RT-PCR技术在凡纳滨对虾健康苗种培育中的应用

应用PCR和RT-PCR技术对WSSV、IHHNV和TSV这3种对虾病毒在凡纳滨对虾育苗过程中各个环节进行了检测,防止亲虾、卵、无节幼体、仔虾、亲虾饵料、丰年虫、水体等诸环节受到以上3种病毒携带或感染,保证培育出的凡纳滨对虾仔虾是高健康的虾苗,为凡纳滨对虾健康养殖的可持续发展提供一条可行的途径．     

海链藻定向培养对凡纳滨对虾生长、存活及养殖水质的影响

旨在探究定向培藻在凡纳滨对虾养殖中应用效果. 选取体长0.545cm的凡纳滨对虾84万尾, 随机分为2组(每组3个重复, 每个室内水泥池(30m2)14万尾), 对照组水体不添加藻, 试验组水体中添加海链藻(藻浓度维持2×104~5×104 cell?mL-1), 试验周期25d. 结果表明: 定向培藻对凡纳滨对虾生长、存活及养殖水质影响显著(P＜0.05), 其中, 对虾体长、体质量成活率和饵料系数均为海链藻组显著大于对照组(P＜0.05); 养殖水体的pH日差值和、NO3--N、NH4+-N、PO43--P和养殖水体中弧菌数量均为海链藻组显著小于对照组(P＜0.05). 由此可见, 在凡纳滨对虾养殖过程中, 养殖池中添加定向培海链藻有利于维持养殖池水体的水质稳定, 减少水体的氮磷含量和抑制弧菌的生长, 同时也有利于凡纳滨对虾的健康生长.     

凡纳滨对虾基因组fosmid文库的构建及钙离子通道基因的筛选

本研究构建了凡纳滨对虾的基因组fosmid文库,该文库包含大约1.1×105个克隆,插入片段平均长度大于35 kb.根据和果蝇钙离子通道基因同源的凡纳滨对虾EST序列设计引物,对文库进行了PCR筛选,得到1个阳性克隆,测序结果显示该克隆包含有钙离子通道基因.研究结果为凡纳滨对虾的基因克隆和分子选育等研究奠定了基础.     

低盐度条件下生物絮团的营养组分及凡纳滨对虾和银鲫 对其摄食效率的研究

通过用稳定同位素15N标记生物絮团菌体蛋白, 研究了低盐度1.08±0.07)‰海水混养模式下生物絮团的营养成分对虾、鲫对生物絮团的摄食. 结果表明: 生物絮团能够将水体氨氮和亚硝氮固定为自身的有机氮; 生物絮团含有养殖生物生长所需要的基本营养物质 而鲫和对虾可以固定生物絮团中的有机氮为自身蛋白, 即单位体重银鲫和凡纳滨对虾固定氮量分别为104.92±30.91)mg·kg-1和135.6±24.17)mg·kg-1, 相当于单位体重银鲫和凡纳滨对虾每天摄食的生物絮团为1907.36mg·kg-1和2465.1mg·kg-1, 且鱼虾混养能够促进对虾对生物絮团的摄食; 同时鲫对虾的生物排氮作用和生物絮团的固氮作用能够促进养殖池塘的氮循环; 实验组含量显著降低保持在0.03± 0.01)mg·L-1和0.325±0.035) mg·L-1.     

凡纳滨对虾亲环素A基因的克隆及表达分析

通过电子克隆所得基因序列设计引物,采用RT-PCR方法首次克隆得到长度为885 bp的凡纳滨对虾亲环素A（Cyclophilins A）CYPA基因cDNA序列,其开放阅读框为35~529 bp,可编码164个氨基酸.推算其分子量约为17.6×103,理论等电点为8.55.与其他物种的CYPA基因比对发现,该基因的氨基酸序列具有较高的保守性.基于氨基酸序列的聚类分析表明,凡纳滨对虾与斑节对虾的亲缘关系最近.荧光定量PCR的结果显示该基因在组织中广谱表达,在抗病组中,胃中的表达量最高,心脏中的表达量最低,差异约为2倍.而在感病组中,该基因在心脏中的表达量最高,肌肉中的表达量最低.利用ProtFun在线预测蛋白质的功能分类,表明CYPA基因可能是一免疫应答抑制因子,参与凡纳滨对虾免疫防御反应.     

