铜绿假单胞菌随机扩增DNA多态性基因分型研究

利用微量液体稀释法进行药敏检测和RAPD技术进行基因分型,调查了铜绿假单胞菌在临床各科中的流行情况,以期建立稳定的临床检测系统,在控制院内感染的流行病研究中发挥更大的作用.结果表明耐药谱分6型,Ⅰ型占44.5%,Ⅱ型占18.5%,Ⅲ型占7.4%,Ⅳ型占7.4%,Ⅴ型占11.1%,Ⅵ型(不定型)占11.1%;RAPD分9型,A型占51.9%,B型占7.4%,C型占7.4%,D型占7.4%,E型占7.4%,F型占3.7%,G型占3.7%,H型占7.4%,I型占3.7%.说明基因型A型、耐药谱Ⅰ型的铜绿假单胞菌是此次ICU医院感染暴发流行的菌株,其他型别为非流行相关菌株.比较结果还说明RAPD基因分型的灵敏性、特异性及可靠性优于耐药谱分型,在医院感染流行病学调查中具有较大的应用价值.     

铜绿假单胞菌引起的医院感染分析

铜绿假单胞菌，在自然界中广泛存在，作者对１９９９年１月－１２月住进柱院的患者的痰、尿、分泌物中分离出的铜绿单胞菌进行了分析。指出该菌是引起在医院感染的主要细菌，应此起有关方面，特辊是医院和医务人员注意。     

铜绿假单胞菌耐药性探讨

目的探讨临床铜绿假单胞菌耐药情况.方法对160株临床分离的铜绿假单胞菌进行15种药物敏感试验,用MH平板采用WHO推荐的K-B法.结果氨苄西林、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸耐药率在95%以上;头孢三嗪、头孢噻肟、替卡西林/克拉维酸、庆大霉素、哌拉西林、氧氟沙星等耐药率在40%～60%;哌拉西林/三唑巴坦、氨曲南、环丙沙星等耐药率在30%左右,阿米卡星、亚胺培南、头孢他啶等耐药率在20%以下.结论铜绿假单胞菌对氨苄西林、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸完全耐药,对碳氢酶烯类药物亚胺培南(11.9%)、头孢他啶(13.8%)耐药率最低;氨基甙类中的阿米卡星(20.1%)和环丙沙星(30%)耐药率相对较低.临床上宜选择耐药率＜20的药物;对耐药率在40%～60%的药物慎用;耐药率＞70%的药物最好不用.     

铜绿假单胞菌耐药性探讨

目的探讨临床铜绿假单胞菌耐药情况.方法对160株临床分离的铜绿假单胞菌进行15种药物敏感试验,用MH平板采用WHO推荐的K-B法.结果氨苄西林、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸耐药率在95%以上;头孢三嗪、头孢噻肟、替卡西林/克拉维酸、庆大霉素、哌拉西林、氧氟沙星等耐药率在40%～60%;哌拉西林/三唑巴坦、氨曲南、环丙沙星等耐药率在30%左右,阿米卡星、亚胺培南、头孢他啶等耐药率在20%以下.结论铜绿假单胞菌对氨苄西林、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸完全耐药,对碳氢酶烯类药物亚胺培南(11.9%)、头孢他啶(13.8%)耐药率最低;氨基甙类中的阿米卡星(20.1%)和环丙沙星(30%)耐药率相对较低.临床上宜选择耐药率＜20的药物;对耐药率在40%～60%的药物慎用;耐药率＞70%的药物最好不用.     

应用RAPD技术研究金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌DNA的多态性

本试验利用RAPD技术对临床上重要的致病菌金黄色葡萄球菌28株和铜绿假单胞菌2l株，用10bp引物进行扩增，结果铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的DNA带谱均出现了多态性；根据带谱的不同可将铜绿假单胞菌分成8个型，金葡菌分成3个型；根据铜绿假单胞菌的带型计算各菌间的相似系数，依此系数绘制了系统树，从系统树中清晰可见各菌间的亲缘关系。     

铜绿假单胞菌耐药机理

铜绿假单胞菌是耐药性十分突出的一类院内感染条件致病革兰氏阴性细菌．本文从生物被膜、细胞密度依赖式毒力因子、外排系统、基因盒一整合子系统及铜绿假单胞菌噬菌体几方面对其耐药性机理进行了概述，并提出了未来对微生物耐药性研究和应用的一些策略。     

