多肽研究(Ⅳ)——α-人心房肽片段的快原子轰击质谱(FAB-MS)研究

采用FAB-MS测定α-人心房肽片段的氨基酸序列。通过分析碎片离子的m/z值,可以明确表达各肽段的氨基酸序列。在分子离子区都是[M+H]~+峰,所有片段羰基的α断裂都有肽键断裂和碳碳键断裂两种方式。     

肽的研究 Ⅰ.带保护基的胰岛素A鏈氨端五肽的合成

本文报告三种带不同保护基的胰岛素A键氨端五肽的合成。它们是N-苄氧羰基甘氨酰-异亮氨酰-缬氨酰-γ-甲酯-谷氨酰-谷氨酰胺(Ⅰ)、N-苄氧羰基甘氨酰-异亮氨酰-缬氨酰-γ-甲酯-谷氨酰-谷氨酰胺酰肼基甲酸叔丁酯(Ⅱ)和N-苄氧羰基甘氨酰-异亮氨酰-纈氨酰-谷氨酰-谷氨酰胺甲酯(Ⅲ)。五肽Ⅰ是由初次合成的N-苄氧羰基甘氨酰-异亮氨酰-纈氨酸(Ⅵ)与γ-甲酯-谷氨酰-谷氨酰胺(Ⅸ)经羧酸碳酸混合酸酐法,或Ⅵ的酰肼衍生物与Ⅸ经迭氮化物法缩合而成。五肽Ⅱ是由Ⅵ与γ-甲酯-谷氢酰-谷氨酰胺酰肼基甲酸叔丁酯(Ⅺ)经混合酸酐法合成。五肽Ⅲ则系用活化酯法由谷氨酰胺甲酯的氨端开始,逐步与相应的N-保护的氨基酸对硝基苯酯缩合、延伸而得。在用混合酸酐法合成五肽Ⅰ中,从反应混合物分离得N-苄氧羰基甘氯酰-异亮氨酰-D-纈氨酸(ⅩⅫ)。由ⅩⅫ与Ⅸ合成五肽Ⅰ的立体异构体,N-苄氧羰基甘氨酰-异亮氢酰-D-纈氨酰-γ-甲酯-谷氨酰一谷氨酰胺(ⅩⅩⅢ)。由N-苄氧羰基-γ-甲酯-谷氧酰-谷氨酰胺酰肼基甲酸叔丁酯(Ⅹ)经脱去酰肼上的保护基后,用迭氮法与S-苄基-半胱氨酰-S-苄基-半胱氨酸缩合而得N-苄氧羰基-γ-甲酯-谷氨酰-谷氨酰胺酰-S-苄基-半胱氨酰-S-苄基-半胱氨酸(四肽ⅩⅩⅤ)。五肽Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,四肽ⅩⅩⅤ及其主要的合成中间肽的光学纯度均经亮氨酸氨肽酶、胰羧肽酶法或旋光法检定。在五肽的酶水解的条件下有部分的谷氨酰胺和谷氨酸变为四氢吡咯酮-(5)-羧酸-(2),致使该二氨基酸的测定值偏低。     

肽的研究——Ⅱ.带保护基的胰岛素A鏈羧端九肽的合成

本文报告带保护基的胰島素A鏈羧端九肽Ⅰ(N-苄氧羰基亮氨酰-酪氨酰-谷氨酰胺酰-亮氨酰-γ-甲酯-谷氨酰-天冬酰胺酰-酪氨酰-S-苄基半胱氨酰-天冬酰胺甲酯)的合成。Ⅰ是由N-苄氧羰基亮氨酰-酪氨酰-谷氨酰胺酰-亮氨酸(四肽Ⅱ)和由N-苄氧羰基-γ-甲酯谷氨酰-天冬酰胺酰-酪氨酰-S-苄基牛胱氨酰-天冬酰胺甲酯(五肽Ⅲ)脫N-保护基所得氨端自由的五肽(Ⅲa)經二环己基碳二亚胺法縮合而成。四肽Ⅱ和五肽Ⅲ分別由二种不同方法合成。多肽Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ皆經元素分析、紙层析、紙电泳、酶水解分析証明系純粹,均一的L-型。在合50％的二甲基亚碸的三(羥甲基)甲胺緩冲液中亮氨酸氨肽酶仍能将脫N-保护基的四肽与九肽完全水解为相应的氨基酸。     