输入碳氮比对凡纳滨对虾生长和养殖水体水质的影响

调节碳氮比改善水质和促进对虾生长已有一些报道, 但不同实验室得出的结论经常相互矛盾. 本研究通过建立规范一致的对虾养殖实验体系, 设置对照组(CN6组, 碳氮比为6)和处理组(CN10组和CN20组, 碳氮比分别为10和20), 每组设置8个重复, 研究输入碳氮比对凡纳滨对虾生长和养殖水体水质的影响. 结果表明, 适当提高输入碳氮比可促进对虾生长和存活. 与对照组相比, CN10组的末均重、虾长、特定生长率、存活率和产量分别提高了18.04%、7.45%、13.11%、46.73%和73.03%, 而饲料转化率降低了43.41%. 此外, CN10组的水体理化指标如pH、溶解氧、氨氮、亚硝氮、磷酸盐、总磷的浓度也极显著低于CN6组. 相关性分析表明影响对虾生长的主要环境因子是亚硝氮、磷酸盐、总磷和pH. 然而, 实验第25d, CN20组对虾大量死亡, 产量和存活率都很低, CN20和CN10组的对虾体重和体长均高于CN6组, 说明过高的输入碳氮比可以促进对虾生长但不利于对虾存活. 本研究说明重复数对于实验结论的可靠性有较大影响.     

凡纳滨对虾组织蛋白酶L基因的单核苷酸多态性分析

采用PCR产物直接测序法,对凡纳滨对虾40份DNA样本的组织蛋白酶L基因进行单核苷酸多态性(SNP)检测.经过对测序结果统计分析,共发现SNP 20个,分别是:A150C,T226G,G240A,C429T,T453C,G537A,C597T,C645T,G798C,C831T,C955T,C963T,C977T,C982T,G1001C,A1005T,C1117T,C1132T,G1367A,T1391C.其中6个SNP是外显子中的错义突变,3个SNP是外显子中的同义突变,11个SNP是内含子中的突变.本检测为进一步进行凡纳滨对虾生长性状关联研究提供了有用信息.     

呋喃唑酮在凡纳滨对虾组织中代谢动力学研究

运用液相色谱-串联质谱法研究了呋喃唑酮药饵多次给药后在凡纳滨对虾体内的药物代谢动力学.研究结果表明：呋喃唑酮代谢物在血淋巴、肝胰脏、肌肉组织中的代谢过程均符合二室模型,其动力学方程分别为C血液=414.107×e^-0.092t＋124.451×e^-0.005t,C肝胰腺=1625.563×e^-0.019t＋125.700,C肌肉=120.434×e^-0.019t＋71.579×e^-0.001t.凡纳滨对虾血淋巴和肝胰腺中呋喃唑酮代谢物浓度在4h达到高峰,肌肉中药物浓度在2h达到最大值;最高峰时血淋巴、肝胰腺和肌肉中药物浓度平均为570.6μg·L^-1、1948.6μg·kg-1和210.0μg·kg-1.在血淋巴、肝胰腺和肌肉组织中呋喃唑酮代谢物浓度的吸收半衰期（t1/2α）分别为7.497h、36.206h和36.484h,消除半衰期（t1/2β）分别为132.525 h、1 000 479.217 h和505.637 h,总表观分布容积（V1/F）分别为55.775 L·kg^-1、17.16 L·kg^-1和161.574L·kg^-1.说明给药后呋喃唑酮代谢物在凡纳滨对虾体内消除缓慢,残留严重,尤其以肝胰脏残留最为明显.     

白缘缺微卫星分子标记的筛选

用磁珠-生物素标记的微卫星探针（ACA）15与白缘缺（Leiobagrus marginatus）基因组酶切片段杂交，捕获含有微卫星序列的DNA片段，连接到T载体中，构建富集微卫星序列的小片段插入文库，再用γ^-32P标记的探针进行二次筛选，获得阳性克隆785个，对其中的140个克隆进行了测序，获得完整的微卫星序列132个．用引物设计软件Primer Premier5．0设计引物64对．对其中的20对引物进行了多态性检测，筛选到稳定扩增的标记13对，用此13对微卫星引物分析了缺属白缘缺（L．marginalus）、拟缘缺（L．marginatoides）（大、小各1种）、黑尾缺（L．nigricauda）共4个群体的遗传多样性，其中10对微卫星引物在种内或种间表现出多态性．     

稻米品质性状基因的SSR标记定位

随机选取台中本地1号（TN1）与有野生稻亲源的B14构建的重组自交系（RILs)中的180个株系，运用SSR标记技术，对控制糙米粒长，长宽比，直链淀粉含量的基础进行了分子标记定位，结果表明控制直链淀粉含量的基因位于第6染色体短臂微卫星标记RM225和RM276之间，离RM225和RM276的遗传距离分别为5．0cM和8．4cM；第3染色体微卫星标记RM186附近也有一控制该性状的微效基因位点。控制粒长，长宽比的数量性状基因位点（QTL）定位于第2染色体RM240、RM6和RM233、RM211附近。     

