鱼类细胞电融合条件的研究

1988-1989年，C.L草鱼(Ctenopharyngodou idellus)尾鳍组织HGC-87细胞为材料，应用自制$P-88型细胞电融合仪，对鱼类细胞的电融合条件进行研究.草鱼细胞电融合时，需要较高的脉冲场强，低于4 KV/c二时，细胞很少发生融合.场强为lOKV/cm,脉宽60-100 us，连续3 - 7个脉冲，融合率可达80男，融合后存活率达85-90男.电场介质为3劣甘露醇液，含一定浓度的CaCI,和MgCls, Mg十十在1 m mol/L浓度以下，能促进细胞的极化，但融合时细胞易被电击击破.Ca++在1 m mol/L浓度以下，有利于细胞极化成串.融合细胞经21天培养后仍存活，有细胞分裂.     

泥鳅早期胚胎细胞的超微结构变化观察

泥鳅早期胚胎细胞的超微结构变化：卵裂期，有些线粒体内含有片层状类脂物，或者含有糖原颗粒，有些线粒体嵴呈同心圆状．在胚胎细胞中也有片层状类脂物，其中有些片层体内含有黑色糖原颗粒，类似于次级溶酶体；外包一层单位膜的卵黄颗粒起始含无定形的卵黄物质，然后卵黄中间出现空泡，不久卵黄颗粒中出现线粒体、膜性物质、核糖体样颗粒、糖原颗粒和小的卵黄粒．由此可见，卵黄除了向胚胎细胞提供营养物质之外，还向胚胎细胞提供膜性物质和核糖体等．以上这些观察结果，对于丰富鱼类个体发育的基本理论具有重要意义     

高效建立129S1/SvImJ 小鼠胚胎干细胞方法的探讨

选取超排后129S1/SvImJ品系小鼠的优质囊胚,使用辐照后冻存复苏的小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,对比高浓度酶短时间消化法和低浓度酶长时间消化法,以0.25%胰酶-0.04%EDTA高浓度酶短时间消化法高效建立了4株小鼠胚胎干细胞系,建系率为36.31%.碱性磷酸酶,核型分析,体外分化和体内分化能力以及小鼠胚胎干细胞表面特异性分子标志0ct-4和Nanog的检测等表明,4个ES细胞系均为典型的小鼠胚胎干细胞系.所建立的ES细胞系为大规模培养ES细胞,进行后续的实验建立了理想的材料平台.     

羧甲基茯苓多糖上调HBV转基因小鼠树突状细胞功能

采用1％羧甲基茯苓多糖（CMP）腹腔注射，摘取乙型肝炎病毒（HBV）转基因小鼠脾脏，制备淋巴细胞，MTT（噻唑蓝粉剂）法观察CMP对淋巴细胞的毒性作用；经粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白细胞介素-4（IL-4）培养转基因小鼠脾脏来源树突状细胞（DC），ELISA法检测DC分泌IL-12以及刺激混合淋巴细胞反应T淋巴细胞分泌IL-10、IFN-γ的含量．CMP在0～500mg／L浓度对HBV转基因小鼠无毒性作用，并能显著促进HBV转基因小鼠DC分泌IL-12，在混合淋巴细胞反应中，能显著促进T淋巴细胞分泌IFN—γ并抑制IL-10的分泌，从而上调DC功能．     

小鼠体外T淋巴细胞集落形成的研究

本文建立了一种改良的适于小鼠脾脏淋巴细胞形成 T 细胞集落的微量甲基纤维素半 固体培养系统.先将脾脏有核细胞含有m l) 的液相中培养 24 小时,然后收集非粘附细胞,将其接种到含甲基纤维和 15 % Co nA一L C M 的半固体系统中培养,细胞的终浓度为.以上培 养 条件是通过正交设计试验所获得的最优组合,可获得高集落形成率.本文还对集落形成细 胞 的性质和集落生长的动力学进行了讨论     

羧甲基茯苓多糖上调HBV转基因小鼠权突状细胞功能

采用1%羧甲基茯苓多糖(CMP)腹腔注射,摘取乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠脾脏,制备淋巴细胞,MTT(噻唑蓝粉剂)法观察CMP对淋巴细胞的毒性作用;经粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)培养转基因小鼠脾脏来源树突状细胞(DC),ELISA法检测DC分泌IL-12以及刺激混合淋巴细胞反应T淋巴细胞分泌IL-10、IFN-γ的含量.CMP在0～500 mg/L浓度对HBV转基因小鼠无毒性作用,并能显著促进HBV转基因小鼠DC分泌IL-12,在混合淋巴细胞反应中,能显著促进T淋巴细胞分泌IFN-γ并抑制IL-10的分泌,从而上调DC功能.     

