氨基酸的咔唑-9-乙基氯甲酸酯柱前衍生高效液相色谱分析

采用一种新型氯甲酸酯类荧光衍生试剂咔唑－9－乙基氯甲酸酯（CEOC）对氨基酸进行柱前衍生，并通过荧光检测的方法进行高效液相色谱（HPLC）分析；在Hypersil BDS C18柱上对19种氨基酸衍生物进行了分离，衍生物的激发和发射波长分别为λex=293nm,λem=365nm,当衍生化缓冲液pH为9．0，衍生试剂总量（摩尔数）为氨基酸总量的4倍时，衍生化产率最大，平均检出限可达22．8fmol。     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定血清中9种胆汁酸

建立了一种柱前衍生反相高效液相色谱(RP-HPLC)测定血清中9种胆汁酸的方法。以4-溴甲基-7-甲氧基香豆素(BMC)为衍生剂,用Waters Nova C18色谱柱分离,采用甲醇／乙腈和水梯度洗脱,荧光检测,9种胆汁酸在5～40μmol／L范围内具有良好线性,r为0．9988～0．9998。回收率为85．40％～100．45％,检出限为1～2μmol／L。该法灵敏、特效、重复性好,可用于临床血清中微量胆汁酸的测定。     

2-(11H-苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯柱前衍生化用于氨基酸的高效液相色谱分析

利用新型荧光试剂2-(11H-苯[a]咔唑)乙基氯甲酸酯(BCEC-Cl)作为柱前衍生化试剂,在HypersilBDS C18(200mm×4.6mm,5μm)反相色谱柱上,采用梯度洗脱对20种氨基酸衍生物进行了分离检测。在乙腈与Na2B4O7缓冲液中,室温下BCEC-Cl与氨基酸反应5min可实现完全衍生。检测的激发和发射波长分别为λex=279nm,λem=380nm。采用柱后质谱电喷雾离子源(ESI source)正离子模式,实现了水解牛血清白蛋白中氨基酸和油菜蜂花粉中氨基酸的定性定量检测。荧光定性检测的线性回归系数均大于0.9990,检出限为1.49~19.74fmol(S/N=3)。     

咔唑-9-乙基氯甲酸酯柱前衍生胺类化合物高效液相色谱分离

采用一种新的氯甲酸酯类荧光衍生试剂咔唑-9-乙基氯甲酸酯进行柱前衍生胺类化合物并通过荧光检测的方法进行高效液相色谱(HPLC)分析。衍生物的荧光激发和发射波长为λcr／λcrs=293/365nm。色谱柱：Hypersil BDS C18柱，柱温：35℃；流速：l mL/min；流动相A为水/乙腈(20／80，V／V)，流动相B为乙腈/水(95／5，V／V)。衍生试剂用量(mol)是胺类化合物总量的3～4倍时，衍生化产率最大且恒定。该方法具有检测灵敏度高，衍生化反应简单、快速、不受样品基质盐分的干扰，尤其适合天然生物样品，食品及饲料中的胺类化合物的分析。     

咔唑-9-乙氧基碳酰肼柱前衍生中性糖的高效液相色谱分析

采用一种新型紫外、荧光衍生试剂咔唑-9-乙氧基碳酰肼(EEOC-Hydrazlde)对5种中性糖(乳糖,甘露糖,葡萄糖,鼠李糖和山梨糖)进行柱前衍生,并通过紫外、荧光检测的方法进行高效液相色谱(HPLC)分析。结果表明：反应温度65℃,时间6．5h,醋酸含量为3．5％(V／V)的条件下,衍生产率可达最大。衍生物的激发和发射波长为λex／λem=293／360nm,紫外检测波长254nm。检出限范围15-60fmol。该方法具有检测灵敏度高,衍生化反应简单,适合糖类化合物的分析。     