含半胱氨酸多肽的研究——Ⅲ.牛胰岛素A链带保护基的氨端九肽的合成

本文报告带保护基的牛胰岛素A链氨端九肽酯■和相应的九肽酰肼■与九肽酸■的合成.苄氧羰基甘氨酰-异亮氨酰-缬氨酰-γ-叔丁酯谷氨酸乙酯(III)分别由已知的苄氧羰基缬氨酰-γ-叔丁酯谷氨酸乙酯经催化氢解法脱去N-保护基后与苄氧羰基甘氨酰-异亮氨酰肼(VIII)按迭氮化合物法缩合,以及由已知的苄氧羰基甘氨酰-异亮氨酰-缬氨酸(VIII)与γ-叔丁酯谷氨酸乙酯按碳二亚胺法合成.III经肼解或皂化分别得四肽酰肼■和四肽酸■.苄氧羰基谷氨酰胺酰-S-苄基半胱氨酰-S-苄基半胱氨酰-丙氨酰-O-乙酰丝氨酸甲酯(V)分别由已知的苄氧羰基-S-苄基半胱氨酰-S-苄基半胱氨酰-丙氨酰-丝氨酸甲酯XII_a或苄氧羰基-S-苄基半胱氨酰-S-苄基半胱氨酰-丙氨酰-O-乙酰基丝氨酸甲酯XII以溴化氢-乙酸脱去N-保护基后与苄氧羰基谷氨酰胺对硝基苯酯(XIII)按活化酯法缩合而得.如以溴化氢-三氟乙酸脱去XIIa的N-保护基后与XIII按活化酯法缩合则得Va,合成Va的另一方法是将已知的苄氧羰基谷氨酰胺酰-S-苄基半胱氨酰-S-苄基半胱氨酰肼XIV通过迭氮化物法与丙氨酰-丝氨酸甲酯(X)缩合而得.五肽V经溴化氢-乙酸脱去N-保护基后与四肽酰肼IV或四肽酸IV_a分别通过迭氮化物法和碳二亚胺法缩合得到同一的九肽甲酯(I).化合物I用三氟乙酸脱去叔丁酯后肼解得九肽肼(II).化合物I经皂化得相应的九肽酸IIa.     

肽的研究 Ⅳ.带保护基的牛胰岛素A链羧基末端十二肽及十六肽的合成

本文报告带保护基的牛胰岛素A链羧端的十二肽Ⅰ(N-苄氧羰基缬氨酰-S-苄基半胱氨酰-丝氨酰-亮氨酰-酪氨酰-谷氨酰胺酰-亮氨酰-γ-甲酯谷氨酰-天冬酰胺酰-酪氨酰-S-苄基半胱氨酰-天冬酰胺甲酯)和十六肽Ⅱ(N-苄氧羰基-S-苄基半胱氨酰-S-苄基半胱氨酰-丙氨酰-丝氨酰-缬氨酰-S-苄基半胱氨酰-丝氨酰-亮氨酰-酪氨酰-谷氨酰胺酰-亮氨酰-γ-甲酯谷氨酰-天冬酰胺酰-酪氨酰-S-苄基半胱氨酰-天冬酰胺甲酯)的合成. 肽Ⅰ和Ⅱ是由前文合成的带保护基的九肽Ⅳ(N-苄氧羰基亮氨酰-酪氨酰-谷氨酰胺酰-亮氨酰-γ-甲酶谷氨酰-天冬酰胺酰-酪氨酰-S-苄基半胱氨酰-天冬酰胺甲酯)经溴化氢-乙酸法脱去N-保护基后按迭氮化合物法分别与三肽酰肼Ⅴ(N-苄氧羰基缬氨酰-S-苄基半胱氨酰-丝氨酰肼)和七肽酰肼Ⅷ(N-苄氧羰基-S-苄基半胱氨酰-S-苄基半胱氮酰-丙氨酰-丝氨酰-缬氨酰-S-苄基半胱氨酰-丝氨酰肼)缩合而得. 肽Ⅰ和Ⅱ经元素分析及氨基酸组成分析证明为分析纯.由于它们是由光学纯L型的肽Ⅳ,Ⅴ,Ⅷ等经迭氮化合物法缩合而成,因此肽Ⅰ和Ⅱ很可能皆为光学纯L型.肽Ⅰ能被亮氨酸氨肽酶水解为相应的组成氨基酸而不留显著的茚三酮阳性的残肽.     

