高效液相色谱法测定棉籽中的ATP，ADP，AMP

测定生物组织中腺苷三磷酸(ATP)、腺苷二磷酸(ADP)和腺苷一磷酸(AMP)的含量,在研究生物的一些生理生化现象中有重要意义。利用不同方法定量分析这三种腺苷酸的报道已有很多。本文所述是用反相高效液相色谱法,对棉籽中的ATP、ADP和AMP进行测定。     

高效液相色谱法测定细胞内三磷酸腺苷及其代谢物的含量（英文）

研究了三磷酸腺苷(ATP)及其代谢物在细胞内的含量以及2-叔丁基-1,4-苯醌(TBBQ)对ATP及其代谢产物在细胞内含量的影响。建立了一种高效液相色谱法(HPLC)用于快速分离、检测细胞内ATP及其代谢产物(二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP))的含量。使用岛津高效液相系统及艾杰尔Venusil MP C18柱,采用等度洗脱的方式。流动相A相为50 mmol/L磷酸氢二钠和15 mmol/L三甲胺(TEA),用醋酸(HAc)调节pH至7.88;流动相B相为甲醇。采用建立的高效液相色谱法得到了3种代谢物的工作曲线,相关系数高(R~2≥0.999 6),MRC-5细胞中3种代谢物的含量均在线性范围(0.1~100μmol/L)内。该方法检出限低。采用预冷的80%(体积分数)甲醇水溶液提取细胞内的代谢物。该研究建立的方法成功地应用于检测MRC-5细胞中的ATP、ADP和AMP的含量,结果表明,TBBQ会对ATP、ADP、AMP在细胞内的含量产生影响,但TBBQ浓度和ATP、ADP以及AMP在MRC-5细胞内浓度的关系比较复杂。     

蜂王浆中磷酸腺苷的提取及超高效液相色谱分析

比较了高氯酸提取、热水提取和热硫酸镁溶液提取3种提取方式对蜂王浆中磷酸腺苷三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和单磷酸腺苷(AMP)的提取效果,发现在低温(低于4 ℃)下以5%高氯酸的提取效果最佳。采用超高效液相色谱-紫外检测法分析蜂王浆中的ATP, ADP和AMP的含量。以BEH Shield RP18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)为分析柱,以50 mmol/L的磷酸二氢铵(pH 6.5)和乙腈为流动相进行梯度洗脱,3种磷酸腺苷在4 min内实现了较好的分离。以加标王浆样品作添加回收率测定,ATP, ADP和AMP的回收率分别为84.1%～94.3%,86.2%～93.7%和91.0%～104.3%,相对标准偏差均小于10%。方法已被用于一些实际样品的分析,以了解ATP, ADP和AMP在蜂王浆样品中的分布情况。     

用反相高效液相色谱法测定小鼠心肌、骨骼肌中AT P、AD P和AM P的含量

采用反相高效液相色谱法同时测定小鼠心肌、骨骼肌组织中ATP(三磷酸腺苷 )、ADP(二磷酸腺苷 )、AMP(一磷酸腺苷 )的含量。以150mmol/L磷酸二氢钾缓冲液 (pH=6.25)为流动相 ,采用BDShypersilC18 不锈钢色谱柱 ,紫外检测波长为254nm ,线性范围为1～200mg/L。ATP、ADP和AMP的平均加标回收率均在90 %以上 ,检出限分别为10ng、10ng、15ng。该法灵敏、准确 ,试剂费用低。     