重组人白细胞介素-1β对小鼠玻璃化冷冻桑椹胚体外生长发育和移植存活率影响的研究

研究探讨了重组人白细胞介素-1p(rhIL-1β)对小鼠玻璃化冷冻桑椹胚体外生长发育和移植存活率的影响作用.结果表明:培养液中重组人白细胞介素-1β浓度为50IU/mL时,对小鼠玻璃化冷冻胚胎的体外生长发育无明显的影响,当浓度为5,500,5 000IU/mL时,对胚胎的生长发育具有明显的抑制作用;小鼠玻璃化冷冻胚胎解冻后,经过5,5,50,500IU/mL重组人白细胞介素-1β,3-4 h的短期处理后,胚胎妊娠率明显提高,其中50IU/mL处理组(100%)与对照组(56.25%)相比差异显著(P＜0.05),而5 000IU/mL处理组(33.33%)的胚胎妊娠率明显降低,与对照组(56.25%)相比差异显著(P＜0.05).本研究表明50IU/mL重组人白细胞介素-1β的短期处理可能提高母体对冷冻胚胎的接受能力.高浓度重组人白细胞介素-1β对小鼠胚胎可能具有直接的毒性作用.     

牛早期胚胎性别鉴定的PCR方法研究

探讨了ＰＣＲ法鉴定牛早期胚胎性别时所用的引物,反应缓冲液中Ｍｇ２＋浓度,循环反应的次数及可能造成污染的各种因素对性别鉴定结果的影响．并对１８个胚胎进行了性别鉴定,移植３８枚性别鉴定后的胚胎,成功产下２头与预测性别一致的牛犊,胚胎性别可鉴率为９４．１％,预测性别符合率为１００％．     

纳米二氧化硅体内与体外氧化应激及细胞毒性实验研究

研究了纳米二氧化硅(SiO2)体内及体外氧化应激损伤及细胞毒性作用及机制.体内实验采用ICR小鼠,纳米SiO2经口灌胃染毒3次,检测肺组织中MDA(丙二醛)和SOD(超氧化物歧化酶)含量,观察纳米SiO2对小鼠肺的氧化应激毒性.采用体外培养的小鼠上皮细胞(JB6细胞),观察不同质量浓度纳米SiO2染毒后的细胞形态改变,通过蛋白免疫印迹实验检测纳米SiO2是否通过FAS信号途径引起细胞凋亡.研究结果表明:纳米SiO2经口染毒后对小鼠肺具有氧化应激损伤作用,表现为随染毒剂量的升高,肺组织中MDA产生量增加,呈一定的剂量-反应关系.同时,肺组织内SOD水平总体趋势降低,但是差别未见统计学意义.体外培养细胞实验中,纳米SiO2染毒后可引起细胞出现凋亡并呈空泡样变.蛋白免疫印迹实验中,纳米SiO2可引起FAS信号蛋白表达量明显上升,但是FADD表达水平并不升高.     

玻璃化冻存对胚胎神经细胞活性及脊髓移植的影响

采用玻璃化冻存技术对大鼠胚胎神经细胞进行深低温保存,在冻存１ｄ、１０ｄ、２０ｄ和４０ｄ后,３８℃水浴快速复温,离心洗脱冷冻保护剂,检测胚胎神经细胞的活性与功能,并移植于脊髓损伤大鼠．实验结果表明：玻璃化冻存４０ｄ的胚胎神经细胞,存活率为７６．４±８．３％,膜完整性为冻存前的６９．４±７．８％．细胞活力虽有下降,但仍可维持较高水平．培养１周的部分神经元建立突触联系,移植于脊髓损伤大鼠仍有一定的修复作用     

曼氏无针乌贼胚胎发育形态及发育时序的研究

观察了室内培育的曼氏无针乌贼自然生产的受精卵形态和胚胎发育过程.结果表明,曼氏无针乌贼受精卵成乳头状,平均卵长10mm,平均卵宽5.5mm,受精卵外被黑色坚韧而富有弹性的三级卵膜,成串聚集一起成葡萄状.胚胎发育分为12个阶段：受精卵期、卵裂期、囊胚期、原肠胚期、初具形态期、腕分化期、心跳出现期、色素出现期、内骨骼形成期、尾腺出现期、缘膜形成期、孵化期.其胚胎大小从卵裂期开始增长,卵裂期胚胎长（3.40±0.12）mm,胚胎宽（3.29±0.14）mm,到孵化出膜前胚胎长达（8.17±0.33）mm,胚胎宽达（7.17±0.33）mm,增大了2倍左右.初具形态期各器官开始形成,胴部、头部、腕部开始分化.在19~21℃水温下,从受精卵到孵化出膜历时28~30d,初孵小乌贼仍挂着梨状卵黄囊,卵黄囊均长3.70mm,均宽2.75mm,在水中游动1~10min后就自动脱落,乌贼幼体一出膜就能喷墨,同时能开口摄食动物性饵料.     

运动对小白鼠乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的影响初探

经总酶活性测定和凝胶电泳图谱分析发现:剧烈运动后,小白鼠六种组织LDH总酶活性,骨骼肌有显著升高,(p<0.05),其余五种组织均变化不显著;心肌、骨骼肌、肾脏的M型LDH相对活性显著升高(P<0.05),而H型LDH相对活性显著下降(p<0.05);相应地,A亚基比例显著升高,B亚基比例显著下降,这种变化似能反应剧烈运动对小白鼠厌氧代谢的明显影响.     

