磁性壳聚糖微球用于酶的固定化研究：Ⅲ磁性壳聚糖微球的活化及其对脲酶的固化研究

以环氧氯丙烷活化的磁性壳聚糖微球作为载体、对脲酶进行固定化研究,结果表明,在25℃时,活化磁性壳聚糖微球对脲酶的固定化在2h时就达到了最大值,固定化酶和自由酶的最适温度都在65℃左右,自由酶和固定化酶的米氏常数Km值分别为0．042mol/L和0．008mol/L,固定化酶的Km降低了5倍。     

甲醛活化壳聚糖制备固定化l—天冬酰胺酶

研究了以甲醛活化的壳聚糖为载体固定化ｌ－天冬酰胺酶，其活力回收可达到１１３％，比用以戊二醛为交联剂进行固定化的活力回收要高出五倍多。分别从缓冲液的ｐＨ值及甲醛用量等方面进行了固定化ｌ－天冬酰胺酶的条件优化，并且对固定化酶的性质作了探讨。     

壳聚糖固定化碱性脂肪酶的研究

以蟹壳为原料提取壳聚糖,用戊二醛作交联剂,将碱性脂肪酶固定于壳聚糖上。同时探讨了一定量干壳聚糖载体与交联剂浓度、给酶量等关系的最适固定化酶条件,并对固定化酶的热稳定性、操作稳定性、米氏常数、最适温度、离子强度的影响以及使用半衰期等理化性质进行探讨。     

壳聚糖固定化醇脱氢酶的制备及其酶学性质研究

报道了醇脱氢酶(ADH)的固定化和酶学性质研究。以壳聚糖作为载体,戊二醛作为交联剂。固定化ADH的最适条件为:以6%戊二醛将壳聚糖交联2 h,与ADH反应2.5 h。对游离和固定化ADH酶学性质的研究表明:酶促反应的最适pH均为8.2,最适温度分别为37℃和40℃,对乙醇的表观米氏常数Km分别为33.9 mmol/L和46.2 mmol/L。与游离酶相比,固定化酶具有良好的操作稳定性。     

固定化人工膜动态固载胰蛋白酶的条件优化

以固定化人工膜为载体研究胰蛋白酶的动态固定化,考察缓冲液种类(硼酸盐、磷酸盐和Tris-HCl)、浓度、pH对胰蛋白酶固载率和酶活性的影响.结果显示,pH=8.0的10mmol/L Tris-HCl缓冲液是胰蛋白酶的优化固载条件.在此条件下,初步研究了动态固定化胰蛋白酶酶解器,发现其具有较高酶活性,且胰蛋白酶抑制剂能对其活性进行特异性抑制.     

壳聚糖微球固定化L-天门冬酰胺酶研究

以反相悬浮交联法合成了壳聚糖微球,并将其应用于固定化L-天门冬酰胺酶。探讨了不同合成条件对成球情况的影响,研究了固定化酶的性质。结果表明,壳聚糖载体可以较好地吸附L-天门冬酰胺酶。固定化酶的活力回收率较高,且稳定性得到提高。     

壳聚糖固定化血管紧张素转化酶及其性质

以壳聚糖微球为载体, 戊二醛为交联剂固定化血管紧张素转化酶, 研究了酶固定化的最优条件和固定化酶的性质. 结果表明, 在戊二醛质量分数为2.5%、给酶量为8 mg/mL时, 固定化酶的比活性最大, 为0.085 U/g. 固定化酶在40~50 ℃, pH在7~9之间有最大活性, 其米氏常数Km为2.39 mmol/L. 同时, 固定化酶具有良好的稳定性, 可重复利用.     

壳聚糖固定化总状毛霉MR137-3蛋白酶的性质

以壳聚糖为载体,戊二醛作交联剂,将总状毛霉MR137—3蛋白酶固定在壳聚糖上。研究了戊二醛浓度,给酶量,处理时间对MR137—3蛋白酶固定化的影响。同时对固定化酶与游离酶的热稳定性、最适pH、最适温度以及脲、有机溶剂、金属离子的影响等理化性质进行了探讨。     

壳聚糖固定化乳酸脱氢酶的制备及酶学性质研究

以磁性壳聚糖作为载体,戊二醛作为交联剂,对乳酸脱氢酶(LDH)进行固定化.固定化的最适条件为:戊二醛浓度6%,pH值7.5,酶的偶联时间2 h.对游离及固定化LDH酶学性质的研究表明,酶促反应的最适pH值为9.2,最适温度分别为37℃和50℃,对乳酸的表观米氏常数分别为1.6 mmol/L和0.9 mmol/L.游离酶和固定化酶在40℃放置150 min后,其活力分别为最初的56.5%和76.1%.固定化酶在4℃贮存4周后,活力仍保留50%以上.固定化酶在室温下与底物重复反应6次后,活力仍保留60%以上,说明固定化酶具有较好的热稳定性、贮存稳定性和复用性.     