肽的研究——Ⅴ.新的带保护基牛胰岛素A链氨端五肽和九肽的合成

本文叙述带保护基的牛胰岛素A链氨端五肽Ⅰ(N-苄氧羰基甘氨酰-异亮氨酰-缬氨酰-γ-叔丁酯谷氨酰-谷氨酰胺酰肼基甲酸叔丁酯)及九肽Ⅱ(N-苄氧羰基甘氨酰-异亮氨酰-缬氨酰-谷氨酰-谷氨酰胺酰-S-苄基半胱氨酰-S-苄基半胱氨酰-丙氨酰-丝氨酰脐)的合成。Ⅰ是由已知三肽Ⅲ(N-苄氧羰基异亮氨酰-缬氨酰-γ-叔丁酯谷氨酸乙酯)经二种不同的合成步骤分别缩合而得,五肽Ⅰ经三氟乙酸脱去γ-叔丁基和N-叔丁氧羰基后与已知四肽Ⅷ(S-苄基半胱氨酰-S-苄基半胱氨酰-丙氨酰-O-乙酰丝氨酸甲酯溴氢酸盐)借迭氮法缩合而得九肽酯Ⅸ再经肼解而得九肽肼Ⅱ。合成的三肽、四肽、五肽和九肽的化学纯度曾经纸层析、纸电泳、元素分析及氨基酸组成分析证明,其光学纯度(除九肽Ⅱ和Ⅸ外)皆曾经亮氨酸氨肽酶水解及水解物的氨基酸组成测定证明为L型,九肽Ⅸ是由光学纯L型的肽Ⅰ与Ⅷ经迭氦法缩合而成,因此Ⅸ以及Ⅱ很可能为光学纯L型。     

多肽片段连接方法及肽硫酯和肽醛的合成

本文综述了多肽和蛋白质合成中的片段连接方法,这是近年来多肽和蛋白质合成领域中方法学上的重要进展.该方法使用非保护的多肽片段,无需酶或化学活化试剂,在缓冲溶液中能够高产率地获得多肽和蛋白质.还介绍了与多肽片段连接有关的肽硫酯和肽醛的合成方法.     

α-(5-氟尿嘧啶-1-基甲基甲酰基)氨基苯丙酸的合成

以5-氟尿嘧啶-1-基乙酸、二环己基碳二酰亚胺和L-苯丙氨酸为原料,1-羟基苯并三氮唑作为辅助试剂,通过碳二亚胺法合成了一种新型的α-(5-氟尿嘧啶-1-基甲基甲酰基)氨基苯丙酸,其结构经IR和元素分析表征.     

固-液相转移催化合成——Ⅰ.通过醛亚胺的烷基化合成α-氨基酸

近年来,通过甘氨酸酯 Sohiff 碱衍生物的烷基化反应,合成较高级的α-氨基酸的研究工作引人注目。其中相转移催化烷基化反应具有反应条件温和、选择性好、操作简便和费用低廉的特点.O'Donnell 等报道,醛亚胺 Sohiff 碱1的酸性低、不稳定,难于作为烷基化反应的中间体,而酸性较高的酮亚胺 Sohiff 碱2较为稳定,可作为相转移催化烷基化反应的底     

酶促合成肽的研究——Ⅰ.亮-脑啡肽色氨酸类似物的酶促合成

在先后以α-胰凝乳蛋白酶和木瓜酶作催化剂的作用下,从C端的LeuNH_2的氨基开始,逐个与N保护的氨基酸或其衍生物缩合,合成了亮-脑啡肽色氨酸类似物—TyrGlyGly Trp LeuNH_2~(**)。对酶的专一性、有机溶剂的选择和合成条件等进行了研究,在Z-TyrOMe和GlyGlyTrp LeuNH_2的缩合反应中,比较了相转移法和均相法。上述两种酶的酶促接肽的供体以N-酰基氨基酸酯为好,比相应的游离酸反应速度快,副反应少。如用嗜热菌蛋白酶,则以N-酰基氨基酸为好。酶促合成与从有机合成所得的产物相同。初步的体外实验表明合成的TyrGlyGlyTrpLeuNH_2和天然的亮-脑啡肽对豚鼠回肠的收缩显示相同程度的鸦片样的抑制作用。     

β-(取代色酮-3-基)α-氨基酸的合成

色酮类化合物具有显著的生理活性[1,2].氨基酸是构成蛋白质的基本单元,也是合成机体抗体、激素和酶的原料,在人体内有特殊的生理功能,是维持生命现象的重要物质[3].将具有特殊生理功能的氨基酸引入色酮环母体中,有可能得到一类兼具色酮和氨基酸生物活性的新化合物,这一过程是由噁唑酮作为中间体来实现的.噁唑酮及其衍生物是合成氨基酸、芳基乙酸及许多天然产物的重要中间体[4].我们将各种取代的3-甲酰基色酮与马尿酸反应得到噁唑酮,再经酸化水解开环,方便地制得了一系列取代色酮的α-氨基酸.     