大鼠胚脑细胞玻璃化冷冻保存研究

在20 C室温下,用玻璃化冻存液(含5.5 mol/L乙二醇和1 mol/L蔗糖)对大鼠胚脑细胞进行一步法和两步法深低温保存.在冻存1、3、7、15 d后,37 C水浴快速复温,洗脱冻存保护剂,检测细胞活性.结果表明:两步法0.5 min平衡组,在玻璃化冻存15 d后,胚脑细胞的存活率和SDH活性分别为(78.6±3.3)%和0.69±0.05,细胞活性水平最高.此外,一步法1 min平衡组,冻存15 d后,细胞活性也较高,细胞存活率和SDH活性分别为(77.9±4.7)%和0.68±0.04.冻存后的胚脑细胞培养15 d后,生长良好并能伸出突起与相邻的神经细胞建立联系.     

小鼠肝脏和肌肉在甘油和二甲亚砜中经不同温度冷冻后的耗氧量

本文用氧电极技术测定小鼠肝脏和肌肉组织的耗氧量.将组织放置在台氏液,10%甘油台氏液或二甲亚砜台氏液内,降温到0℃,-20℃,-40℃及-196℃后,迅速在40℃水浴内复温,然后分别测定冷冻前后的耗氧量.实验结果表明,不加冷冻保护剂的肝脏或肌肉组织经过冷冻处理后,呼吸强度随温度的降低而减少.在-20℃时急骤降低,肝脏只有对照组的51%,肌肉为22%.添加冷冻保护剂的冷冻各组,都比不加保护剂的耗氧量要高. 二甲亚砜保护小鼠肝脏和肌肉组织的代谢活力要比甘油在同样条件下为优. 尤其在细胞低温致死的危险温度区域时更为明显.     

抗HPV E7小鼠单克隆抗体与人类宫颈癌细胞的特异性结合

使用抗HPV E7蛋白的小鼠单克隆抗体进行Western blot杂交，发现3种人类宫颈癌细胞系CaSki、Hela S3和SiHa均表达一定量的HPV E7病毒蛋白，表达量由高至低依次为CaSki，Hela S3，SiHa．选取CaSki为代表，用荧光免疫标记法检测抗E7抗体分子与活体癌细胞中HPV E7蛋白结合的情况．结果发现，仅衰亡细胞、0．3％Triton X-100处理30min后的活细胞以及^137 Cs辐射处理后的活细胞显示荧光，暗示只有细胞膜通透性发生改变后抗E7小鼠单克隆抗体分子才能进入细胞与HPV E7蛋白特异地结合．流式细胞仪检测表明，与同型IgG抗体mAbS26相比，抗E7抗体分子与CaSki细胞作用时荧光标记细胞的净增百分率为16．5％，说明抗E7小鼠单克隆抗体分子与CaSki细胞结合具有特异性．     

小鼠血液阻抗频谱特性及其等效电路模型分析

在0.01～100MHz频率范围,使用Agilent 4294A阻抗分析仪测量了小鼠血液细胞交流阻抗,通过Bode图、Nyquist图及Nichols图的数据以及等效电路模型曲线拟合分析,建立了小鼠血液细胞阻抗频谱特性和等效电路模型参数.研究表明：（1）小鼠红细胞阻抗谱的幅模量和相位角具有频率依从性;（2）小鼠血液细胞阻抗频谱具有2个特征频率（FC1=2.8MHz,FC2=4.2MHz）;（3）小鼠血液整体细胞膜电容Cm=120F·cm^-1,细胞膜电阻率〉10MΩcm.     

人胃黏膜上皮细胞介电谱的实验研究

在0.01~100 MHz范围内,使用交流电阻抗方法测量了人胃上皮GES-1细胞悬浮液的介电谱,通过介电谱的实部和虚部以及复平面图的分析,观察体积分数对 GES-1细胞介电谱特性的影响.结果表明GES-1细胞的介电行为具有3个特征：(1)频率依赖性,即随电场频率的增加,其介电常数增量(Δε=ε-εh)减小,电导率增量(Δκ=κ-κL)增加;(2)体积分数依存性,即当体积分数增加时,介电常数最大增量(Δεmax)、电导率最大增量(Δκmax)和峰值(P1、P2、P3)随之增加;(3)具有3个特征频率(f1、f2、f3),分别来源于细胞膜(f1)、细胞核膜(f2)和细胞核仁(f3).     

内源性n-3多不饱和脂肪酸对fat-1转基因小鼠血糖血脂的影响

利用fat-1转基因小鼠模型,研究内源性n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFAs)的血糖血脂调节作用.采用fat-1转基因小鼠和C57BL/6野生型小鼠喂食高n-6、低n-3 PUFAs的标准配方饲料4周,然后2组小鼠给予高糖饮液自由饮用4周,每周测体重.第8周末,取血离心测血糖、胰岛素、甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)水平.结果表明：fat-1转基因小鼠体重增加幅度、空腹血糖值、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数、血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平明显低于野生型小鼠(P<0.05).认为n-3 PUFAs能抑制体重增长,降低小鼠血糖、血脂和胰岛素抵抗,起到调节血糖、血脂的作用.