对氯苯酚提取-液相色谱法分析烟草中的磷酸腺苷

建立了新鲜烟叶中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和单磷酸腺苷(AMP)3种磷酸腺苷同时测定的方法。烟草样品经过对氯苯酚提取、纯化后,采用三乙胺缓冲液作为流动相洗脱,经C18色谱柱分离,在259 nm波长对样品进行检测。与高氯酸(PCA)法,以及DNA常用的苯酚提取法进行了比较,结果均表明:低温下以对氯苯酚提取的效果较佳,使用三乙胺缓冲液流动相具有分离效率高、检出灵敏的优点。在线性范围(5~200μg/mL)内,磷酸腺苷浓度与峰面积具有很好的相关系数(r>0.9999),检出限达到纳克级水平,氯苯酚法对ATP,ADP和AMP的平均回收率分别为96.8%,97.2%和93.3%,RSD均小于5%。     

铜绿微囊藻中磷酸腺苷的提取及分析

比较了酸提取、有机溶剂提取、MgSO4水溶液加热提取以及MgSO4水溶液加热超声波提取4种方式对磷酸腺苷(ATP、ADP和AMP)的提取效果,确定以MgSO4水溶液加热超声波提取效果最佳。采用MgSO4加热超声波提取时,2 mL提取液对ATP、ADP和AMP的提取效果较好。将ATP、ADP和AMP的混合标准溶液放于沸水浴中保温时,随着保温时间的延长,对ATP和AMP的影响较大,而对ADP的影响相对较小。实验结果证明,以MgSO4水溶液为提取液,用100℃加热10 min后,在超声波细胞粉碎机中超声破碎10 min的提取效率最高,既简单又无毒。用反相高效液相色谱等强度洗脱分离与紫外检测分析藻细胞中的ATP、ADP和AMP的含量,在较短的时间内(10 min)实现了较好的分离,分析准确而快速,是一较好的定性和定量分析方法。ATP、ADP和AMP的回收率分别为88%~97%、103%~107%和109%~115%,均在80%~120%之间,并且标准偏差和相对标准偏差均小于10%,证实了可以用加热超声波破碎提取,HPLC分析ATP、ADP和AMP的方法来提取和分析藻细胞中的ATP、ADP和AMP。     

ATP与对甲基苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐的弱相互作用光谱法研究

本文分别使用荧光猝灭光谱法、荧光滴定实验及FT-IR光谱法对腺苷-5´-三磷酸（ATP）和对甲基苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐（TAME）的相互识别作用做了系统的研究，并得出了一些有意义的结果。在荧光实验中，发现TAME对ATP有很强的荧光猝灭作用，同时为了进一步验证TAME与ATP的相互作用又利用红外光谱法，推测出两者的识别作用位点是在TAME的主链胍基和ATP的磷酸根基团上，结合力为氢键和静电相互作用力。另一方面，本文又分别考察了TAME同ADP和AMP的作用，用Stern-Volmer方程分别计算出相应的猝灭常数，发现TAME与ADP和AMP的作用非常弱，说明TAME对ATP的识别作用有较强的选择性。这种识别作用的发生，对深入理解在ATP合成和水解过程中，ATP合酶中精氨酸残基如何起到“触点”的作用有一定的参考价值。     

三磷酸腺苷大量生产方法研究成功

三磷酸腺苷(ATP)是许多酶催化反应所需要的供应能量的辅助因子(Cofactor)。最近,美国麻省理工学院G.M.Whitesides博士领导的研究组宣布他们研究成功了一种能大量生产ATP的方法,即将丙酮热解生成乙烯酮,再与磷酸进行加成而得乙酰磷酸,后者在腺苷激酶、腺苷酸激酶和乙酸激酶等三种酶共同作用下将腺苷进行磷酸化而成一磷酸腺苷(AMP)、二磷酸     

三磷酸腺苷、二磷酸腺苷和一磷酸腺苷的毛细管电泳分析研究

研究了三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)的毛细管电泳行为，考察了运行缓冲液的pH值、磷酸盐浓度、分离电压、分离温度等因素对这三种化合物的迁移时间和分离效果的影响。结果发现，这些因素对上述三种化合物的分离有显著的影响，在优化的分离条件下，三种物质在10min内可得到分离。方法的检出限为0．125mg／mL，线性范围为0．125～2．00mg／mL。相关系数为0．991～0．997。     

肌球蛋白中金属离子与ATP相互作用及其催化ATP水解的研究进展

生物体内细胞在氧化物质的过程中释放出的大量自由能,这些能量先形成高能磷酸化合物三磷酸腺苷（adenosine 5′-triphosphate,ATP）,当ATP水解为ADP（二磷酸腺苷,adenosine 5′-diphosphate）和无机磷酸时.     