铜绿假单胞菌下呼吸道感染的临床分析

目的 :分析和总结铜绿假单胞菌下呼吸道感染的临床特点及抗生素敏感性的分布情况。方法 :对 2 8例铜绿假单胞菌下呼吸道感染的临床资料进行综合分析 ,采用纸片法 (Kirby- Bauer)测定该菌的体外药物敏感性。结果 :2 8例患者均有基础肺部疾病 ,其中以慢性支气管炎最常见。临床上表现为发热、咳嗽、咳痰 ,脑部 X线表现为双肺淡薄、斑片状阻影。药敏试验表明 ,铜绿假单胞菌对头孢他啶、头孢哌酮耐药率增加。结论 :铜绿假单胞菌下呼吸道感染多发生在患有各种基础疾病 ,尤其是肺部疾病患者 ,临床表现无特异性 ,耐药率有增加趋势。     

铜绿假单胞菌多重耐药性分子机制的研究

铜绿假单胞菌是重要的医院感染条件致病菌.由于各种抗生素的广泛使用,细菌耐药问题日趋严重,导致了铜绿假单胞菌产生了很强的耐药性而且多重耐药,铜绿假单胞菌通过多种途径产生耐药.而从分子水平对其耐药性机制进行研究具有重要意义.     

铜绿假单胞菌的感染性分布和耐药性分析

了解兰州市中医医院患者铜绿假单胞菌(PAE)的感染分布和耐药性,为院内感染控制和临床治疗提供依据。回顾性分析2014年2月~2014年12月兰州市中医医院各种感染标本中分离出的568例铜绿假单胞菌的科室分布及耐药性。568例铜绿假单胞菌标本主要来自痰液(54.5%),其次为脓液(27.1%)和创面分泌物(6.7%);分离较多的科室分别是普外科,骨伤科,重症监护室(ICU),妇产科,呼吸科,分别占21.7%,11.4%,10.5%,9.9%,7.7%。氨曲南耐药率较高,达8.75%,亚胺培南6.21%。铜绿假单胞菌是院内感染的主要菌种之一,建议合理使用抗生素,控制院内感染。     

北京地区2008～2011年实验动物绿脓杆菌检测结果与分析

目的了解SPF级实验动物中绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）感染现状和规律,为防止绿脓杆菌感染提供依据。方法参照国家标准,对SPF级小鼠、大鼠、豚鼠和兔进行检测。结果在2008～2011年中检测的SPF级动物中,PA感染的阳性率为8.9%（267/2988）;不同动物感染率无显著差异;不同时间（不同年份和不同季度）PA阳性检出率无显著差异;其中,免疫缺陷动物的PA阳性检出率为32.5%明显高于免疫功能正常动物的7.6%;PA检出率随着送检单位和动物数量的增加逐年升高;不同动物群体间感染率相当,且保持稳定。结论北京地区SPF级实验动物中PA检出率较高,应加强管理。     

铜绿假单胞菌的LexA蛋白在大肠杆菌中的高效表达与纯化

目的:对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的阻遏蛋白LexA进行基因克隆、重组表达及蛋白纯化.方法:采用PCR法从PAO1株基因组中扩增出1 086 bp的LexA基因,将此基因片段插入到表达载体pET32a( )上,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.包涵体洗涤后用8 mol/L尿素溶解,以镍离子亲合柱层析作为第1步纯化,Superdex75凝胶过滤层析作为第2步精细纯化,反相高相液相色谱法(HPLC)测定蛋白的浓度.结果:LexA以包涵体形式表达,表达量为45%,经镍离子亲合柱层析纯化后LexA蛋白纯度达到85%以上,回收率大于80%,镍离子亲合柱层析和凝胶过滤层析两步纯化目的蛋白,经HPLC测定,最终目的蛋白的纯度为98.97%.结论:在pET32a( )表达系统中实现了PA的LexA蛋白的高效表达,两步纯化法获得高纯度的目的蛋白,为进一步鉴定LexA靶位点奠定了基础.     

铜绿假单胞菌中RND外排泵功能的研究

目的铜绿假单胞菌的耐药性与细胞膜的低通透性和膜上存在的RND外排泵有关,而且RND外排泵起主导作用。方法利用发光杆菌的荧光素酶基因操纵子luxCDABE为报道子,对铜绿假单胞菌基因组中所有的12种已知和可能的RND外排泵基因进行了系统的研究。结果低于抑制浓度庆大霉素对PAOC和PAOI有明显的调节作用。低于抑制浓度四环素对PAOJ调节作用,但属于同一类抗生素的土霉素却没有调节作用。α-氨苄青霉素对12个RND外排泵中的11个都有明显的调节。结论这些RND受不同类型抗生素调节并将它们向外排出。外排泵所向外排出的物质如抗生素,在结构上没有可识别的相关性。其中一个由基因PA2520,PA2521和PA2522组成的RND外排泵,不仅能够向外排出锌离子,而且还能向外排出抗生素。     