壳聚糖钯配位络合物的合成、表征及其催化性能研究

用不同方法制备了壳聚糖钯配住络合物，并用FFIR，XPS，XRD和DTA-TG对其进行了表征，结果表明壳聚糖与钯发生配住作用形成了壳聚糖钯配位络合物，研究了该络合物对碘代笨与丙烯酸进行交叉偶联烷基化反应的催化性能，结果表明其具有良好的催化活性。     

固定化木瓜蛋白酶的制备和性质研究

多孔硅球固定化木瓜蛋白酶具有热增活性 .本文在前文研究的基础上 ,用载体交联法制备了甲壳胺固定化木瓜蛋白酶和纤维素固定化木瓜蛋白酶 .考察了固定化pH值、戊二醛浓度和给酶量对固定化木瓜蛋白酶活力的影响 .研究了固定化木瓜蛋白酶的性质 ,特别是热稳定性和耐热性 ,并与溶液酶和多孔硅球固定化木瓜蛋白酶进行了比较 .所制得的甲壳胺固定化木瓜蛋白酶和纤维素固定化木瓜蛋白酶的最适反应温度均达到了 80℃ ;90℃温育 1h后固定化酶的活力保持在 95 %以上 ;70℃温育处理 5h和 6h后固定化酶的活力也仍能保持在 90 %以上 .固定化木瓜蛋白酶的热稳定性和耐热性得到了显著提高     

固定化谷氨酸脱羧酶性能的研究

本文首镒用羧甲基化的以Ｎ,Ｎ’－甲叉双丙烯酰胺交联的烯丙基葡聚糖凝胶生化树脂为新型载体,将谷氨酸脱羧酶固定在ＣＭ－ＣＡＤＢ树脂上。研究了固定化ＧＤＣ的活性与低物浓度,ｐＨ,温度的依存性;动态响应特性;热稳定性和寿命;求算了米氏常数和反应活化能;将固定化ＧＤＣ酶柱与进样系统－离子活度分析器－计算机数据采集系统匹配,构成酶传感器谷氨酸检测装置,测定了固定化ＧＤＣ酶柱的能斯特线性响应曲线,线性方程为ｙ／     

STUDIES ON NATURAL AND MODIFIED PEPTIDE Trichosanthes TRYPSIN INHIBITORS

A peptide trypsin inhibitor was isolated and purified from the roots of Trichosanthes kirilowii (a Chinese medical herb) by using immobilized anhydro-trypsin affinity chromatography and HPLC C_(18) column reverse chromatography. It contains two major components, both consisting of 27 amino acid residues with three pairs of disulfide bonds. The sequence determination indicated that the difference between them is only in the ninth position, being Gln and Lys, respectively. The peptide bond of the inhibitor reactive site Arg-Ile (3--4) is easy to cleave at low pH by trypsin, resulting in a modified inhibitor. It might be the smallest naturally occurring protein inhibitor so far known. The modification reaction of the Trichosanthes inhibitor with trypsin is similar to the catalytic enzyme-substrate reaction. The dissociation constant of the modified inhibitor with trypsin is around fourfold that of the natural inhibitor.     

高分子复合物固定化纤维素酶的研究

<正> 固定化酶是将水溶性的酶用物理或化学方法处理,使之变成不溶于水的仍具有酶活性的酶衍生物。在催化反应中,它以固相状态作用于底物。固定化酶不但仍然具有酶的高度专一性及温和条件下高效率催化的特点,还可反复使用。这样,酶经固定后,稳定性有较大增加,可贮藏较长时间。 用高分子复合物固定生物酶是固定化酶的一个新的尝试。两种不同的高分子链通过氢键力、库伦力、范德华力、疏水键力等所谓次价键而聚集成高分子复合物。高分子复合物具有一些特殊功能,如优良的质量传递性能、对水、电解质的灵敏介电特性,对氧和水     

壳聚糖固定L-天门冬酰胺酶的研究

研究了以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，固定化Ｌ－天门冬酰胺酶的最适条件，并对固定化天门冬酰胺酶的理化性质进行了初步探讨。分别从不同固定化程序、缓冲液及保护剂等方面进行了固定化天门冬酰胺酶的条件优化；固定化酶的活力回收可达２０％左右。固定化酶的最适范围变宽，由游离酶的最适ｐＨ＝４～６变为ｐＨ＝６～１０。连续使用６次后仍可基本维持固定化酶的活力。固定化酶对胃蛋白酶的水解性也较游离酶大大提高。     

Disparities between immobilized enzyme and solution based digestion of transferrin with trypsin

Trypsin digestion is a major component of preparing proteins for peptide based identification and quantification by mass spectral (MS) analysis. Surprisingly proteolysis is the slowest part of the proteomics process by an order of magnitude. Numerous recent efforts to reduce protein digestion to a few minutes have centered on the use of an immobilized enzyme reactor (IMER) to minimize both trypsin autolysis and vastly increase the trypsin to protein ratio. A central question in this approach is whether proteolysis with an IMER produces the same peptide cleavage products as derived from solution based digestion. The studies reported here examined this question with transferrin; a model protein of known resistance to trypsin digestion. Results from these studies confirmed that a trypsin‐IMER can in fact digest transferrin in a few minutes; providing tryptic peptides that subsequent to MS analysis allow sequence identification equivalent to solution digestion. Although many of the peptides obtained from these two trypsin digestion systems were identical, many were not. The greatest difference was that the trypsin‐ IMER produces (i) numerous peptides bearing multiple lysine and/or arginine residues and (ii) identical portions of the protein sequence were found in multiple peptides. Most of these peptides were derived from five regions in transferrin. These results were interpreted to mean that proteolysis in the case of transferrin occurred faster than the rate at which buried lysine and arginine residues were unmasked in the five regions providing peptides that were only partially digested.