肌球蛋白中金属离子与ATP相互作用及其催化ATP水解的研究进展

生物体内细胞在氧化物质的过程中释放出的大量自由能,这些能量先形成高能磷酸化合物三磷酸腺苷（adenosine 5′-triphosphate,ATP）,当ATP水解为ADP（二磷酸腺苷,adenosine 5′-diphosphate）和无机磷酸时.     

微波-超声波辅助合成聚乙烯亚胺包覆Mn掺杂ZnS量子点用于室温磷光检测三磷酸鸟苷

利用微波-超声波辅助方法合成了水溶性聚乙烯亚胺包覆Mn掺杂ZnS量子点,并建立了基于该量子点的室温磷光检测三磷酸鸟苷(GTP)的新方法。该量子点对GTP具有较高的灵敏度和选择性,能区分GTP与其结构类似物三磷酸腺苷(ATP)、三磷酸胞苷(CTP)、三磷酸尿苷(UTP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)。该量子点的室温磷光对GTP的响应在3 min内达到平衡,其磷光增强值与GTP浓度呈良好的线性关系,对GTP的检出限为0.6μmol/L。该方法成功应用于癌细胞提取液中GTP的检测,为GTP的检测提供了新方法。     

高效液相色谱法检测大鼠子宫内膜腺苷酸类物质含量

测定子宫内膜ATP、ADP、AMP、cAMP对了解子宫正常生理、病理及避孕药等研究有重要意义。本文在Ericson法的基础上,进行部分改进,建立了用同一条件,同时检测ATP、ADP、AMP、cAMP的方法,并测定了大鼠子宫内膜中这四种物质的含量。 实验部分 (一) 仪器与试剂 岛津高效液相色谱仪LC-6A,SPD-6AV紫外-可见光分光光度检测器;ATP、ADP、AMP、cAMP均系Sigma公司产品,KH_2PO_4、     

半导体光催化模拟光合磷酸化研究(IV)-单色光(红、绿、蓝)对ATP合成的影响

报导了以无机半导体材料(Zn*Cd)S∶Ag-KI为催化剂, 红、绿、蓝3种单色光照下的光照度、照光时间、二磷酸腺苷(ADP) 浓度及催化剂量等对三磷酸腺苷(ATP)合成的影响, 获得了单色光光照度、 ADP 浓度、 Na2HPO4 (Pi)浓度及催化剂量等对ATP合成的最佳条件. 在合适的条件下, ADP 浓度为0.1 mmol/L 时的转化率平均可达到2.6～5.8 %, 绿光在合适的条件下对合成ATP有更高的效率, 说明用无机半导体代替植物叶绿体研究控制光-化学转换是完全可行的.     

含芘荧光化学敏感器及其与核苷磷酸盐的相互作用

设计合成3种含芘荧光化学敏感器--化合物(Ⅰ),(Ⅱ),(Ⅲ). 研究了芘丁酸,化合物(Ⅰ),(Ⅱ),(Ⅲ)等与腺嘌呤,5-腺苷单磷酸二钠盐(AMP),5-腺苷二磷酸二钠盐(ADP),5-腺苷三磷酸四钠盐(ATP),5-脱氧胸腺嘧啶三磷酸四钠盐(dTTP)等生物活性分子相互作用时的荧光猝灭光谱,运用Stern-Volmer猝灭等方程分别求出它们相互作用时的猝灭常数及稳定常数. 结合化合物荧光寿命的测定,对含芘荧光化学敏感器在不同波长激发下所得的荧光光谱以及基态下自由分子的CPK模型等对上述含芘荧光化学敏感器同核苷磷酸盐的作用机制进行了讨论.     