反相高效液相色谱法测定鼠胆汁中游离与结合型胆汁酸

建立了一种柱前衍生反相高效液相色谱荧光检测大鼠胆汁中游离与结合型胆汁酸的方法.以4-溴甲基-7-甲氧基香豆素为衍生剂,月桂酸为內标,Waters Nova C18色谱柱分离,采用甲醇/乙腈和水梯度洗脱,荧光激发波长(λex)330 nm,发射波长(λem)400 nm,內标标准曲线法定量.各胆汁酸在5-2 400μmol/L范围内线性良好,r为0.998 9-0.999 7.最低检出限为1.2-2.5μmol/L.精密度日内在1.05%-3.67%之间,日间在3.16%-6.83%之间.平均回收率为87.8%-106.7%.该方法灵敏、重复性好,分析时间短,线性范围宽,适合于科研工作中对鼠胆汁中各胆汁酸进行定量检测.     

柱前衍生-高效液相色谱分离测定及质谱鉴定脂肪胺

采用新型荧光衍生试剂2-(2-苯基-1-氢-菲[9,10-d]咪唑)-乙酸(PPIA)进行柱前衍生,经荧光检测实现了脂肪胺的高效液相色谱(HPLC)分离测定及柱后质谱鉴定。60℃下在乙腈溶剂中用N-乙基-N′-[(3-二甲氨基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)做缩合剂,衍生反应15min可获得稳定的荧光产物。脂肪胺衍生物荧光检测波长为380nm(激发波长为260nm)。在EclipseXDB-C8色谱柱上,采用梯度洗脱对12种脂肪胺衍生物进行了优化分离,测定了造纸厂废水、大鼠端脑和酸奶中脂肪胺的含量。经柱后在线质谱大气压化学电离源(APCISource)正离子模式实现了各种脂肪胺衍生物的质谱鉴定,借助对活性中间体的质谱解析确定了衍生反应的反应机理。该方法具有良好的重现性和回收率,多数脂肪胺的线性回归系数大于0.9996;检出限为3.1~18fmol(S/N=3∶1)。     

柱前荧光衍生脂肪醇的高效液相色谱分离及质谱鉴定

利用新型荧光试剂1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙酸（BCAA）作为柱前衍生化试剂,以乙腈为溶剂,1-乙基-3-（3-二甲氨基丙基）环己碳二亚胺（EDAC）作为缩合剂,4-二甲氨基吡啶（DMAP）为催化剂,55℃下衍生反应25 min后获得稳定的荧光产物。在Eclipse XDB-C8色谱柱上,通过梯度洗脱对12种游离脂肪醇进行了分离和在线质谱定性。激发和发射波长分别为λex=333 nm,λem=390nm。采用大气压化学电离源（APCI）正离子模式,对洗发水（含十二烷基硫酸钠）中游离脂肪醇进行定性及测定。脂肪醇的线性回归相关系数大于0.9997,检出限在9.40-25.32 fmol。     

柱前衍生-荧光检测-高效液相色谱-质谱法测定尿中游离多胺

用新型荧光试剂1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙基氯甲酸酯作为柱前衍生化试剂,在乙腈中,以pH 9的硼酸钠缓冲溶液为催化剂,40℃下衍生反应10 min后获得稳定的荧光产物.在Eclipse XDB-C8色谱柱上,通过梯度洗脱对5种多胺进行了分离和在线质谱定性.激发波长(λex)和发射波长(λem)分别为333 nm和390 nm.采用大气压化学电离源(APCI)正离子模式,实现了人尿中游离多胺的质谱定性及荧光定量测定.检出限(3S/N)在4.98～9.31 fmol.此方法应用于尿样中多胺的测定,并测得回收率在94%～98%之间.     