花鲈工厂化育苗技术的研究

研究提高花鲈工厂化育苗成活率的技术，结果表明：（１）采用自选单胞藻营养强化轮虫和卤虫成体，按卤虫总量２．５．３．０％浓鱼油胶丸营养强化卤虫无节幼体，投喂花鲈仔稚幼鱼，能满足仔稚幼鱼生长发育的营养需求：（２）泼洒１ｐｐｍ呋喃西林或氯霉素能有效地治疗和预防仔稚幼鱼细菌性疾病的发生；（３）稚鱼阶段的适宜放养密度为１５００尾／ｍ３左右；（４）花鲈仔鱼经９０天培育，平均全长可达３８．５５ｍｍ，育成率达到５８．２１％，单位水体出苗量达到１５９９尾／ｍ３。     

南方地区地中海鳎鱼的引养

以平均体重30～50g的地中海鳎鱼为研究对象,进行了长途运输、生物习性及饲养技术的试验,探讨了南方地区引养地中海鳎鱼的可行性及选址、运输、养成等相关技术环节.结果表明：地中海鳎鱼性情温和、喜食动物性饵料,但经人工驯化也能摄食鱼虾颗粒饲料、适宜生活水温为10～30℃、适合水泥池专养和对虾塘混养;专池饲养月均尾增重50.2 g,平均存活率84.61%.虾塘混养显示出明显的预防虾病效果.     

小菜蛾颗粒体病毒DNA限制性酶切分析及基因组DNA片段克隆

小菜蛾颗粒体病毒ＤＮＡ用ＢａｍＨＩ和ＸｈｏＩ酶切，经０．７５％琼脂糖凝胶电泳，分别得到１２条带和８条带，平均分子量为１１３．０ｋｂ．用Ｓｕｐｅｒｃｏｓ１Ｃｏｓｍｉｄ作载体，将Ｓａｕ３ＡＩ部分消化的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ随机片段插入该载体的ＢａｍＨＩ酶切位点，转化于ＸＬ１－Ｂｌｕｅ受体菌，经Ａｍｐ平板筛选转化子，挑出２５６个Ａｍｐ＋菌落，以３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ为探针，斑点杂交筛选得到５９个阳性重组体，再经电泳检测，得到了５９个不同大小的ＰｘＧＶ－ＤＮＡ片段克隆．     

普通鲫鱼的RAPD标记及其遗传多样性

采用了387个引物对普通鲫鱼进行了RAPD(random amplified polymorphic DNA)分析,筛选出了31个重复性好、可用于普通鲫鱼RAPD标记的引物．另用8个引物对普通鲫鱼(20尾)进行了遗传多样性分析：这8个引物共检出45个位点,其中多态性位点数24个,占总位点数的53．33％;据个体间共有带数和Nei′s遗传相似率计算公式,计算出普通鲫鱼平均遗传相似率为88．68％．上述两项指标的初步分析表明,普通鲫鱼具有较为丰富的遗传多样性．     

氨态氮、亚硝态氮对罗氏沼虾免疫相关酶类的影响

氨态氮和亚硝态氮是虾类养殖环境中最主要的污染物.在1 mg/L非离子氨态氮和1 mg/L亚硝态氮的作用条件下,罗氏沼虾血清、肝胰腺和肌肉中的酚氧化酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶及酸性磷酸酶活力变化不同,经1、4、7及10天处理后,血清和肌肉酚氧化酶活力均有所降低,而肝胰腺的酚氧化酶活力则略有增高;各组织中的超氧化物歧化酶活力基本变化过程为,先增高后降低;各组织的两种磷酸酶活力则有不同程度的增高.酚氧化酶与超氧化物歧化酶活性可作为判断虾类免疫抗病能力的指标,而两种磷酸酶活性则仅可作辅助参数.     

EDXRF探针技术在古陶瓷工艺研究中的应用

利用能量色散X射线荧光(EDXRF)探针技术,对取自湖北巴东旧县坪遗址的一件胎釉间带有一层白色物质的白瓷样品进行线扫描分析.结果表明,该白色层状物的化学组成与胎釉均有显著差异,且其化学组成与中国北方所产的以高岭石为主要矿物组成的黏土相符.因此,推断旧县坪遗址出土的这种白瓷胎釉间的白色层状物,是以高岭石为主要矿物组成的黏土制作的化妆土,而非在烧制过程中产生的反应层.     

湖北大麦品种资源的RAPD分析

在对105份湖北栽培大麦酯酶同工酶研究的基础上,采用RAPD技术对分属于8种酶谱类型的10份湖北栽培大麦品种进行了研究.63个随机引物中有12个引物产生稳定多态性的带,共扩增出73条带,其中46条表现出多态性.将每一条带视为一个独立的性状,按其有无列出二元数据矩阵,计算Nei氏相似性系数(S)和遗传距离(D),列出遗传距离矩阵,采用PHYLIP3.5c软件包进行聚类.讨论了RAPD的稳定性以及RAPD标记与同工酶标记的异同.