哺乳动物细胞是所得多肽复合酶CAD催化反应产物的 HPLC分析

本研究报道了以150mm×4.6mmI.D.Zorbaxoqcyuosyg.10mmoI·L^-1KH~2PO~4和500mmoI·L^-1LKH~2PO~4水溶液为洗脱液,梯度程序为0～5min(φ=1,体积分数)10mmoI·L^-1KH~2PO~4溶液,5～50min由(φ=1)10mmoI·L^-1KH~2PO~4溶液转换到(φ=1)500mmol·L^-1KH~2PO~4溶液时,高效液相色谱分离了哺乳动物细胞中所得肽复合酶ACD催化反应混合物三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和二氢乳清酸(DHO),确定了ATP,ADP和DHO的出峰顺序,制作了工作曲线,确定了催化反应混合物中ATP,ADP和DHO的相应浓度。     

布朗动力学理论模拟动态肌动蛋白纤维的增长

肌动蛋白的聚合耦合三磷酸腺酐(ATP)分子水解成二磷酸腺苷(ADP)分子和磷酸(Pi)的释放两个过程. 因此, 肌动蛋白纤维上的原聚体存在三种不同状态, 即分别结合ATP, ADP/Pi和ADP分子. 原聚体的不同状态导致纤维具有不同的空间图谱, 这些状态的空间分布将影响纤维的各种行为. 为此,建立了相应的分子模型,在布朗动力学模拟中实现了遵循时间演化的连续马尔可夫随机过程的解聚和水解反应; 重点阐述了如何实现纤维两端的聚合和解聚达到化学平衡的方法, 并系统研究了纤维在结合ATP分子的肌动蛋白单体溶液中的增长行为.     

哺乳动物细胞是所得多肽复合酶CAD催化反应产物的 HPLC分析

本研究报道了以150mm×4.6mmI.D.Zorbaxoqcyuosyg.10mmoI·L^-1KH~2PO~4和500mmoI·L^-1LKH~2PO~4水溶液为洗脱液,梯度程序为0～5min(φ=1,体积分数)10mmoI·L^-1KH~2PO~4溶液,5～50min由(φ=1)10mmoI·L^-1KH~2PO~4溶液转换到(φ=1)500mmol·L^-1KH~2PO~4溶液时,高效液相色谱分离了哺乳动物细胞中所得肽复合酶ACD催化反应混合物三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和二氢乳清酸(DHO),确定了ATP,ADP和DHO的出峰顺序,制作了工作曲线,确定了催化反应混合物中ATP,ADP和DHO的相应浓度。     

反相高效液相色谱法测定磷酸果糖激酶的活性

采用反相高效液相法(RP-HPLC)测定磷酸果糖激酶的活性.将磷酸果糖激酶与含有果糖-6-磷酸和ATP的反应体系混合,置于30℃水浴中,反应20 min后,沸水浴3 min终止反应.通过RP-HPLC测定酶反应前后产物二磷酸腺苷(ADP)量的变化来分析酶的活性.ADP的生成量在5～400 mg/L范围内具有良好的线性关系,方法的精密度良好(RSD<5%).本方法与通常所用的酶偶联法(ECM)相比准确度高,且简便易行.     

Ion-Pairing Liquid Chromatography Coupled with Mass Spectrometry for the Simultaneous Determination of Nucleosides and Nucleotides

Adenosineanditscorrespondingnucleotidesadenosine 5′monophosphate (AMP) ,adenosine 5′diphosphate (ADP)andadenosine 5′triphosphate(ATP)areimportantbiomoleculesthatprovideen ergyandsubstratesforvariouscellularbiochemicalprocesses[1] .Therehavebeenstrongde…