实验动物绿脓杆菌的检测方法研究

目的研究和建立实验动物及环境样品绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)快速、准确的鉴定方法。方法分别用VITEK2 Compact全自动分析系统和常规生化方法对绿脓杆菌参考菌株、绿脓杆菌分离株和恶臭假单胞菌分离株进行鉴定试验,并比较不同鉴别培养基的鉴定效果。结果可以用PIA琼脂培养基/CFC琼脂培养基和乙酰胺琼脂培养基为鉴定培养基,采用以氧化酶、明胶液化和42℃生长试验为主的常规鉴定方法,也可采用VITEK2Compact全自动微生物分析系统直接鉴定绿脓杆菌或将其用于常规鉴定结果的确认。结论 VITEK2 Compact全自动微生物分析系统适于绿脓杆菌快速、准确的鉴定或用于对常规鉴定结果的确认。     

紫外诱变选育优势铜绿假单胞菌菌株

采用紫外照射的方法对铜绿假单胞菌菌株进行诱变,从中筛选出一株优势正突变菌菌株B2,并对其形态,生长条件及产鼠李糖脂能力进行了研究。研究发现,相对于亲本B0,菌株B2产鼠李糖脂产量大幅度增高,从0.82 g/L增加到2.71 g/L。菌株形态为杆状菌。最佳生长条件为:温度为30℃,甘油30 g/L,酵母膏2 g/L,微量元素5 m L/L。研究结果表明从重金属含量高的制革污泥中筛选得到的铜绿假单胞菌经紫外诱变后可显著提高产鼠李糖脂产量,并进一步确定诱变后的菌株产鼠李糖脂的最佳发酵条件,为鼠李糖脂的量产提供理论基础。     

烧伤病房感染患者铜绿假单胞菌的分离及耐药性分析

目的 了解烧伤病房感染患者铜绿假单胞菌耐药谱的变化,为防治烧伤病区患者感染铜绿假单胞菌提供合理用药依据.方法 常规方法收集同一时间烧伤病房9名感染患者的患部浓汁和血液标本,分离鉴定出9株铜绿假单胞菌,K-B法进行药敏试验及统计学分析.结果 9株铜绿假单胞菌对氨苄西林、哌拉西林、亚胺培南/西司他丁、头孢他啶、氨曲南、阿米卡星、复方磺胺等11种抗菌药物耐药率均为100%.结论 烧伤病房感染患者铜绿假单胞菌耐药现象严重,应注意铜绿假单胞菌耐药性的监测.     

MALDI-TOF MS对草莓中铜绿假单胞菌和黏质沙雷氏菌的检测

为了评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)在草莓微生物风险监测的应用价值,确定草莓的危害识别微生物及其特征,采用选择性培养方法对50份草莓样品中铜绿假单胞菌和黏质沙雷氏菌进行分离,MALDI-TOF MS对分离微生物进行鉴定,应用SARAMIS Premium软件对这2种食物感梁性病原微生物的蛋白质图谱进行分析和加权修正。结果表明,铜绿假单胞菌在草莓中的检出率为18%,黏质沙雷氏菌检出率为20%,实验获得草莓中分离铜绿假单胞菌完全拟合特征峰12组,标识峰聚类分析结果表明,分离铜绿假单胞菌差异较大;获得草莓分离黏质沙雷氏菌完全拟合特征峰有8组,标识峰加权聚类分析结果可认定分离的2株黏质沙雷氏菌同源。MALDI-TOF MS方法可标识草莓分离微生物的蛋白质特异性特征,且对微生物的溯源及特异性分析有一定优势,表明其在农产品复杂微生物环境中具有应用潜力。     

铜绿假单胞茵主动外排系统与耐药性关系的研究

铜绿假单胞菌是一种重要的院内感染条件致病菌,常感染癌症患者、烧伤患者等机体免疫力低下的患者,它对多种不同理化性质的药物高度耐药,其主动外排系统在耐药性中起主要作用.主要研究了铜绿假单胞菌主动外排泵的类型、组成及对抗生素耐药性的影响.     

铜绿假单胞菌液体发酵产生絮凝现象的研究

对铜绿假单胞菌液体发酵产生的絮凝现象进行了研究。初步确定其由铜绿假单胞菌产生的生物膜引起,测得生物膜中多糖含量约为6.3%,蛋白质含量约为7.7%。考察了添加颗粒营养物质豆饼粉对絮凝现象的影响,分析了天然群体感应抑制剂水杨酸、丁香酚、儿茶素、姜黄素和大蒜提取物对生物膜和菌浓的影响以及群体感应淬灭酶对菌浓的影响。结果显示,添加颗粒营养物质对絮凝物影响不显著;天然群体感应抑制剂不能显著提高铜绿假单胞菌液体发酵菌浓,但对生物膜的分散具有一定作用;群体感应淬灭酶对铜绿假单胞菌液体发酵浓度无显著影响。