α-(2-噻唑基脲基)膦酸二苯酯的合成

报道了一种简便的合成取代脲基膦酸酯的通用的新方法。在二氯甲烷中,三乙胺为缚酸剂的条件下,α-氨基膦酸二苯酯与三聚光气反应形成α-异氰酸基膦酸酯2,2不经分离,直接与2-氨基(苯并)噻唑加成得到α-(2-噻唑基脲基)膦酸二苯酯3,产率55.0%-88.9%。     

带保护基的胰岛素A链羧端十二肽的合成

已知合成的胰岛素A链羧端带保护基的十二肽酯Ⅰ在不同条件下皂化,得十二肽Ⅱ,其物理性质略有差异,经制成牛胰岛素A链井进一步制成半合成牛胰岛素粗产物后,其生物活力相当于天然胰岛素的1—4％。根据二条不同的路线直接合成了带保护基的胰岛素A链羧端十二肽Ⅱ,路线一:由已知的四肽Ⅲ制成其酰肼衍生物,再转变为相应的迭氮化物后与脱N-苄氧羰基和γ-叔丁基的五肽Ⅴ(即Vb)缩合成九肽Ⅵ,Ⅵ经脱除N-保护基后与已知的三肽酰肼Ⅶ以迭氮化物法缩合郎得十二肽Ⅱ.路线二:三肽酰肼Ⅶ先制成迭氮化物再与脱N-保护基的已知二肽酯ⅩⅩⅢ反应成五肽酯ⅩⅩⅣ,再经肼解得五肽酰肼ⅩⅩⅤ,然后按迭氮化物法与脱苄氧羰基的二肽Ⅹ缩合成七肽酯ⅩⅩⅥ,再肼解得七肽酰肼ⅩⅩⅦ,最后通过迭氮化物法与五肽V_b缩合,亦得相同的十二肽Ⅱ.由这两种方法直接合成的十二肽Ⅱ,其质量较皂化所得为优,并已用于牛胰岛素A链的合成与结晶牛胰岛素的半合成和全合成。五肽Ⅴ和七肽ⅩⅩⅥ都曾各按二条不同的路线合成,而得到相同的产物,本文报导的合成肽段均经分析证明为化学纯的均一物质。     

酶促合成肽的研究Ⅰ.亮-月主啡肽色氨酸类似物的酶促合成

早在1937年Bergmann和Fraenkcl-Conrat用木瓜酶作催化剂连接成了羧酰苯胺键,其后Berg-mann和Fruton藉α-胰凝乳蛋白酶的催化连接了二肽,蛋白酶促合成肽的问题在近几年内又引起了人们的兴趣。     

固相多肽合成中Dmab保护基的脱除研究

在固相多肽合成中,Dmab作为羧基保护基具有脱保护条件温和、步骤简便、选择性高的特点,但有时脱保护效率并不稳定.为此,基于Fmoc/t Bu/Dmab三维正交保护策略,利用固相多肽合成技术设计并合成了4个肽树脂,对固相多肽合成中Glu和Asp主链和侧链羧基的Dmab保护基脱除规律进行了研究.结果显示,树脂上α-ODmab的脱保护快速、完全,β-ODmab和γ-ODmab脱保护反应较慢,可以检测到相应的中间产物(4-氨基苄酯肽),推测脱保护效率由快到慢依次为α-ODmabβ-ODmabγ-ODmab.该结果表明Dmab作为α-COOH保护基具有较高的应用价值,但用于β-COOH和γ-COOH保护时,其脱保护条件尚不成熟.     

β-(取代色酮-3-基)-α-丙氨酸的合成

3-甲酰基色酮1a～1h与马尿酸反应,生成缩合产物色酮-3-基吖内酯2a～2h,水解后得到相应的β-(取代色酮-3-基)-α-丙氨酸3a～3h.     

1-(α-吡啶基)-5-苯基-3-(α-呋喃基)甲■的合成及其与镉显色反应的研究

本文研究了1-(α-吡啶基)-5-苯基-3-(α-呋喃基)甲(月朁)的合成方法及其在非离子表面活性剂吐温-80存在下与镉的显色反应。在pH 9.5～12.0时,络合物的λ_(max)=654nm,δ_(654)=6.0×10~4。组成为Cd∶R=1∶2。镉含量在0—13微克/10毫升范围内服从比尔     

从N-Fmoc-L-α-氨基酸合成对应的同系物N-Fmoc-L-β-氨基酸(Ⅰ)

描述了以重氮甲烷为重氮化试剂,以商品易得的N-Fmoc-L-α-氨基酸为原料,成功地运用Arndt-Eistert合成,仅通过两步反应,就高产率地合成了8个对应的同系物N-Fmoc-L-β-氨基酸的方法。     

合成聚乙烯基苯甲酸树脂的研究(Ⅰ)——用氯甲基化交联聚苯乙烯一步法合成

本文用硝酸一步法将大孔氯甲基化交联聚苯乙烯树脂小球(氯球)氧化成聚乙烯基苯甲酸树脂。经红外光谱鉴定,推测了反应的机理。     

有机磷化合物研究 ⅩⅧ.α-砜基膦酸酯的合成和反应

本文报道α-砜基碳阴离子和磷酰氯的反应,提供了合成α-砜基膦酸酯和α,β-不饱和砜的新方法,此方法具有原料易得、反应步骤少、得率较高等优点。还讨论了α-芳砜基膦酸酯的质谱。