeability effect of microcystin-RR on <Emphasis Type=Italic>Escherichia coli</Emphasis> and <Emphasis Type=Italic>Bacillus subtilis</Emphasis>

Microcystins are a kind of cyclic hepatoxins produced by many species of cyanobacteria. Most previous work have been done on the toxic effects of microcystins on animals and plants. However, the reports about the effect of microcystins on microbial cells are very limited. In this work, the permeability of MC-RR on the cell outer membrane of Escherichia coli (E. coli) and Bacillus subtilis (B. subtilis) was discussed. The permeability effect of MC-RR on the cell outer membrane of E. coli and B. subtilis under different concentrations was demonstrated by a rapid and sustained reduction in the A₆₇₅ values of lysozyme-treated cells. The decrease of the absorbance values showed a time- and dose-effect. The extravasations of protein and carbonhydrate increased with the increment of the treated-concentration of MC-RR. The results showed that MC-RR could increase the permeability of cell outer membranes of E. coli and B. subtilis. The synergistic effects of MC-RR and lysozyme on bacteria indicated that MC-RR might play an ecological role in bacteria in combination with other substances in some aquatic environments.     

Cloning and Characterization of Gene Promoters from Bacillus pumilus

DNA fragments obtained from Sau3AI partially digested total DNA of Bacillus pumilus UN31-C-42 are first inserted into BamHI site of pSUPV4, a promoter-probe vector. The recombinant DNA molecules are transformed into Escherichia coli cells and eight-three Kanr clones (named pSUBp1-pSUBp83) are obtained. The inserted fragments in pSUBp53, pSUBp57, pSUBp21, which showed high level of kanamycin- resistance, are sequenced and analyzed, respectively. These fragments contain some con-served sequences of prokaryotic gene promoters, such as TATAAT and TIGACA box. The promoter frag-ment Bp53 could efficiently promote the alkaline protease gene of B. pumilus expression not only in E.coli but also in B. subtilis cells.     

紫罗兰与桂竹香原生质体培养及电激细胞融合的研究

采用电激细胞融合的方法 ,对紫罗兰MatthiolaincanaR Br与桂竹香CheiranthuscheiriL 原生质体培养及电激细胞融合效率导入最适条件作了探讨。紫罗兰的子叶原生质体分裂初期培养最适条件 :培养基为 1 2MS。培养基组成中 ,蔗糖质量分数为 4%、甘露糖醇浓度为 0 6mol L。加入谷酰胺酶无机态氮源时 ,效果明显。次之 ,加入植物生长调节物质 1mg LBA也达到高分裂率。再者 ,添加玉米素时效果也甚好。根据原生质分离前的子叶在 5℃预处理分裂率最高 ,培养温度 2 4～ 30℃为宜。电激细胞融合 (singlepairs)产生效率高的条件为 :紫罗兰原生质体密度 1× 10个 mL ,高周波电强度 1MHz ,15 0V cm ,脉冲幅 70 μs;桂竹香原生质体密度 1× 10个 mL高周波电强度 1MHz,10 0V cm ,脉冲幅 30 μs。