大鼠血浆中痕量氨基酸的柱前衍生-高效液相色谱串联质谱测定

以1,2-苯并-3,4-二氢咔唑-9-乙基氯甲酸酯(BCEOC)作为柱前荧光衍生试剂,在Hypersil BDS C18(4.6mm×200mm,5μm)反相色谱柱上,荧光检测波长为390nm(激发波长为333nm),采用梯度洗脱实现了20种氨基酸标准品衍生物的分离检测。20种组分的线性范围为51.6fmol~105.6pmol,线性回归系数均大于0.9995;检出限为6.3~177.6fmol(S/N=3∶1)。经柱后串联质谱电喷雾电离源(ESISource)实现了各组分的质谱鉴定,并以酪氨酸(Tyr)衍生物为例进行了质谱裂解机理解析。对A、B、C三组(A:安静对照组;B:运动力竭即刻组;C:力竭恢复12h组)24只大鼠血浆中氨基酸的定量测定结果表明,运动力竭即刻较安静状态大鼠血浆氨基酸含量明显增加;力竭恢复12h后血浆氨基酸水平基本恢复到运动前状态。方法的灵敏度高、重现性好,为大鼠血浆中氨基酸的测定提供了一种新方法。     

N-羟基琥珀酰亚胺-3-吲哚乙酸酯柱前衍生高效液相色谱分离及荧光测定肽及其水解物

本文首次报道了一种新的羧酸活性酯试剂,N-羟基琥珀酰亚胺-3-吲哚乙酸酯作为柱前荧光衍生试剂,流动相为10mmol/L柠檬酸-Na₂HPO₄－pH 3.6的甲醇/水(20/80,V/V)溶液,C₁₈柱,于λ_cx/λ_cm＝278nm/355nm处进行荧光检测,高效液相色谱分离测定了谷胱甘肽、二甘肽、谷氨酸、胱氨酸、甘氨酸.当S/N＝3时,检出限为0.2至2.5Pmol.     

柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成

报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。采用反向高效液相色谱250nm紫外检测和使用梯度洗脱，6种还原单糖的1－苯基－3－甲基－5－吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。对单糖组成的定量测定进行了方法学考察，建立了单糖组成分析的数据分析方法，并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析，获得良好的重复性。     

2，4－二硝基氯苯衍生化法在反相高效液相色谱测定氨基酸中的应用研究

研究了采用２，４－二硝基氯苯（ＣＤＮＢ）作衍生化试剂，用于反相高效液相色谱（ＲＰ－ＨＰＬＣ）测定氨基酸的方法。衍生化反应条件为在碱性溶液中８０℃１小时，制得１７种ＤＮＰ－氨基酸。采用甲醇－醋酸盐缓冲系统梯度洗脱，５０分钟内大多数氨基酸可较好地分离。衍生化产物性质稳定，３６０ｎｍ波长处紫外检测，１７种氨基酸的最低检出限为２μｇ。     

柱前衍生高效液相色谱测定小儿复方氨基酸注射液中氨基酸

建立了高效液相色谱(HPLC)测定小儿复方氨基酸注射液中各种氨基酸含量的方法.采用Kromasil C18(250×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以2,4-二硝基氟苯为衍生试剂,梯度洗脱.流动相A为乙腈∶水(50∶50,V/V),流动相B为0.04 mol/L的磷酸二氢钾溶液(pH=6.8);流速为1.0 mL/min;检测波长为360 nm.所测氨基酸的线性范围为0.008～0.2213 mg/mL,平均回收率在97.85%～102.86%之间.     

柱前衍生高效液相色谱法测定血清中克拉霉素的含量

建立了2，4-二硝基苯肼柱前衍生反相高效液相色谱紫外检测法测定血清中克拉霉素的含量，将在碱性条件下甲基叔丁基醚的血清萃取物，与2，4-二硝基苯肼在55％酸性条件下反应30min，然后用乙腈-0．05mol/LpH7．2磷酸盐缓冲液（48：52）在Alltima C18色谱柱上进行分离，在340nm检测衍生物。方法的线性范围为0．05～3．2mg／L（r=0．9993）；检出限为30μg/L，绝对回收率大于89％，相对标准差小于10％。本方法已用于克拉霉素在健康受试者中的药代动力学研究。