抗鳗利斯顿氏菌鸡卵黄抗体制备及其活性研究

鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)是常见的水产动物致病菌.为获得高效抗 L. anguillarum卵黄抗体(egg yolk antibodies, IgY),用纯培养的L. anguillarum制备抗原,免疫蛋鸡,联用乙酸-乙酸钠稀释、(NH4)2SO4与 Na2SO4盐析、透析法由蛋黄分离纯化 IgY.对制备的 IgY进行了体内、外抑菌与吞噬调理活性研究:分别将抗L. anguillarum 的IgY、由普通鸡蛋IgY与L. anguillarum (103 CFU·mL-1)等体积混合后注射克氏原螯虾(Procambarus clarkia),计算成活率;分别将抗L. anguillarum的IgY、普通鸡蛋IgY与L. anguillarum (106 CFU·mL-1)及血细胞混合后,接种平板培养、计数.结果表明,提取的IgY浓度为8.93 mg·mL-1,每个鸡蛋可获得IgY约120 mg,抗体纯度较高,效价为1:20480;体外抑菌率为65%;能促进细胞吞噬L. anguillarum,相对吞噬率为75%;对克氏原螯虾的保护率为33.3%.     

弗氏柠檬酸杆菌与迟钝爱德华氏菌拮抗菌的筛选与鉴定

鉴于弗氏柠檬酸杆菌和迟钝爱德华氏菌是人-兽-鱼共患性条件致病菌,因此利用微生物拮抗原理研发微生态制剂进行细菌病害的防治对环境具有友好性.分别以从患病中华鳖分离的弗氏柠檬酸杆菌和迟钝爱德华氏菌作为指示菌,初步筛选获得对这2种菌具有拮抗作用的菌株6-1-1M和7-1-1M.用点种法和纸片法进一步验证了其拮抗活性,测定了2株菌930 bp的16S r DNA基因片段序列,发现二者序列完全一致,系统进化分析表明其属于希瓦氏菌属(Shewanella sp.).安全性验证实验结果表明其无致病性,具有开发应用前景.     

抗轮状病毒卵黄免疫球蛋白的制备及其活性

采用婴幼儿轮状病毒抗原免疫产卵母鸡，然后用ＰＥＧ两步沉淀分离鸡卵黄中抗轮状病毒免疫球蛋白，经离子交换层析及凝胶层析纯化抗－ＨＲＶＩｇＹ。此ＩｇＹ经免疫扩散，免疫电镜、ＥＬＩＳＡ检测均证实其具有特异抗ＨＲＶ活性。     

EGCG棕榈酸酯的制备、结构及其抗氧化活性

通过表没食子儿茶素—3—O—没食子酸酯(EGCG)与棕榈酰氯的酯化制备脂溶性的EGCG棕榈酸酯，利用高速逆流色谱对其进行分离和纯化，获得一种新的单取代的长碳链酰基儿茶素—表没食子儿茶素—3—O—没食子酸—4′—棕榈酸酯，并对其分子结构进行了元素分析、IR、MS和^1H—NMR等表征，用活性氧法(AOM)考察并比较了脂溶性的表没食子儿茶素—3—O—没食子酸—4′—棕榈酸酯和特丁基—4—羟基茴香醚(BHA)、2，6—二特丁基对甲酚(BHT)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)在大豆色拉油中的抗氧化活性。结果表明，单取代的EGCG棕榈酸酯的抗氧活性与TBHQ相当，而比BHA、BHT有更强的活性。     

环加氧酶2基因的原核表达、抗体制备及其在肝癌中的表达

用PCR技术扩增环加氧酶2（COX-2）基因的C末端777bp的片段，插入到pET-28b（＋）中，构建原核表达载体．转入大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导产生包涵体形式his-COX-2融合蛋白．用镍离子螫合柱（Ni—NTA）纯化融合蛋白，获得纯度较高的原核表达蛋白．纯化后的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体，用ELISA及Western blotting分别检测抗体．用此抗体Western blotting检测肝癌组织中的环加氧酶2的表达．ELISA及Western blotting结果显示免疫家兔所得的环加氧酶2抗体具有很高的效价，并能够特异性的识别真核细胞中的环加氧酶2．用此抗体检测肝癌组织中的环加氧酶2的表达．证实肝癌组织中伴随有环加氧酶2的大量表达．同时所得的环加氧酶2抗体具有很高的效价和特异性，为进一步研究环加氧酶2的功能提供了条件。     

棉铃虫乙醇脱氢酶5的原核表达和活性分析及其抗血清的制备

本课题组前期基于酵母单杂交技术筛选出响应2-十三烷酮诱导CYP6B6过表达的6个调控因子,乙醇脱氢酶5(HaADH5)是其中之一,乙醇脱氢酶是一种代谢乙醇的重要酶类,在哺乳动物中的研究很多,但在昆虫中的研究很少.为了进一步探究HaADH5是否参与P450 CYP6B6的过表达,进而参与棉铃虫对包括杀虫剂在内的外界有毒物...